一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物饲料领域，具体涉及一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料，将丁酸梭菌与鲫鱼基础饲料按质量比为0.0001:1～0.0005:1的比例添加。不仅可以促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收，提高鲫鱼增重率，减少病患，还可以减少鲫鱼粪便中氨氮含量和饲料资源的浪费，促进我国水产业的健康养殖和高效生产。
【专利说明】一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物在生物饲料中的应用，具体地说，涉及一种含有丁酸梭菌的鲫鱼词料。
【背景技术】
[0002]蛋白质是决定鱼类生长的关键营养物质，也是饲料成本花费最大的部分。水产养殖动物大多数都要求较高的饲料蛋白质水平，一般蛋白质原料在水产动物饲料配方中的比重占到50%以上。鱼类对饲料中蛋白质的消化吸收水平不仅会影响鱼类的生长性能，而且还关系到鱼类粪便中氮的含量以及对环境的污染程度。因此，研究开发能提高鱼类对饲料中蛋白质的消化吸收能力，从而使饲料配方得到优化的新型促蛋白吸收调节剂具有重要的科学意义和应用前景。
[0003]为了维持生存和正常生长，动物必须从食物中不断地摄入蛋白质，饲料蛋白质对鱼类的必要性不能被其他营养物质代替。鱼类饲料中的蛋白质在鱼体内经胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等作用最终降解成短链的小肽和游离氨基酸，然后被小肽转运载体和氨基酸转运载体转运到细胞内吸收利用，特别是蛋白质的消化产物60%以上是以小肽的形式被动物肠道小肽转运载体PepTl蛋白转运，因此，鲫鱼肠道PepTlmRNA表达水平反映其对蛋白消化吸收的能力。
[0004]血清中一些生理生化指标可以反映鱼类机体蛋白质代谢的状况。血清总蛋白、白蛋白和球蛋白的含量与机体蛋白质的吸收`和代谢状况有关；谷草转氨酶和谷丙转氨酶是广泛存在于鱼类线粒体中重要的氨基酸转氨酶，当鱼类肝脏细胞没有被损伤时，谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性的提高可反映出机体蛋白质合成和分解代谢的增强。
[0005]鱼类饲料干物质和蛋白质表观消化率的提高直接反映鱼类对饲料中营养物质和蛋白质消化吸收率的增强。蛋白代谢能影响蛋白消化吸收，蛋白消化吸收的状况直接关系到鱼类生长的好坏。而鱼类生长的好`坏又影响鱼类养殖效益的提高。鲫鱼蛋白饲料的消化吸收，以及调节鲫鱼蛋白饲料消化吸收的饲料添加剂筛选已成为淡水鱼类营养与饲料研究的重点和热点，迫切需要筛选能够增强肠道消化吸收相关酶和有机酸的分泌，以及功能基因表达的饲料添加剂，从而利用该饲料添加剂优化鲫鱼饲料配方，以此获得促蛋白质消化吸收的鲫鱼饲料添加剂及其相应饲料。
[0006]丁酸梭菌属于芽孢杆菌科，梭菌属，革兰氏阳性，孢子卵圆，偏心或次端生，室温生长，耐酸和高温。在鱼类饲料中，丁酸梭菌与饲料原料配伍对动物蛋白消化吸收和增重产生作用效果，这种作用效果可以从鱼类对蛋白消化吸收、蛋白代谢相关血清生化指标、以及小肽转运载体PepTl基因的表达等指标表现出来，但是丁酸梭菌与饲料原料配伍具有剂量效应。
【发明内容】
[0007]为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料，以及丁酸梭菌作为促蛋白吸收调节剂在促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收、提高鲫鱼增重率上的应用。
[0008]本发明首先提供了一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料，所述饲料为将丁酸梭菌与鲫鱼基础饲料按质量比为0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
[0009]其中，所述鲫鱼基础饲料的原料组份按重量百分比为:豆柏20%、麸皮8%、次粉6%、一级面粉7%、玉米酒糟6%、中国菜柏18%、棉柏14%、全脂鱼粉6%、肉骨粉4%、棕榈柏3%、一级豆油3%、氯化胆碱0.5%、磷酸二氢钙1%、三氧化二铬0.5%、预混料2%、大蒜素0.05%、防霉剂
0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨润土 0.8%。
[0010]进一步地，所述丁酸梭菌的活菌数为1.0X 108cfu/g。
