专利名称：：生物毒素吸附剂及其生产方法
技术领域：
：本发明涉及生物毒素吸附剂及其生产方法。
背景技术：
：每年，用作动物饲料的粮食原料有很大一部分被霉菌产生的毒素污染。饲料的营养值降低和动物中毒事件都是由于粮食或其他饲料原料在储存时滋生了霉菌，如黑曲霉，黄曲霉毒素和青霉。霉菌毒素会影响祠料的营养价值，动物的生产性能以及动物健康状况。霉菌毒素的物理作用很多，从减少祠料摄入量，降低饲料转化率到总体减低动物生长能力。霉菌毒素也会危害人体健康，因为随着动物才聂食许多毒素进入了奶或肉中。霉菌毒素引发的急性症状相对容易确认。但慢性症状如生产力略孩支降低和/或免疫抑制可能带来较大的经济损失。处理这些毒素的传统方法是在詞料储存过程中使用霉菌抑制剂来抑制霉菌的生长。但是，特别在家畜产业中，经济条件迫使人们必须找到合理的处理方法来4吏用这些#皮霉菌污染的祠*牛。目前去除饲并牛中霉菌毒素的方法有4艮多，常身见方法包4舌用未污染的饲并+对已一皮污染的饲料进行稀释；物理分离以除去一皮严重污染的伺料；氨化或加热使饲料脱毒。使用常规方法去除霉菌毒素存在劳动强度大，不经济，而且对某些霉菌无效的缺点。一种更可行的方法是在饲料中加入能吸附毒素的物质，乂人而防止毒素祐L吸收进入动物血管。许多化学物质已经祐j正明能成功4殳入商业使用。其中，使用矿性粘土作为黏附剂最常见。美国专利No.5149549<吏用高岭石，一种特木的斑脱土，与饲料混合作为毒素吸附剂。中国专利CN02111097.2公开了一种吸附饲料中霉菌毒素的纳米铜料添加剂的制备方法。它的步骤如下l)按重量比为纳米蒙脱石，氯化钠按一定的比例，加水搅拌均匀，制成矿浆，然后在矿浆中加入葡甘露聚冲唐，制成毒素吸附剂产品。然而，使用黏土作为毒素吸附剂也有一定的限制。首先，为达到明显的吸附毒素的效果，4吏用的翻附剂必须达到相当高的浓度。其次，大多数黏附剂的作用范围也有限制，仅对黄曲霉毒素有显著的吸附凌丈果。近年来，有人4是出以葡甘露糖作为毒素的吸附剂。虽然葡甘露糖对毒素具有一定的生物吸附作用，但是大多数葡甘露糖是从魔芋等植物中提取，其溶解性不佳，与霉菌毒素的接触面积较小，对广{普霉菌毒素的吸附效果尚不太理想。因此，需要一种能作用于多种毒素、以较低含量与饲料混合且具有良好吸附效果的新型毒素吸附剂。
发明内容本发明主要是提供一种方法来结合动物饲料中的霉菌毒素并4吏之失活。进一步的目的是提供一种方法，即将酵母细胞壁提取物和矿性黏土(如沸石，斑脱土，铝硅酸盐)结合起来，以吸附动物饲并牛中的霉菌毒素并使之失活，从而降低飼料中霉菌毒素含量。另一目的就是毒素吸附剂产品可在低于其它常用黏附剂使用浓度的浓度与动物饲津+混合。为了达到以上各目的，本发明提供一种生物毒素吸附剂，包括1%-10%重量、优选4%-8%重量、更优选5%-7%重量的黏土和90%_99%重量、优选92%-96%重量、更优选93%-95%重量的酵母甘露寡糖，其中，所述酵母甘露寡糖制备自酿酒酵母菌林。本发明进一步提供用于制备上述生物毒素吸附剂的方法，包括以下步骤-提供酵母细胞壁；-由所述酵母细胞壁制备甘露寡糖，其包括i)将所述酵母细胞壁置于蒸煮锅中，在80-98。C下蒸煮1至2小时，ii)使用选自碱性蛋白酶,甘露糖酶,淀粉酶的生物酶进行酶解，iii)离心分离得到酶解物料，iv)浓缩所得的清液，得到浓缩物，以及v)干燥所述浓缩物，得到甘露寡糖干粉；-将所述甘露寡糖千粉与所述黏土混合均匀。