动脉闭塞性疾病动物模型的构建的制作方法

专利名称：动脉闭塞性疾病动物模型的构建的制作方法
技术领域：
本发明涉及动脉闭塞性疾病动物模型的构建方法、用于该方法的试剂盒(kit)或系统，以及通过该方法或该系统得到的动脉栓塞动物模型。尤其涉及以通过特定部位的结扎或者自体血凝块使动脉闭塞为特征的非人的动脉闭塞性疾病动物模型的构建方法、用于该方法的试剂盒或系统，以及通过该方法或该系统得到的动脉栓塞动物模型。
背景技术：
以往，在循环系统或脏器移植等医学研究，或者循环系统疾病的药品开发中多使用心肌梗塞等心脏疾病模型。近年来，这些心脏疾病模型也开始用于再生医疗的研究中。
对于目前的心肌梗塞模型，例如作为心肌梗塞模型的构建方法，通常采用经开胸术的冠状动脉的结扎法，但是以往的结扎法中在刚处理后引起心室纤维性颤动，致死概率极高。因此，多采用使用缩窄环(ameroid ring)(通过体液的吸收，成为环状的cadein成分膨胀，在2周左右的时间缓慢闭塞血管的方法)的模型构建方法。该方法中存在的问题是闭塞程度出现离差，非梗塞例与不完全梗塞例均可出现，在稳定的病态模型方面有缺点。另外，还存在在较短时间内(例如，处理后1个月)的致死率高的问题。
因此，在循环系统和脏器移植等医学研究中，或者在循环系统疾病的药品开发中，以及在再生医疗的研究中，需要开发没有上述缺点的心肌梗塞模型。
动脉栓塞可导致各种疾病·障碍，但是仍不能说已经确定了对这些疾病·障碍的治疗方法。动脉栓塞导致的疾病·障碍的典型示例为心肌梗塞和脑卒中。脑卒中是在包括日本的发达国家中排名靠前的死亡原因，特别是在急性期的治疗法中期待有效的溶栓剂和神经保护剂等，但是这些药剂多在临床试验中以失败告终，显示出有效性的药剂非常少。同样的现状也存在于由动脉栓塞导致的其它疾病·障碍中。作为其原因之一，在以往的药剂开发中使用大鼠、小鼠等啮齿类动物，药效的“种间差异”很大。因此，希望在作为与人接近的动物的灵长类动物或中·大型哺乳动物中构建更接近于临床病态的病态模型，来进行评价。目前为止，已经使用猴子、猫、犬、猪等中·大型动物进行了一些缺血模型的构建，虽然它们作为方法显示了临床病态的侧面，但没有被认为是与实际临床相当的模型。特别是由于在急性脑缺血中对中脑动脉、颈内动脉、椎骨·脑底动脉等颅内动脉闭塞的病态(急性脑主动脉闭塞症)的预后差(死亡率10-15％)、多发病于中·轻年等，因此迫切希望有效且低合并症率的治疗战略，利用该病动物模型的基础研究成为要务。
以往的动脉闭塞动物模型，特别是脑主动脉闭塞动物模型的构建方法大致分为血管压迫法、血管内塞栓子法两种方法。前者通过开颅手术或者眼窝摘除术(参考非专利文献1等)等侵入式方法利用夹子或结扎等使目标主动脉闭塞，因此以闭塞中脑动脉水平部位的方法为代表。在中脑动脉闭塞模型中已经知道了一些中·大型动物的代表性缺血模型，但是大多数的障碍部位仅限于脑基底核，可以引起临床作为脑功能障碍的原因部位而最多出现问题的脑皮质的障碍的示例却很少。实际上，在这些动物模型的行为评价中，永久性麻痹的出现极少。另一方面，作为血管塞栓法，已知用塑料、硅酮、血凝块等闭塞血管的模型(参考非专利文献2以及3)，但是由于缺少确认准确注入至脑主动脉的方法以及评价缺血的方法，因此，在脑缺血部位的分布、病态方面存在离差，难以进行选择性且定量性的实验。
