专利名称：：新型猪用生长调节剂的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种畜禽伺养饲料添加剂的生产方法，特别是一种专用于食用猪生长调节剂的制备方法。二
背景技术：
：目前，我国养猪生产、尤其是地方品种猪生产中普遍存在生长速度慢、胴体背膘过厚、瘦肉率低等问题，严重制约我国养猪业的高效发展。因此，提高地方品种猪的生长速度、减少脂肪过度沉积、提高胴体品质是养猪生产中亟待解决的重大问题。近年来，多种药物添加剂、激素类生长物质的过度和不规范使用，虽然在一定程度上提高了养猪生产的经济效益，但其在猪肉产品中的残留已严重威胁着人类的健康，因此生猪的健康养殖和安全优质猪肉产品的生产是目前养猪业努力实现的目标。环腺苷一磷酸(adenosine-3，，5，-monophosphate,cAMP)是动物体内天然存在的、对生长和代谢具有重要调节作用的细胞因子，由于其只能在细胞内发挥作用，因而难以在生产中应用。二
发明内容本发明的目的是提供一种新型猪用生长调节剂的制备方法，利用研究发现的DBC(N6-2'-O-dibutyryladenosine-3'，5，-monophosphate)属cAMP的衍生物，具有亲脂性，可通过细胞膜在细胞内发挥作用，与cAMP具有相同的生理作用和作用机制。外源的DBC在体内发挥作用后，多余的可被磷酸二酯酶降解，不会在动物体内残留，与其他化学药物添加剂相比具有重高的安全性。通过制备DBC制剂与辅剂配合研制成可经饲料添加或皮下注射的制剂，并经动物试验验证具有稳定性好、安全性高、效果明显的新型猪用生长调节剂。一种新型猪用生长调节剂的制备方法，制备步骤如下(1)制备cAMP以ATP为原料，加入Ba(0H)2，溶于蒸馏水中，于96。C回馏加热40min，然后迅速冷却至室温，离心后取上清液即为cAMP样品；(2)cAMP成盐cAMP、0.4mol/L三乙胺和无水吡啶按1:7.2:5.3(w/v/v)比例加入，冰冻下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室温减压抽去过剩的三乙胺至无臭味为止，在55。C温度下，继续减压浓縮成黄色油状物，加入无水吡啶，振摇脱水，在55。C下继续减压抽去吡啶，再用无水吡啶重复脱水1次，于55"C减压抽干至成海绵状物，干燥后即得cAMP三乙胺盐；(3)酰化和水解cAMP三乙胺盐、重蒸丁酐、无水吡啶和蒸馏水按1:7.5:15:6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺盐中加入无水吡啶和重蒸丁酐，振摇，置35-4(TC恒温室密闭避光反应一周，反应完全后取出反应液，冷却至l(TC以下，缓慢加入蒸馏水，并使水解时温度保持在l(TC以下，结束后将水解液置冰浴中放置使反应完全，然后在5(TC以下减压浓縮，加约2倍量乙醚混匀，于2(TC下用约3倍量蒸馏水分7次抽提，去乙醚层，合并水层，在40。C以下减压浓縮使成黄色糖浆状物，再用乙醚提取2次，室温抽去剩余乙醚，用无水乙醇溶解，即得DBC。(4)制备DBC钠盐DBC、氯化钠、无水乙醚和无水乙醇按1:0.265:9.5:0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化钠溶液，充分混匀后室温减压浓縮至干，加l/5无水乙醚湿润，抽干后干燥过夜，次日用无水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的无水乙醚，置冷室l小时后过滤，滤饼用无水乙醚洗涤，减压干燥后即得DBC钠盐。(5)DBC结构的鉴定经质谱扫描分析鉴定，产品的分子式为C18H23N508PNa，分子量为490.0。(6)DBC的性质DBC钠盐为白色结晶状粉末，可溶于水和乙醇，不溶于乙醚；对热和酸碱较稳定，加热至50-85。C其含量不受影响，加热至90。C以上开始受到破坏，加热至IO(TC其含量仍保留75%，加热至ll(TC以上时明显受到破坏，含量降到20%以下；在pH3-IO范围内比较稳定，在pH3-5范围内表现出最高的活性。本发明将DBC钠盐与不同辅剂按不同比例混合后可经词料添加和皮下注射的DBC生长调节剂。