在上述方法中，所述酵母细胞壁可以获自市售的酿酒酵母，优选获自申请人筛选的酿酒酵母菌林Z2.2(安琪保藏号，其拉丁文类名为SaccharomycescerevisiaeHansen,中国典型i咅养物4呆藏中心的保藏号为M205128),以可发酵的甘蔗糖蜜为培养基经过》文大培养，然后将得到的酵母细胞溶解得到。本发明制得的生物毒素吸附剂产品可以祠。畏于任何动物，包括，畜禽，水产，反刍动物等。当和饲料混合或作为添加剂饲喂时，该物质以较强的毒素吸附能力，降低进入动物体内的毒素量，从而提高动物生产力和健康状况，减少毒素引起的疾病。本发明制得的生物毒素吸附剂产品也可用于日^f泉的储存。具体实施例方式定义"结合物"是指用酵母细胞壁提取物-甘露寡糖与黏土复合后得到的产品，其是根据本发明目的所提供的毒素吸附剂，所以有时被称为毒素吸附剂。发明人出人意料地发现酵母细胞壁^是取物和矿性黏土混合后，具有非常好的吸收飼料中毒素的功能。因此本发明提供一种酵母甘露寡糖和矿性黏土的结合物，以及制备该结合物的方法。用于本发明结合物的黏土可以是^壬一种可以商购的能够加入到詞沖+中的产品，包括4旦不局限于沸石，斑脱土，铝石圭酸盐。可以使用市售的粒径在10-100微米范围的铝石圭酸盐。本发明使用的酵母细胞壁提取物可以制备自任何酵母细胞，包括啤酒酵母，面包酵母和酿酒酵母。在本发明的一个实施方式中，酵母甘露寡糖制备自申请人自主培育的酿酒酵母专用菌种Z2.2(安琪保藏号)，其4i丁文类名为SaccharomycescerevisiaeHansen,该菌林于2005年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(武汉大学)，保藏号为M205128。该酵母甘露寡糖为灰色，无p未粉状产品，溶于水。本文将在后面详细说明其制备。才艮据本发明的结合物优选包括1%_10%的黏土和90%-99%的酵母甘露寡糖，更优选包括4%-8%的翻土和92%-96%的酵母甘露寡糖，最优选包括5%-7%的黏土和93%-95%的酵母甘露寡糖。为得到本发明的所述结合物，可以先将自制的酵母甘露寡糖与上述黏土以常规方法混合，使得该结合物中各成分保持均匀性。由上述方法得到的结合物以干燥、自由流动的粉末为宜，便于直4妾加入饲并+中或作为添加剂混入日津良中。下面详细说明酵母细胞壁提取物——酵母甘露寡糖的制备。提供酵母细胞壁本发明中所用的酵母细胞壁提取物，可以制备自市售的普通酵母细胞，也可以使用申请人公司自主培育的酵母菌抹Z2.2(安琪保藏号)。以处理过的可发酵甘蔗糖蜜为液态培养基，经过若干次;改大培养^f吏活性酵母富集，然后经过离心洗涤，冲洗酵母，形成一个酵母乳。申请人培育的该菌林已于2005年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(武汉大学)，保藏号为M205128，分类命名为SaccharomycescerevisiaeHansen。用于力文大i咅养的i咅养基为12巴林培养液，该培养通常30。C下进行，pH4.2-5.4。通风情况开始时不通风，当发酵罐开始自然升温时，孩t量通风，或采用间接通风。培养时间12-36h,培养时间长短取决于接种量大小。级间接种量1%-5%,其中以2%-4%最为常见，也即级间扩大倍数以25%-50%倍最为常见。培养后的离心和冲洗皆采用常力见的方法。酵母细胞壁提取物的制备然后将酵母细胞溶解。溶解可以是自溶或水解，期刊文献中4是到的任何一种方法都可以用来溶解酵母细胞。