如上所述，在以往的血管塞栓法中存在以下缺点血管塞栓的确实性以及塞栓形成后的缺血的确实性低，其程度也存在离差，缺乏定量性。而且还存在对动物的侵入性大、对动物的伤害大的缺点。如果可以获得克服这些缺点的动物模型，将促进对包括脑卒中的由动脉栓塞引起的疾病·障碍的研究，也将引起这些疾病·障碍的新的治疗方法的发现。另外，克服这些缺点的动物模型对于由动脉栓塞导致的疾病·障碍的治疗、预防用新药的开发以及再生医疗的研究非常有用。
非专利文献1Hudgins WR等，Stroke.1970 Mar-Apr；1(20)107-11非专利文献2Watanabe O等，Stroke 861-70，1975非专利文献3Kito G等，J Neurosci Methods.2001 Jan 30；105(1)45-53发明的揭示本发明要解决的课题是开发一种可以得到闭塞程度的离差小、动物的致死率低、稳定病态的心肌梗塞模型的构建方法。其另一课题为开发一种血管栓塞形成以及之后的缺血的确实性高、其程度的离差小、可进行选择性且定量性的分析的血管栓塞动物模型的构建方法。另外，本发明的又一课题为开发一种对动物的侵入性小，对动物的伤害性小的血管栓塞动物模型构建方法。
本发明人鉴于上述课题进行了重复的认真研究，结果发现，通过特定部位的结扎或自体血凝块使动脉闭塞，可以解决上述课题，于是完成了本发明。
即，本发明人发现，如果将需要闭塞的动脉部位的下游血管结扎之后，在需要闭塞部位达到动脉的完全闭塞，则会得到动物的致死率低、且稳定的心肌梗塞模型。
另外本发明人还发现，将经凝固剂凝固的自体血凝块送至动脉内形成塞栓时，通过使用脑血管摄影装置，可以利用血凝块使动脉的希望部位选择性闭塞，可以得到解决上述课题的动脉栓塞动物模型。
即，本发明提供了(1)非人的动脉闭塞性疾病模型动物的构建方法，其中，通过特定部位的结扎或者自体血凝块使动脉闭塞；(2)如(1)所述的方法，其中，在非人的实验动物中，将需要闭塞的心脏动脉部位的下游血管结扎，接着，使动脉在该需要闭塞的部位闭塞，得到心肌梗塞动物模型；(3)如(2)所述的方法，其中实验动物为猪；(4)如(2)或(3)所述的方法，其中，结扎使用缝合线或夹子来实施，闭塞使用缩窄环来实施；(5)用于构建心肌梗塞动物模型的试剂盒，其中该试剂盒包括动脉闭塞用器具以及动脉结扎用器具作为必要成份，并且在(2)～(4)中任一项所述的方法中使用；(6)心肌梗塞动物模型，其由使用(2)～(4)中任一项所述的方法或(5)所述的试剂盒获得；另外，本发明还提供了(7)如(1)所述的方法，其中，向取自非人动物的自体血中添加凝固剂制成自体血凝块，再将自体血凝块送达至目标动脉内腔，以及将自体血凝块送达至动脉内腔时使用血管摄影装置，获得动脉塞栓动物模型；(8)如(7)所述的方法，其中，自体血凝块为长轴形状；(9)如(7)或(8)所述的方法，其中，血管摄影装置为X-射线血管造影装置；(10)如(7)～(9)中任一项所述的方法，其中，还将自体血凝块浸渍在碘类试剂中，使其通过血管造影装置可视；(11)如(7)～(10)中任一项所述的方法，其中，动脉为脑或心脏的动脉；(12)如(7)～(11)中任一项所述的方法，其中，还使用正电子发射断层摄影术(PET)，确认血流状态；(13)用于构建动脉栓塞动物模型的系统，其包括利用凝固剂的自体血凝块形成器具、将自体血凝块送达至动脉的器具以及血管摄影装置作为必要成分，并且在(7)～(12)中任一项所述的方法中使用；(14)如(13)所述的系统，其中还包括PET装置；(15)心肌梗塞动物模型，其由使用(7)～(12)中任一项所述的方法或者(13)或(14)所述的系统获得。
