一种高产多糖蛹虫草的培养方法
【专利摘要】本发明涉及食用菌栽培领域，特别涉及一种高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤：将蛹虫草菌种活化培养，制得孢子悬液；将孢子悬液以体积百分数为3-8％的比例接种于蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；将种子液接种于蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，得到蛹虫草子实体。本发明提供的高产多糖蛹虫草的培养方法，将孢子悬液接种于本发明中提供的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；将种子液接种到本发明提供的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，培养方法简单，培养周期短，得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高，且用该蛹虫草子实体提取的蛹虫草多糖的纯度高。
【专利说明】一种局产多糖蛹虫草的培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食用菌栽培领域，具体而言，涉及一种高产多糖蛹虫草的培养方法。
【背景技术】
[0002]蛹虫草又称北虫草、北冬虫夏草，是真菌寄生于鳞翅目等昆虫的虫体上形成的虫菌复合体，是一种具有滋补作用的重要和营养品。蛹虫草具有抗肿瘤、抗炎等多种药力功效，它已经在东亚地区被广泛作为滋补品及药用菌使用，我国卫生部于2009年3月16日正式将其列为新资源食品。
[0003]其中蛹虫草中的多糖，主要是由甘露糖、虫草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、岩藻糖组成的多聚糖。实验证明，虫草多糖可提高人体免疫功能，升高白细胞，改善呼吸系统，可使肾上腺重量、血浆皮质醇、醛固酮及肾上腺内胆固醇含量增加，有促进肾上腺的作用，抑制肿瘤生长，并具有抗肿瘤、抗辐射、降血糖和脂蛋白、止咳、化痰、润肺和延缓衰老等药理作用，临床已用于治疗恶性肿瘤，因此，虫草多糖具有重要的利用价值。
[0004]目前，蛹虫草多糖含量主要集中于通过液体深层发酵来提高，但是，深层发酵得到的为蛹虫草菌丝体,其包括蛹虫草自身外,还有一些培养基残渣,影响蛹虫草多糖的纯度。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供蛹虫草种子培养基、蛹虫草生长培养基以及一种高产多糖蛹虫草的培养方法，以解决上述的问题。
[0006]在本发明的实施例中提供了蛹虫草种子培养基，按重量份计，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氢钾0.02-0.06份、硫酸镁0.02-0.06份、氯化钠4-6份、维生素B10.05-0.15份、山药粉8-12份、水800-1200份。
[0007]在本发明的实施例中还提供了蛹虫草生长培养基，按重量份计，包括以下成分:玉米粉12-18份、麦子粉5-10份、山药粉3-8份、干刺梨粉2_5份、蛋白胨0.02-0.05份、磷酸二氢钾 0.02-0.04 份、硫酸镁 0.02-0.03 份、葡萄糖 0.02-0.08 份、维生素 B10.0005-0.001份、水30-40份。
[0008]一种高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤:
[0009](a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为1-3 X 107CFU/ml的孢子悬液；
[0010](b)将所述孢子悬液以体积百分数为3-8%的比例接种于权利要求1所述的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；
[0011](C)将所述种子液接种于权利要求2所述的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，得到蛹虫草子实体。
[0012]优选地，在所述步骤(b)中，培养条件为:25-30°C，240-260rpm/min振荡培养。
[0013]优选地，在所述步骤(b)中，培养3-5d，得到所述种子液。
[0014]优选地，将所述种子液稀释20-30倍后，以体积百分数为5-8%进行接种。
[0015]优选地，在所述步骤(C)中，所述暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度20-25°C，湿度60-70%，培养6_8d。