[0011]进一步地，所述丁酸梭菌从土壤或动物粪便中分离培养，包括如下步骤:
[0012]I)制备土壤或粪便样品稀释液:以无菌操作，将样品加入装有无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使样品与水充分混合，再稀释成浓度分别为10_4、10_5和10_6的样品稀释液，分别加到无菌培养皿内；
[0013]2)平板的制作:将固体培养基融化，待冷却至45_50°C左右，分别倾入到已盛有10_4、10_5、IO-6稀释液的无菌培养皿内，迅速轻轻摇匀，静置凝固；凝固后将平板倒置于30°c恒温箱中，培养24-48小时，此菌即在所固定的位置长成肉眼能见的菌落；
[0014]3 )接种:平板培养48h后，用接种针挑取单个菌落插入深层固体培养基内，再沿原路拔出，在28-32°C温度下培养48h后转入4-7°C冰箱中保藏。
[0015]更进一步地,所述步骤I)具体为以无菌操作，称取样品lg，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使样品与水充分混合，即成10_2样品稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10_3的稀释液，用同样方法再制成10_4、10_5、10_6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的10_6的稀释液开始吸取lmllO—6稀释液，加到相应编号10_6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取lmllO'lO—4的稀释液加到相应编号为10_5、10_4的无菌培养皿内。
[0016]本发明还提供了前述饲料在促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收中的应用。
[0017]本发明还提供了前述饲料在提高鲫鱼增重率中的应用。
[0018]本发明还提供了丁酸梭菌在促进鲫鱼肠道PepTl基因的表达上的应用。
[0019]本发明还提供了 丁酸梭菌在促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收中的应用。
[0020]本发明还提供了丁酸梭菌在提高鲫鱼增重率中的应用。
[0021]本发明的有益效果在于:
[0022]本发明提出一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料，丁酸梭菌作为促蛋白吸收添加剂，不仅可以促进鲫鱼的生长，减少病患，还可以减少鲫鱼粪便中氨氮含量和饲料资源的浪费，促进我国水产业的健康养殖和高效生产。
[0023]丁酸梭菌在动物肠道中可以分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和有机丁酸等物质，能促进动物肠道细胞增殖，改善肠道消化吸收功能，同时能提高鲫鱼蛋白代谢水平及其相关基因的表达。同时，丁酸梭菌由于无污染、无残留和无耐药性，也成为较具潜力的抗生素替代品之一。
[0024]本发明的有益效果在于:本发明首次发现了丁酸梭菌作为鲫鱼蛋白消化吸收促进剂的用途，并研究得到丁酸梭菌作为蛋白消化吸收促进剂在鲫鱼饲料中的最适添加剂量，发现其能提闻觸鱼蛋白代谢相关血清生化指标和小妝转运载体PepTl基因的表达。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1为丁酸梭菌对鲫鱼肠道PepTl基因相对表达量的影响。
【具体实施方式】
[0026]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0027]实施例1 丁酸梭菌作为促蛋白吸收调节剂制备鲫鱼饲料
[0028]丁酸梭菌由大北农集团提供，在鲫鱼基础饲料中分别添加0.0g/kg、0.lg/kg、
0.25g/kg、0.5g/kg、l.0g/kg五种剂量，以混合方式直接添加，配制5种等氮等能的饲料(粗蛋白32.06%，粗脂肪6.33%)，丁酸梭菌的活菌数为1.0X 108cfu/g。
[0029]鲫鱼基础饲料配方如下:各原料组份按重量百分比为:豆柏20%、麸皮8%、次粉6%、一级面粉7%、玉米酒糟(DDGS) 6%、中国菜柏18%、棉柏14%、国产全脂鱼粉6%、肉骨粉4%、棕榈柏3%、一级豆油3%、氯化胆碱0.5%、磷酸二氢钙1%、三氧化二铬0.5%、预混料2%、大蒜素
0.05%、防霉剂0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨润土 0.8%。