本发明提供了心肌梗塞模型的构建方法，该模型可以完全闭塞主动脉、动物的致死率低、可得到稳定病态，以及用于该方法的试剂盒。另外，本发明还提供了血管塞栓动物模型的构建方法，该模型血管塞栓的确实性高、其程度的离差小、可以定量分析。使用本发明方法可以减小对动物的侵入性、减少对动物的伤害性。
附图的简单说明


图1显示本发明的方法的处理部位(左图)以及显示个体的心肌梗塞状态的照片(右图)。左侧图的箭头A表示缩窄环的安装部位，箭头B表示结扎部位，以与包含斜线的纸面相垂直的面进行切片。在右图的圆圈所示的部位可见纤维化。右上图为显示处理后的心脏的外观的照片，右下图为显示以1cm间隔的心脏切片的照片。
图2为本发明的方法和以往方法中，直到处理后1个月的动物的生存数(上图)以及生存率(下图)的示图。
图3显示了比较采血后24小时的血凝块的照片(左图，上面为对照、中部为ADP添加系、下部为凝血酶添加系)以及将血凝块浸渍在聚乙烯吡咯烷酮-碘溶液后的普通照片(右图上部)和X射线照片(右图下部)。
图4为闭塞前(左图)以及利用自体血凝块刚进行左中脑动脉闭塞之后(右图)的脑血管X射线摄影像。
图5为显示闭塞后的脑血流(上部)、氧摄取率(中部)、氧代谢(下部)的经时变化的PET图像。从左侧开始表示15、30、60、120、180分钟之后的图像。
实施发明的最佳方式本发明的1个方式提供了非人动脉闭塞性疾病模型动物的构建方法，其中，通过特定部位的结扎或者自体血凝块使动脉闭塞。
在上述方式的1个具体例中，本发明提供了心肌梗塞动物模型的构建方法，其中，在非人的实验动物中，将需要闭塞的心脏动脉部位的下游血管结扎，再使动脉在该需要闭塞的部位闭塞。
本发明中使用的动物只要是实验动物(当然是非人的)，可以采用任一种实验品种，实验动物可以适当选择。作为实验动物的示例，可例举如猪、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、犬、猫、猴、牛、马、绵羊等。其中，近年来通用的缺乏侧枝血管的猪对本发明尤其有用。猪在(1)生理学和解剖学特征；(2)由食性决定的与消化吸收相关的生理；以及(3)冠状动脉的分布、动脉内皮结构等特性方面与人类相似的方面很多，从近年的动物福利问题(animal welfare)的观点来看，猪也是适于本发明的动物。其中，小型猪由于遗传背景明确，因此是特别适于本发明的动物。
适于本发明的方法以及试剂盒的脏器为心脏。
本说明书中“闭塞”是指通过实施例记载的方法测定的闭塞率通常在80％以上，优选在90％以上。
需要闭塞的动脉部位可以是任一部位，可以根据必要的病变位置、大小、程度以及使用动物的种类等因素来适当选择。典型的是，需要闭塞的动脉部位是与左侧冠状动脉的分支下游紧靠的前下降枝。
本发明的构建心肌梗塞模型的方法包括2个工序。首先，使用动脉结扎用器具，将需要闭塞的心脏的动脉部位的下游血管结扎。优选进行完全结扎。通过这样的局部结扎使整个心肌出现对缺血的耐受力是很重要的。作为动脉结扎用器具，以利用缝合线为代表，其它器具例如也可以使用夹子等。夹子优选为金属制的小型夹子。结扎部位只要是需要闭塞的动脉的末梢侧、即使完全结扎也不会引起纤维性颤动不会导致动物死亡的部位，则可以是任一部位，优选为前下降枝的紧靠第二分支后的部位。在该结扎之后，经一定时间后使用动脉闭塞用器具使需要闭塞的动脉部位闭塞。即，确认了整个心肌对缺血的耐性之后进行闭塞。一般，结扎后经约30分钟后，进行需要闭塞的动脉的闭塞处理。本发明的方法中，在闭塞中使用后述的缩窄环时，从结扎直到完全闭塞约为2周。闭塞处理24小时后的闭塞率取决于壁厚，但达到约60～70％。