[0016]优选地，在所述步骤(C)中，所述菌丝转色培养的培养条件为:温度15_20°C，湿度60-70%，每天通风1.5-2.5h，光照8_12h，光照强度为250_300Lux，培养5_8d。
[0017]优选地，在所述步骤(C)中，所述子实体培养的培养条件为:透气培养，温度为200C ±2°C，湿度为80-90%，每天通风1.5-2.5h，光照6_8h，光照强度为250_300Lux，培养至子实体长度为6-lOcm，采收得到所述蛹虫草子实体。
[0018]优选地，所述消毒为:将装有过氧乙酸溶液的容器置于75_85°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为90-100min，所述过氧乙酸每立方米空间用量为3_3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为60% -80%。
[0019]本发明实施例提供的高产多糖蛹虫草的培养方法，将孢子悬液接种于本发明中提供的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；将种子液接种到本发明提供的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，培养方法简单，培养周期短，得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高，且用该蛹虫草子实体提取的蛹虫草多糖的纯度高。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。
[0021]在本发明的实施例中提供了蛹虫草种子培养基，按重量份计，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氢钾0.02-0.06份、硫酸镁0.02-0.06份、氯化钠4-6份、维生素B10.05-0.15份、山药粉8-12份、水800-1200份。
[0022]进一步地，按重量份计，包括以下成分:葡萄糖9-10份、蛋白胨3-4份、酵母粉5_6份、磷酸二氢钾0.03-0.05份、硫酸镁0.03-0.05份、氯化钠4-5份、维生素B10.05-0.15份、山药粉9-10份、水1000份。
[0023]得到的蛹虫草种子培养基营养全面，培养基成分浓度及配比合适；将蛹虫草的孢子悬液接种至本培养基，部分孢子生长成菌丝体，孢子生命力旺盛，孢子数扩增快，并且得到部分菌丝体，得到的种子液含有孢子和菌丝体，利于后续生长。
[0024]在本发明的实施例中还提供了蛹虫草生长培养基，按重量份计，包括以下成分:玉米粉12-18份、麦子粉5-10份、山药粉3-8份、干刺梨粉2_5份、蛋白胨0.02-0.05份、磷酸二氢钾 0.02-0.04 份、硫酸镁 0.02-0.03 份、葡萄糖 0.02-0.08 份、维生素 B10.0005-0.001份、水30-40份。
[0025]进一步地，按重量份计，包括以下成分:玉米粉14-16份、麦子粉6-8份、山药粉4-6份、干刺梨粉3-4份、蛋白胨0.03-0.04份、磷酸二氢钾0.02-0.04份、硫酸镁0.02-0.03份、葡萄糖0.03-0.06份、维生素B10.0005-0.001份、水30-40份。
[0026]得到的蛹虫草生长培养基营养全面，培养基成分浓度及配比合适；将蛹虫草的种子液接种至本培养基，利于孢子生长为菌丝体，得到较多的菌丝体，利于获得更多的蛹虫草子实体,且得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高。
[0027]其中，蛹虫草种子培养基和蛹虫草生长培养基中涉及的玉米粉和麦子粉的粒度均为1-3_，山药粉和干刺梨粉采用以下方式制备:将鲜山药烘干，然后粉碎，得到粒度为0.8-1.5mm的山药粉； 将鲜刺梨烘干，去籽后粉碎，得到粒度为0.8-1.5mm的干刺梨粉。使用这种粒度的玉米粉、麦子粉、山药粉以及干刺梨粉，其在灭菌过程中能分布均匀，灭菌后得到的培养基中的成分分布均一。
[0028] 分别将蛹虫草种子培养基和蛹虫草生长培养基各自含有的成分称取后混合，均采用高温高压灭菌，具体为121°C，灭菌20-30min，灭菌后冷却至室温，得到可直接用于培养菌株的培养基。
[0029]高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤:
[0030](a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为1-3 X 107CFU/ml的孢子悬液；
[0031](b)将所述孢子悬液以体积百分数为3-8%的比例接种于权利要求1所述的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；
[0032](c)将所述种子液接种于权利要求2所述的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，得到蛹虫草子实体。