在本发明中，酵母细胞的自溶在约5(TC的温度下进行。溶解后，将得到的细胞壁离心洗涤凄t次，以除去月包内物和浓缩细月包壁。将得到酵母细胞壁在蒸煮锅中，温度80-98。C下蒸煮1-2小时，然后降温至40-60°C、调节PH值为7—8,再加入适宜比例的生物酶，过程中使用的酶选自碱性蛋白酶、甘露糖酶和淀粉酶或者它们混合物，优选碱性蛋白酶。在一个具体实施例中，使用1_4%。的碱性蛋白酶和1-4%。的甘露糖酶，在40-60。C下酶解15—16小时。然后经过离心分离，浓缩清液，喷雾干燥所得的清液，得到吸湿性的水溶性粉末甘露寡糖。不同工艺调整可使甘露寡糖含量达到40%-50%以上。结合物的提供将上述得到的甘露寡糖与适用的黏土按照前面所述的比例混合。该混合可以采用常规的方法进行。例如机械搅拌混合。本发明得到的生物毒素吸附剂产品可以加入到任何配合飼料或宠物祠料中。也可以作为添加剂与饲料或粮食混合。直接混成饲料时，加入量可以为0.25—4kg该物质/每p屯饲^牛。4交优化的量为0.5-3kg/吨饲料。最优量为l-2kg/吨饲料。本发明制得的化合物可以飼p畏于^f壬^T畜禽，水产，反刍动物，应用范围4交广。实施例实施例1制备将300g酿酒酵母(大连兴和酵母有限^^司，中国)在约50。C的温度下自溶，将得到的细胞壁在离心机中以6000转/分钟的速度离心，以除去胞内物和浓缩细胞壁。将得到酵母细月包壁在蒸煮锅中，温度80-98。C下蒸煮1.5小时，然后降温至40-60°C、调节PH^f直为7—8，再加入1-4%。重量(基于g良酒酵母质量)的石咸性蛋白酶和1-4%。的甘露糖酶在43。C下酶解15—16小时。然后经过离心分离，浓缩清液，喷雾干燥所得的清液，得到吸湿性的水溶性粉末甘露寡糖。喷雾干燥得到甘露寡糖含量达到40%-50%的干燥粉末。将该千燥粉末与铝硅酸盐按98:2的重量比均匀混合，得到生物毒素吸附剂(产品1)。实施例2制备将300g酿酒酵母(以申请人公司培育的酿酒菌林M205128经放大培养得到)在约5(TC的温度下自溶，将得到的细胞壁在离心机中以6000转/分钟的速度离心，以除去胞内物和浓缩细胞壁。将得到酵母细胞壁在蒸煮锅中，温度80-98。C下蒸煮2小时，然后降温至40-60°C、调节PH值为7—8，再加入1-4%。重量(基于S良酒酵母质量)的^威性蛋白酶和1-4%。的甘露糖酶在60。C下酶解15—16小时。然后经过离心分离，浓缩清液，喷雾干燥所得的清液，得到吸湿性的水溶性粉末甘露寡糖。喷雾干燥得到甘露寡糖含量达到48%的干燥粉末。将该干燥粉末与铝硅酸盐分别按98:2、96:4、92:8、95:5、94:6的重量比均匀混合，相应得到生物毒素吸附剂产品2、产品3、产品4、产品5、和产品6。实施例3体外吸附试-验将1mg上述产品1至6加入到含有多种霉菌毒素的受污染肉鸡饲料(经粉碎)2g中、搅拌1小时。分别采用液相色谱法4企测饲料中黄曲霉毒素，玉米赤霉烯酮毒素，呕吐毒素。以等量的钙铝酸盐作对照，测得的结果列于表l中。表l生物毒素吸附剂对原料中霉菌毒素吸附效果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实-验结果显示本发明中的结合物与对照品相比对黄曲霉毒素具有较强的吸附能力，其吸附率(尤其是对黄曲霉毒素)与产品中的甘露寡糖含量基本呈正相关。尤其值得注意的是，利用本申请人自行筛选的菌林作为原料而值得的产品，与使用市售的酿酒酵母制得的产品相比，表现出较高的吸附活性。