接着，在需要闭塞的动脉部位，使用动脉闭塞用器具将需要闭塞的动脉部位闭塞。此时，优选为例如将利多卡因胶冻涂布在血管上来防止血管痉挛。作为动脉闭塞用器具，以利用缩窄环为代表，如果是花费相同的时间缓慢压缩血管使其闭塞的器具，也可以是其它的器具。闭塞之后进行闭胸，结束处理。闭胸可按照通常方法进行实施。
另外，本发明还提供了上述的心肌梗塞模型构建方法中使用的心肌梗塞模型构建用试剂盒。该试剂盒包括动脉闭塞用器具以及动脉结扎用器具作为必要成分。该试剂盒中通常附加有用于实施本发明的心肌梗塞模型构建方法的说明书。
通过本发明的上述方法或者试剂盒得到的心肌梗塞动物模型，具有稳定的病态，对于循环系统、脏器移植等或者再生医疗等的医学研究，或者循环系统疾病的药品开发等非常有用。
本发明的上述方式的又一具体示例中提供了非人的动脉栓塞动物模型的构建方法，其中，将添加了凝固剂得到的自体血凝块送达至动脉内形成栓塞，以及在该送达时使用血管摄影装置。
本发明的方法中使用的动物，只要是除人之外的哺乳动物，可以是任一的动物，作为优选的动物，可例举如啮齿类动物(大鼠、小鼠等)、灵长类动物(短尾猴、猩猩等)、犬、猫、猪等。
本发明可适用于动物的任一动脉。优选的是，将本发明的方法应用于脑或者心脏的动脉。
本发明的方法包括2个工序。第1工序为自体血凝块的制造工序。预先从对象动物采取血液，将其与凝固剂混合之后，孵化一定时间，得到充分固化状态的血栓。从动物的采血可按照通常方法来进行。例如，对于啮齿类动物可以从尾动脉进行采血。采血量可以根据动物的种类、处理目的等来适当选择。
需要送达的自体血凝块的形状优选为相对于血管为长轴形状。通过形成为长轴形状，自体血凝块成为合适于血管的形状以及走行性的形状，容易流动至血管末梢，可以在广泛区域的血管范围内制造血栓。为了得到长轴形状的自体血凝块，例如，将自体血与凝血块混合孵化时，将其填充至内径较处理中使用的容器更细的容器，例如在适当的试管内进行孵化。该孵化用的容器只要是对血液凝固没有不良影响的材质即可，例如可以是聚乙烯制的。孵化的时间以及温度可以为获得充分的固化而选择，可以根据动物的种类、自体血的状态、所希望血栓的特性，需要发生栓塞的动脉的种类或部位、希望疾病的程度等来适当变化。通常为，在对象动物的体温附近的温度孵化1天左右。这些孵化条件以及装置可以被本技术领域的技术人员容易地变更·选择。在此，凝固剂是指使自体血充分凝固以引起希望的栓塞的试剂，已知有各种试剂。例如，具有血小板凝集功能的ADP(二磷酸腺苷)、促进血纤维蛋白形成和血栓形成的凝血酶等。本技术领域的技术人员可以根据目的来适当选择·决定凝固剂的种类和浓度。例如，通过与30μg/ml至100μg/ml的ADP以及0.5％(w/v)至10％(w/v)的凝血酶在微温箱或在孵化箱中于37℃保存24小时，可以使自体血凝固。