[0033]采用本发明提供的蛹虫草种子培养基和蛹虫草生长培养基进行蛹虫草的培养，培养方法简单，培养周期短，成本低，得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高；另外，现有技术中采用液体发酵培养蛹虫草，蛹虫草的大部分在发酵液中，自身产生的分泌物等物质混杂在发酵液中，因而得到的蛹虫草含有发酵液的成分，而本发明提供的蛹虫草生长培养基为固体培养基，采用固体培养蛹虫草，采摘得到的蛹虫草子实体，避免了采用液体发酵培养时培养基中的杂质混入蛹虫草子实体中的缺陷，得到的蛹虫草杂质更少，因此，后续蛹虫草提取的多糖的纯度更高。
[0034]蛹虫草菌种活化培养，蛹虫草菌种购自中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2013056，将蛹虫草菌种接种于马铃薯斜面培养基，27°C ±2°C培养6_8d，得到蛹虫草的孢子，用含有0.05%的吐温80的无菌水洗下孢子，制得浓度为1-3X 107CFU/ml的孢子悬液。其中，马铃薯斜面培养基成分包括马铃薯100g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾lg、琼脂16g、水1000ml ;配制方法为:取已去皮的马铃薯100g，切成小块，加水1000ml，煮沸20min，用4_6层纱布过滤，然后补足失水至1000ml，加入琼脂16g溶化，然后再加入葡萄糖10g，磷酸二氢钾lg，分装试管，121°C高压灭菌25-30min，制备得到马铃薯斜面培养基。采用马铃薯斜面培养基活化蛹虫草菌种，方法简单易行，且得到的孢子多。采用0.05%的吐温80的无菌水将孢子制成浓度为1-3X 107CFU/ml的孢子悬液，制得的孢子悬液孢子分布均匀；然后以体积百分数为3-8%的比例接种至蛹虫草种子培养基，接种量适中，利于在蛹虫草种子培养基快速生长。
[0035]优选地，在所述步骤(b)中，培养条件为:25-30°C，240-260rpm/min振荡培养。经验证，培养温度为25-30°C，蛹虫草在蛹虫草种子培养基中生长快速；转速240-260rpm/min，在不损害蛹虫草孢子的情况下，增加溶氧量，利于孢子和菌丝体的生长，同时可以将蛹虫草种子培养基混合均匀，以防止局部蛹虫草种子培养基营养成分不足而影响孢子和菌丝体的生长，因此，这种培养条件下蛹虫草的孢子生长速度快，形成的菌丝体较多，节约培养时间。
[0036]优选地，在所述步骤(b)中，培养3-5d，得到所述种子液。培养3-5d，得到的种子液菌体含量高，且生长旺盛。
[0037]优选地，将所述种子液稀释20-30倍后，以体积百分数为5-8%进行接种。在蛹虫草生长培养基中接种适量的种子液，利于得到蛹虫草子实体；为了防止接种量以及接种后分布不均一，先将种子液进行稀释，然后以体积百分数为5-8%进行接种，可以得到种子液分布均匀的蛹虫草生长培养基，利于菌体的生长。
[0038]优选地，在所述步骤(C)中，所述暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度20-25°C，湿度60-70%，培养6-8d。该培养条件下，菌体生长快速，培养器中长满菌丝，培养周期短。
[0039]优选地，在所述步骤(C)中，所述菌丝转色培养的培养条件为:温度15_20°C，湿度60-70%，每天通风1.5-2.5h，光照8-12h，光照强度为250_300Lux，培养5_8d。该培养条件下，菌体生长快速，菌丝开始在培养基表面形成小米状原基，菌丝体转色效果好，且培养周期短。
[0040]优选地，在所述步骤(C)中，所述子实体培养的培养条件为:透气培养，温度为200C ±2°C，湿度为80-90%，每天通风1.5-2.5h，光照6_8h，光照强度为250_300Lux，培养至子实体长度为6-lOcm，采收得到所述蛹虫草子实体。透气培养为:在培养容器口的薄膜上扎几个孔，以利于空气流通，利于培养物生长。并且在该培养条件下，菌体生长快速，培养周期短，得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高。
[0041]优选地，所述消毒为:将装有过氧乙酸溶液的容器置于75_85°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为90-100min，所述过氧乙酸每立方米空间用量为3_3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为60% -80%。对蛹虫草生长的空间进行消毒，以防止其受病，且防止其他微生物的污染；采用过氧乙酸对熏蒸对培养间消毒，消毒彻底，且对蛹虫草培养物本身无伤害，在培养期间，蛹虫草培养物生长状态好，得到的蛹虫草子实体无污染且得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高。