经动物实验证明饲料添加和皮下注射DBC调节剂可被动物有效吸收，稳定性好，显著提高猪的生长性能、改善胴体品质，并且不会在动物体内残留，与其他化学药物添加剂相比具有重高的安全性。三具体实施例方式一种新型猪用生长调节剂的制备方法，其步骤如下(1)制备cAMP以ATP为原料，加入Ba(0H)2，溶于蒸馏水中，于96。C回馏加热40min，然后迅速冷却至室温，离心后取上清液即为cAMP样品；(2)cAMP成盐cAMP、0.4mol/L三乙胺和无水吡啶按1:7.2:5.3(w/v/v)比例加入，冰冻下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室温减压抽去过剩的三乙胺至无臭味为止，在55"温度下，继续减压浓縮成黄色油状物，加入无水吡啶，振摇脱水，在55。C下继续减压抽去吡啶，再用无水吡啶重复脱水1次，于55"减压抽干至成海绵状物，干燥后即得CAMP三乙胺盐；(3)酰化和水解cAMP三乙胺盐、重蒸丁酐、无水吡啶和蒸馏水按1:7.5:15:6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺盐中加入无水吡啶和重蒸丁酐，振摇，置35-40。C恒温室密闭避光反应一周，反应完全后取出反应液，冷却至l(TC以下，缓慢加入蒸馏水，并使水解时温度保持在l(TC以下，结束后将水解液置冰浴中放置使反应完全，然后在50。C以下减压浓縮，加约2倍量乙醚混匀，于20。C下用约3倍量蒸馏水分7次抽提，去乙醚层，合并水层，在4(TC以下减压浓縮使成黄色糖浆状物，再用乙醚提取2次，室温抽去剩余乙醚，用无水乙醇溶解，即得DBC。(4)制备DBC钠盐DBC、氯化钠、无水乙醚和无水乙醇按1:0.265:9.5:0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化钠溶液，充分混匀后室温减压浓縮至干，加l/5无水乙醚湿润，抽干后干燥过夜，次日用无水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的无水乙醚，置冷室l小时后过滤，滤饼用无水乙醚洗涤，减压干燥后即得DBC钠盐。(5)根据词料添加和皮下注射两种不同的使用方法，选择不同的辅剂按比例与DBC混合，制成不同的制剂。饲料添加DBC调节剂DBC钠盐(固体)辅剂1=1:5(w/w)，混匀后添加于词料中使用，为白色粉状制剂。皮下注射DBC调节剂DBC邻盐(液体)辅剂2=l:2(v/v)，混匀后分装灭菌，皮下注射使用，为无色透明液体。动物实验1、DBC的吸收特性选择断奶仔猪12头，公母各一半，随机分为2组，每组6头。第一组在基础日粮中添加DBC制剂20ppm，第二组皮下注射DBC制剂1.Omg/kg体重。分别于采食和注射后0.5h、1.Oh、3.Oh、5.Oh、8.Oh、12.Oh、17.Oh、24.Oh、34.Oh、48.Oh、67,Oh、72.Oh、96.Oh前腔静脉采血5ml，测定血浆中DBC的含量。结果表明，饲料添加后3小时血液中DBC达到最大浓度，为84.75pmol/ml;皮下注射后2小时血液中DBC达到最大浓度，为92.96pmol/ml;之后血液中DBC的浓度逐渐下降，在96h达到最低水平。证明饲料添加和皮下注射DBC可被动物有效吸收。2、DBC对猪生长性能的调控选择30kg体重的断奶仔猪42头，随机分为7组，每组6头。I、II和III组分别皮下注射DBC制剂0.5、1.0和1.5mg/kg体重；IV、V和V工组分别饲料添加DBCIO、20和30ppm，VH为对照组，饲喂基础日粮。试验至90kg体重时结束。DBC对猪生长性能的调节见表1。表lDBC猪生长性能的调节<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注同行肩标小写字母不同者差异显著(p<0.05)。从表中结果可见，n、m组和v、vi组比vn组日增重分别提高ii.83%、i3.12%(P<0.05)和11.21%、12.24%(P<0.05)，II、III组比I组日增重分别提高8.71%和9.92%(P<0.05)，V、Vl组比IV组日增重分别提高5.04y。和5.43%(P<0.05)。