本发明的方法的第2工序是将如上制成的自体血凝固块送达至希望血管部位形成栓塞的工序。对自体血凝固块的送达器具没有特别的限定，一般使用导管，根据通常的方法，使用与需要形成栓塞的动脉的内径向符合的导管，通过留置的护套插入，可以将导管留置在目标血管中。导管已知有各种，可以适当选择使用，优选使用血管摄影用导管。护套一般留置在大腿动脉中。在进行导管留置时，通过使用血管摄影装置将导管正确诱导至希望部位是非常重要的。这样，通过正确确定栓塞部位，可以在所得的模型中进行选择性且定量的病态的评价。目前使用各种各样的血管摄影装置，可以根据使用动物、使用目的等来适当选择。一般为X射线血管摄影装置。其中，优选为高分辨率的装置。使用X射线血管摄影装置时的造影剂已知有离子性、非离子性等各种造影剂，可以适当选择使用。将导管诱导至目标栓塞形成部位之后，通过导管流入如上制造的自体血凝块。此时，例如将血栓固化的细试管与直接注射针和装满生理盐水的注射筒相连，利用注射筒挤压生理盐水，可以使试管内的血栓排出。或者，例如通过事先将试管的尖端放置在导管入口，可以将血栓光滑地导入。通过脑血管摄影装置，例如使用了造影剂的X射线脑血管摄影可以确定血栓是否闭塞了目标血管。或者根据需要，通过将制成的血栓事先浸泽在含有碘类试剂的溶液中，可以在X射线脑血管摄影时确认血栓的残存。
另外，仅仅通过上述工序来闭塞血管，并不能确定实际上是否通过闭塞导致了缺血，因此通过使用PET确认血流、氧摄取能、氧代谢能等血流状态，可以确认处理后的缺血的状态，例如缺血的分布·程度等。PET装置可以使用目前的各种装置，可以适当选择使用。为确认缺血的测定项目可以由本技术领域的技术人员来适当选择，使用PET来测定这些项目的方法也是公知的。
另外，本发明还提供了非人动物的动脉栓塞模型构建系统，其中包括利用凝固剂的自体血凝块形成器具、将自体血凝块送达至动脉内的器具以及血管摄影装置作为必要成分。该系统用于本发明的动脉栓塞动物模型的构建方法中。利用凝固剂的自体血凝块形成器具，可以是包括例如凝固剂、孵化用容器的器具。将自体血凝块送达至动脉内的器具可以包括例如血管摄影用导管。血管摄影装置也可以是高分辨率X射线血管摄影装置。该系统还可以包括用于确认处理后的血流状态的PET装置。
由本发明的上述方法或者系统得到的动脉栓塞动物模型的血管栓塞的程度的离差小，因此可以定量解析。所以，由本发明得到的动脉栓塞动物模型对由动脉栓塞导致的疾病·障碍的治疗或预防的方法、对这些疾病的新药开发、或者再生医疗研究等非常有用。
以下，列举实施例更具体地说明本发明，实施例不应理解为本发明的限定。
实施例1猪慢性心肌梗塞模型的构建使用体重为20-25kg的雄性猪，麻醉后，将其以左胸部朝上的横卧位固定，给予抗凝剂肝素100IU/kg之后，将第3·4肋间切开，实施开胸。接着，使左前下降枝的第二分支以下部位暴露，利用缝合线进行完全结扎(参见
图1左图箭头B)。(在该部位的完全结扎不会引起纤维性颤动，不会导致死亡。通过进行该局部的缺血处理，可以引起整个心肌对缺血的耐性。)之后，将回旋枝与前下降枝的分支部的附近的前下降枝暴露，将利多卡因胶冻涂布在血管上以防止伴随处理出现的血管痉挛，之后再安装缩窄环(也称为AmeroidConstrictor，RESEARCH INSTRUMENTS，SW，Inc.；I.D.2.5mm)(参见
图1左图箭头A)。然后，按照规定的方法进行闭胸，结束处理。作为对照处理，使用事先不进行完全结扎的以往方法(仅进行由缩窄环的闭塞)，与上述同样在同一动脉部位实施闭塞处理。
按照上述进行本发明的处理的3个月后，考察动物的心脏的状态。在个体的心脏的心尖部位发现显著的纤维化，对于以1cm间隔切割的心脏切片，也发现了心肌内部的显著的纤维化(
图1右图)。这样的纤维化表示确实发生了梗塞。在经本发明的处理中，5只猪的心肌全部发现了同样的梗塞，显示了本发明的方法的稳定性·确实性。经本发明的处理时，各个体的闭塞率均在90％以上，离差小。与此相对，进行对照处理时的梗塞的发生不稳定·不确实，5只猪中仅有1只猪的心肌中观察到如