[0042]本发明实施例提供的高产多糖蛹虫草的培养方法，将孢子悬液接种于本发明中提供的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液；将种子液接种到本发明提供的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，培养方法简单，培养周期短，得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高，且用该蛹虫草子实体提取的蛹虫草多糖的纯度高。
[0043]实施例1
[0044]按重量份计，称取以下成分:葡萄糖8份、蛋白胨2份、酵母粉4份、磷酸二氢钾
0.02份、硫酸镁0.02份、氯化钠4份、维生素B10.05份、山药粉8份、水800份，然后121 °C，灭菌25min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草种子培养基；
[0045]按重量份计，称取以下成分:玉米粉12份、麦子粉5份、山药粉3份、干刺梨粉2份、蛋白胨0.02份、磷酸二氢钾0.02份、硫酸镁0.02份、葡萄糖0.02份、维生素B10.0005份、水30份，然后121°C，灭菌25min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草生长培养基；
[0046]高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤:
[0047](a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为I X 107CFU/ml的孢子悬液；
[0048](b)将孢子悬液以体积百分数为8%的比例接种于蛹虫草种子培养基中培养，培养条件为:25°C，24 0rpm/min振荡培养，培养3d，得到种子液；
[0049](c)将种子液稀释20倍后，以体积百分数为5%将种子液接种于蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养；
[0050]暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度20°C，湿度60%，培养6d ；
[0051]菌丝转色培养的培养条件为:温度15°C，湿度60%，每天通风1.5h，光照8h，光照强度为250LUX，培养5d ；[0052]菌丝转色培养完成后，对培养物进行子实体培养，培养条件为:透气培养，温度为20°C ±2°C，湿度为80%，每天通风1.5h，光照6h，光照强度为250Lux，培养至子实体长度为6-10cm，采收得到蛹虫草子实体；
[0053] 其中，对培养间采用以下方式进行消毒:将装有过氧乙酸溶液的容器置于75°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为lOOmin，过氧乙酸每立方米空间用量为3-3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为60% -80%。
[0054]得到的蛹虫草子实体呈金黄色，蒽酮比色法测定蛹虫草子实体总糖含量，得到的蛹虫草多糖含量为18%。
[0055]实施例2
[0056]按重量份计，称取以下成分:葡萄糖10份、蛋白胨3份、酵母粉5份、磷酸二氢钾0.04份、硫酸镁0.04份、氯化钠5份、维生素B10.10份、山药粉10份、水1000份，然后121 °C，灭菌30min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草种子培养基；
[0057]按重量份计，称取以下成分:玉米粉15份、麦子粉8份、山药粉5份、干刺梨粉4份、蛋白胨0.04份、磷酸二氢钾0.03份、硫酸镁0.02份、葡萄糖0.05份、维生素B10.0008份、水35份，然后121°C，灭菌30min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草生长培养基；
[0058]高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤:
[0059](a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为2 X 107CFU/ml的孢子悬液；
[0060](b)将孢子悬液以体积百分数为5%的比例接种于蛹虫草种子培养基中培养，培养条件为:27°C，250rpm/min振荡培养，培养4d，得到种子液；
[0061](c)将种子液稀释25倍后，以体积百分数为6%将种子液接种于蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养；