n、III组和V、VI组比VII组料重比分别降低18.73%、14.83呢(P〈0.05)和19.62%、18.73%(P<0.05)。证明饲料添加和皮下注射DBC制剂可显著提高猪的生长性能，且以皮下注射l.Omg/kg体重和词料添加20ppm作用效果最好，两种使用方法对猪生长性能的调节无显著差异。3、DBC对猪胴体组成的影响试验至90kg体重结束时屠宰，通过屠宰试验测定猪的胴体组成。DBC对猪胴体组成的影响见表2。表2DBC对猪胴体组成的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注同行肩注小写字母不同者差异显著(p<0.05)。表2的结果表明，II、III组和V、VI组比VII组眼肌面积分别提高31.99%、35.97%(P〈0.05)和36.39%、37.15%(P<0.05)，背膘厚分别降低19.95%、21.21%(P<0.05)和20.97%、20.50%(P〈0.05)，瘦肉率分别提高12.42%、13.87%(P〈0.05)和11.94%、15.52%(P<0.05)。证明DBC制剂能显著改善猪的胴体组成，且以皮下注射1.Omg/kg体重和饲料添加20ppm效果最好，两种使用方法对猪胴体组成的影响无显著差异。权利要求1、一种新型猪用生长调节剂的制备方法，其特征在于制备步骤如下(1)制备cAMP以ATP为原料，加入Ba(OH)2，溶于蒸馏水中，于96℃回馏加热40min，然后迅速冷却至室温，离心后取上清液即为cAMP样品；(2)cAMP成盐cAMP、0.4mol/L三乙胺和无水吡啶按1∶7.2∶5.3(w/v/v)比例加入，冰冻下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室温减压抽去过剩的三乙胺至无臭味为止，在55℃温度下，继续减压浓缩成黄色油状物，加入无水吡啶，振摇脱水，在55℃下继续减压抽去吡啶，再用无水吡啶重复脱水1次，于55℃减压抽干至成海绵状物，干燥后即得cAMP三乙胺盐；(3)酰化和水解cAMP三乙胺盐、重蒸丁酐、无水吡啶和蒸馏水按1∶7.5∶15∶6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺盐中加入无水吡啶和重蒸丁酐，振摇，置35-40℃恒温室密闭避光反应一周，反应完全后取出反应液，冷却至10℃以下，缓慢加入蒸馏水，并使水解时温度保持在10℃以下，结束后将水解液置冰浴中放置使反应完全，然后在50℃以下减压浓缩，加约2倍量乙醚混匀，于20℃下用约3倍量蒸馏水分7次抽提，去乙醚层，合并水层，在40℃以下减压浓缩使成黄色糖浆状物，再用乙醚提取2次，室温抽去剩余乙醚，用无水乙醇溶解，即得DBC。(4)制备DBC钠盐DBC、氯化钠、无水乙醚和无水乙醇按1∶0.265∶9.5∶0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化钠溶液，充分混匀后室温减压浓缩至干，加1/5无水乙醚湿润，抽干后干燥过夜，次日用无水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的无水乙醚，置冷室1小时后过滤，滤饼用无水乙醚洗涤，减压干燥后即得DBC钠盐。全文摘要本发明公开一种新型猪用生长调节剂的制备方法中是以ATP为原料，加入Ba(OH)<sub>2</sub>溶于蒸馏水中，于96℃回馏加热40min，冷却离心后得cAMP；再将cAMP、0.4mol/L三乙胺和无水吡啶按比例生成cAMP三乙胺盐，经酰化和水解制备出DBC；DBC、氯化钠、无水乙醚和无水乙醇按比例生成DBC钠盐。将DBC钠盐与不同辅剂按比例混合制备成饲料添加和皮下注射的DBC生长调节剂。经动物实验证明饲料添加和皮下注射DBC调节剂可被动物有效吸收，稳定性好，显著提高猪的生长性能、改善胴体品质，并且不会在动物体内残留，与其他化学药物添加剂相比具有重高的安全性。文档编号A23K1/16GK101429223SQ20071006635公开日2009年5月13日申请日期2007年11月5日优先权日2007年11月5日发明者勇刘,曦张,程美玲,高士争申请人:云南农业大学