[0030]实施例2 丁酸梭菌对鲫鱼生长、蛋白质消化吸收的影响研究
[0031]试验材料:实施例1所制备的添加有五种不同剂量丁酸梭菌的鲫鱼饲料。
[0032]试验地点:养殖实验在长沙学院产学研基地进行，室内循环流水控温玻璃水族缸规格为 120cm x80cm x80cm。
[0033]试验设计:选用初始体质量(2.0±0.04) g，大小规格一致和体质健壮的同批孵化芙蓉鲫作为实验对象，进行8周的摄食生长试验。共设5个处理，每个处理设3个重复，每个重复20尾鱼。
[0034]试验环境与条件:实验开始后，每日于8:30，12:30，16:30投喂3次，养殖过程均采用鱼体质量3% - 5%投喂量投喂，饲料在投喂20分钟后基本被摄食完全。实验期间水族箱24h不间断充气，水温24-26°C，pH值6.5-7.5。每天记录水温、投喂量和摄食情况等。
[0035]试验结果:生长性能指标见表1，血清生化指标结果见表2，饲料表观消化率见表
3。在饲料中添加丁酸梭菌对鲫鱼有明显的促生长作用，并显著提高了鲫鱼增重率、特定生长率、血清总蛋白和蛋白质表观消化率(P〈0.05)。当丁酸梭菌添加量为0.5g/kg时，鲫鱼增重率、血清总蛋白、白蛋白和蛋白质表观消化率最闻，比对照组分别提闻了 36.4%、18.82%、
18.13% 和 10.98%ο
[0036]表1本发明饲料对鲫鱼生产性能的影响11=3;.TiSD
[0037]
【权利要求】
1.一种含有丁酸梭菌的鲫鱼饲料，其特征在于，所述饲料为将丁酸梭菌与鲫鱼基础饲料按质量比为0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
2.如权利要求1所述的饲料，其特征在于，所述丁酸梭菌的活菌数为1.0X108cfU/g。
3.如权利要求1所述的饲料，其特征在于，所述丁酸梭菌从土壤或动物粪便中分离培养，包括如下步骤: 1)制备土壤或粪便样品稀释液:以无菌操作，将样品加入装有无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使样品与水充分混合，再稀释成浓度分别为10_4、10_5和10_6的样品稀释液，分别加到无菌培养皿内； 2)平板的制作:将固体培养基融化，待冷却至45-50°C左右，分别倾入到已盛有10_4、10_5、10_6稀释液的无菌培养皿内，迅速轻轻摇勻，静置凝固；凝固后将平板倒置于30°C恒温箱中，培养24-48小时，此菌即在所固定的位置长成肉眼能见的菌落； 3 )接种:平板培养48h后，用接种针挑取单个菌落插入深层固体培养基内，再沿原路拔出，在28-32°C温度下培养48h后转入4-7°C冰箱中保藏。
4.如权利要求1所述的饲料，其特征在于，所述步骤I)具体为以无菌操作，称取样品lg，加入装有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10-20分钟，使样品与水充分混合，即成10_2样品稀释液，然后用无菌移液管吸取9ml无菌水的试管内，制成10_3的稀释液，用同样方法再制成10_4、10_5、10_6的稀释液，稀释完毕后，可用原来的移液管，从菌液浓度最小的10_6的稀释液开始吸取lmll0_6稀释液，加到相应编号10_6的无菌培养皿内，以相同方法分别吸取lmll0_5、10_4的稀释液加到相应编号为10_5、10_4的无菌培养皿内。
5.如权利要求1所述的饲料，其特征在于，所述鲫鱼基础饲料的原料组份按重量百分比为:豆柏20%、麸皮8%、次粉6%、一级面粉7%、玉米酒糟6%、中国菜柏18%、棉柏14%、全脂鱼粉6%、肉骨粉4%、棕榈柏3%、一级豆油3%、氯化胆碱0.5%、磷酸二氢钙1%、三氧化二铬0.5%、预混料2%、大蒜素0.05%、防霉剂0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨润土 0.8%。
6.权利要求1-5任一项所述的饲料在促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收中的应用。
7.权利要求1-5任一项所述的饲料在提高鲫鱼增重率中的应用。
8.丁酸梭菌在促进鲫鱼肠道PepTl基因的表达上的应用。
9.丁酸梭菌在促进鲫鱼肠道蛋白消化吸收中的应用。
10.丁酸梭菌在提高鲫鱼增重率中的应用。
【文档编号】A23K1/16GK103583900SQ201310546212
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】刘臻, 鲁双庆, 周毅, 孙浪, 伍琴 申请人:长沙学院