另有应用试马全结果显示:酵母甘露寡糖和矿性黏土结合物，能有效除去被污染饲料中的毒素，同等吸附率条件下，该吸附剂发生作用所需浓度比其它常用吸附剂都低。权利要求1.一种生物毒素吸附剂，包括1％-10％重量的黏土和90％-99％重量的酵母甘露寡糖。2.根据权利要求1所述的生物毒素吸附剂，包括4%-8%重量的翁土和92%-96%重量的酵母甘露寡糖。3.根据权利要求2所述的生物毒素吸附剂，包括5%-7%重量的黏土和93%-95%重量的酵母甘露寡糖。4.根据权利要求1至3任一项所述的生物毒素吸附剂，其中，所述酵母甘露寡并唐制备自酿酒酵母菌4朱，优选酿酒酵母菌才朱Z2.2。5.制备权利要求1至3任一项所述生物毒素吸附剂的方法，包括以下步-骤-4是供酵母细力包壁；-由所述酵母细胞壁制备甘露寡糖，其包括i)将所述酵母细胞壁置于蒸煮锅中，在80-98°C下蒸煮1至2小时，ii)使用选自^5威性蛋白酶,甘露糖酶，淀粉酶的生物酶进行酶解，iii)离心分离得到酶解物料，iv)浓缩所得的清液，得到浓缩物，v)干燥所述浓缩物，得到甘露寡糖干粉；-将所述甘露寡糖干粉与所述黏土混合均匀。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述生物酶为碱性蛋白酶。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述酶解是在40。C至60。C下进行15至16小时。8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述酵母细胞壁获自酿酒酵母的菌抹，以可发酵的甘蔗糖蜜为培养基经过放大培养，然后将得到的酵母细胞溶解得到。9.根据权利要求5至8任一项所述的方法，其中，所述酵母细胞壁获自酿酒酵母菌林Z2.2。10.—种由酵母细胞壁制备甘露寡糖的方法，其包括i)将所述酵母细力包壁置于蒸煮锅中，80-98'C下蒸煮1至2小时；ii)使用选自碱性蛋白酶，甘露糖酶,淀粉酶的生物酶进行酶解；iii)离心分离得到酶解物料；iv)浓缩所得的清液，得到浓缩物。v)干燥所述浓缩物，得到甘露寡糖干粉。11.根据权利要求IO所述的方法，其中，所述酶解是在40-6CTC下进行15至16小时。12.才艮据4又利要求11所述的方法，其中，所述生物酶为石咸性蛋白酵。13.酿酒酵母菌4朱，其在中国典型培养物保藏中心的保藏号为M205128。14.一种动物饲料，其含有4艮据权利要求1至5任一项所述的生物毒素吸附剂。15.—种日粮或动物伺料的储存方法，其特征在于，在所述日粮或动物祠料中加入根据权利要求1至5任一项所述的生物毒素吸附剂。全文摘要本发明提供一种吸附饲料毒素的产品，其包括1％-10％重量的黏土和90％-99％重量的酵母甘露寡糖。该发明提供了一种生产方法和化合物产品来吸附饲料中的毒素，该甘露寡糖为酵母细胞壁提取物和铝硅酸盐。该酵母细胞壁是从酿酒酵母中提取而得的。本发明制得的生物毒素吸附剂产品可以饲喂任何动物，包括，畜禽，水产，反刍动物等。当和饲料混合或作为添加剂饲喂时，该物质以较强的毒素吸附能力，降低进入动物体内的毒素量，从而提高动物生产力和健康状况，减少毒素引起的疾病。文档编号A23K1/17GK101361524SQ200710135740公开日2009年2月11日申请日期2007年8月10日优先权日2007年8月10日发明者余明华,俞学锋,娟姚,朱金林,李知洪,斌谭申请人:安琪酵母股份有限公司