图1右图的梗塞。对照处理时的各个体的闭塞率为69.8％～100％，离差大。另外，在处理后3个月测定缩窄环安装部位前血管内腔面积以及缩窄环安装部位血管内腔面积，按照下式计算出闭塞率[(环安装部位前血管内腔面积-环安装部位血管内腔面积)/(环安装部前血管内腔面积)]×100(％)。
对于数量更多的猪同样地进行本发明的方法的处理和对照处理后生存率的考察。对于本发明的处理，直到处理后1个月，13例中12例生存，生存率超过90％(图2)。另一方面，对于对照处理，直到处理后1个月，19例中仅有6例存活，生存率低，约为30％(图2)。
这样，通过本发明可以克服以往的结扎法或者仅利用缩窄环进行闭塞的方法的缺点，即，闭塞的离差大、致死率高、不稳定的病态等。
实施例2血凝固剂以及凝固条件等的考察考察作为凝血剂使用ADP以及凝血酶的凝固程度。ADP浓度为30μg/ml、100μg/ml(均没有添加凝血酶)，凝血酶的浓度为0.5％(w/v)、10％(w/v)(均没有添加ADP)。从短尾猴的腹侧尾动脉进行采血，添加凝固剂或者不添加凝固剂地将血液加入至导管中。在37℃孵化24小时，之后将其押出观察凝固的状态。对照中没有添加凝固剂(仅使血液凝固)。将结果示于图3的左图。明确了ADP浓度越高，凝固越好。对于凝血酶，0.5％(w/v)、10％(w/v)得到同等程度的凝固。接着，将与100μg的ADP和10％(w/v)的凝血酶于37℃孵化24小时得到的血凝块浸泽在聚乙烯吡咯烷酮-碘溶液中，再进行X射线摄影。如图3的右图所示可知，确认了血凝块对应的影像，可以通过X射线摄影装置进行血凝块的位置确认。
实施例3急性脑主动脉栓塞模型的构建作为对象动物使用雄性短尾猴(体重约6kg)。用事先含有作为凝固剂的ADP(最终浓度100μg/mL)以及凝血酶(最终浓度10％(w/v))的注射筒从动物的腹侧尾动脉采取充分量(1ml)的血液，并立即将血液装入聚乙烯性试管(外径0.965mm、内径0.58mm)。将血液和凝固剂的混合物在试管内于37℃放置24小时，形成充分固化状态的血栓。接着，使用与动脉径相适应的极细的脑血管摄影用导管(3弗伦奇)(3 French)，并将其通过留置在大腿动脉的护套留置在目标脑血管(左中脑动脉)中。此时，使用高分辨率X射线脑血管摄影装置(Mobile C-Arm SERIES 9800TM，GE Yokogawa Medical Systems公司制造)并同时使用造影剂(欧乃派克350)来诱导导管。将导管诱导至目标部位之后，将如上制造的自体血凝块通过导管流入。此时，将血栓固化的细试管与直接注射针和装满生理盐水的注射筒相连，利用注射筒押出生理盐水，使试管内的血栓排出。通过事先将细试管的尖端插入至导管的入口，可以将血栓光滑地导入。通过使用了造影剂的X射线脑血管摄影来确认血栓是否闭塞了目标血管。在图4中显示了闭塞中脑动脉的结果。可以明确，从箭头所示的闭塞部位开始的下游血管中血液不流通(图4右图)。另外，由于实际上不清楚仅仅闭塞脑血管是否造成了脑缺血，因此同时利用PET(型号ECATEXACT 47，Siemens公司制)来测定脑血流、氧摄取率以及氧代谢，测定缺血的分布·程度(图5)。虽然在左中脑动脉范围可见一致的脑血流下降，但是氧代谢少并有维持的倾向，因此可知处于重度的缺血状态。
这样，通过本发明可以在希望部位选择性使血管确实闭塞，可以形成希望的缺血状态。另外，可以对如此造成的缺血状态进行定量解析和鉴别。另外，本发明由于对对象动物的侵入性低因此具有伤害小的优点。
产业上利用的可能性本发明的心肌梗塞模型构建方法和用于其的试剂盒，以及通过该方法或者该试剂盒得到的心肌梗塞动物模型，可以被利用在与动脉闭塞性疾病相关的研究、脏器移植等医学的研究、或者动脉闭塞性疾病的药品的开发中，以及与再生医疗相关的研究中。
权利要求
1.非人的动脉闭塞性疾病模型动物的构建方法，其中，通过特定部位的结扎或者自体血凝块使动脉闭塞。
2.如权利要求1所述的方法，其中，在非人的实验动物中，将需要闭塞的心脏动脉部位的下游血管结扎，接着，使动脉在该需要闭塞的部位闭塞，得到心肌梗塞动物模型。
3.如权利要求2所述的方法，其中实验动物为猪。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中，结扎使用缝合线或夹子来实施，闭塞使用缩窄环来实施。
5.用于构建心肌梗塞动物模型的试剂盒，其中该试剂盒包括动脉闭塞用器具以及动脉结扎用器具作为必要成份，并且在权利要求2～4中任一项所述的方法中使用。
6.心肌梗塞动物模型，其由使用权利要求2～4中任一项所述的方法或权利要求5所述的试剂盒获得。
7.如权利要求1所述的方法，其中，向取自非人动物的自体血中添加凝固剂制成自体血凝块，再将自体血凝块送达至目标动脉内腔，以及将自体血凝块送达至动脉内腔时使用血管摄影装置，获得动脉塞栓动物模型。
8.如权利要求7所述的方法，其中自体血凝块为长轴形状。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中血管摄影装置为X射线血管摄影装置。
10.如权利要求7～9中任一项所述的方法，其中还将自体血凝块浸泽在碘类试剂中，使其通过血管造影装置可视。
11.如权利要求7～10中任一项所述的方法，其中动脉为脑或心脏的动脉。
12.如权利要求7～11中任一项所述的方法，其中还使用正电子发射断层摄影术(PET)来确认血流状态。
13.用于构建动脉栓塞动物模型的系统，其包括利用凝固剂的自体血凝块形成器具、将自体血凝块送达至动脉的器具以及血管摄影装置作为必要成分，并且在权利要求7～12中任一项所述的方法中使用。
14.如权利要求13所述的系统，其中还包括PET装置。
15.心肌梗塞动物模型，其由使用权利要求7～12中任一项所述的方法或者权利要求13或14所述的系统获得。
全文摘要
本发明涉及非人的动脉闭塞性疾病模型动物的构建方法，其中，通过特定部位的结扎或者自体凝血块使动脉闭塞。本发明尤其涉及心肌梗塞模型的构建方法和用于其的试剂盒，以及通过该方法或者该试剂盒得到的心肌梗塞动物模型，该构建方法的特征在于，在非人的实验动物中，将需要闭塞的心脏动脉部位的下游血管结扎，接着，使动脉在该需要闭塞的部位闭塞。另外，本发明还涉及非人动物的动脉栓塞动物模型的构建方法和用于其的系统，以及通过该方法或者该系统得到的动脉栓塞动物模型，该构建方法的特征在于，向自体血中添加凝固剂制成自体血凝块，然后在将自体血凝块送达至动脉内时使用血管摄影装置。
文档编号A61D7/00GK101056535SQ200580038838
公开日2007年10月17日 申请日期2005年9月12日 优先权日2004年9月13日
发明者饭田秀博, 大田洋一郎, 寺本升, 林拓也 申请人:财团法人日本健康科学振兴财团