[0062]暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度22°C，湿度65%，培养7d ；
[0063]菌丝转色培养的培养条件为:温度18°C，湿度65%，每天通风2.0h，光照10h，光照强度为280LUX，培养7d;
[0064]菌丝转色培养完成后，对培养物进行子实体培养，培养条件为:透气培养，温度为20°C ±2°C，湿度为85%，每天通风2.0h,光照7h，光照强度为280Lux，培养至子实体长度为6-10cm，采收得到蛹虫草子实体；
[0065]其中，对培养间采用以下方式进行消毒:将装有过氧乙酸溶液的容器置于80°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为95min，所述过氧乙酸每立方米空间用量为3-3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为60% -80%。
[0066]得到的蛹虫草子实体呈金黄色，蒽酮比色法测定蛹虫草子实体总糖含量，得到的蛹虫草多糖含量为20%。
[0067]实施例3
[0068]按重量份计，称取以下成分:葡萄糖12份、蛋白胨4份、酵母粉6份、磷酸二氢钾
0.06份、硫酸镁0.06份、氯化钠6份、维生素B10.15份、山药粉12份、水1200份，然后121 °C，灭菌35min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草种子培养基；
[0069]按重量份计，称取以下成分:玉米粉18份、麦子粉10份、山药粉8份、干刺梨粉5份、蛋白胨0.05份、磷酸二氢钾0.04份、硫酸镁0.03份、葡萄糖0.08份、维生素B10.001份、水40份，然后121°C，灭菌35min，灭菌后冷却至室温，得到蛹虫草生长培养基；[0070]高产多糖蛹虫草的培养方法，包括以下步骤:
[0071](a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为3X 107CFU/ml的孢子悬液；
[0072](b)将孢子悬液以体积百分数为3%的比例接种于蛹虫草种子培养基中培养，培养条件为:30°C，260rpm/min振荡培养，培养5d，得到种子液；
[0073](c)将种子液稀释30倍后，以体积百分数为8%将种子液接种于蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养；
[0074]暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度25°C，湿度70%，培养8d ；
[0075]菌丝转色培养的培养条件为:温度20°C，湿度70%，每天通风2.5h，光照12h，光照强度为300LUX，培养8d;
[0076]菌丝转色培养完成后，对培养物进行子实体培养，培养条件为:透气培养，温度为200C ±2°C，湿度为90%，每天通风2.5h，光照8h，光照强度为300Lux，培养至子实体长度为6-10cm，采收得到蛹虫草子实体；
[0077]其中，对培养间采用以下方式进行消毒:将装有过氧乙酸溶液的容器置于85°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为90 min，所述过氧乙酸每立方米空间用量为3-3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为60% -80%。
[0078]得到的蛹虫草子实体呈金黄色，蒽酮比色法测定蛹虫草子实体总糖含量，得到的蛹虫草多糖含量为25%。
[0079]本发明提供的高产多糖蛹虫草的培养方法，培养方法简单，在不同培养阶段采用不同的培养基进行培养，以确保菌种的活力和适应栽培目标的需求；各个培养阶段的培养条件、环境条件严格控制，利于蛹虫草培养和管理的规范化和标准化；得到的蛹虫草子实体蛹虫草多糖含量高，为18-25%，且用该蛹虫草子实体提取的蛹虫草多糖的纯度高。
[0080]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以 有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.蛹虫草种子培养基，其特征在于，按重量份计，包括以下成分:葡萄糖8-12份、蛋白胨2-4份、酵母粉4-6份、磷酸二氢钾0.02-0.06份、硫酸镁0.02-0.06份、氯化钠4_6份、维生素B10.05-0.15份、山药粉8-12份、水800-1200份。
2.蛹虫草生长培养基，其特征在于，按重量份计，包括以下成分:玉米粉12-18份、麦子粉5-10份、山药粉3-8份、干刺梨粉2-5份、蛋白胨0.02-0.05份、磷酸二氢钾0.02-0.04份、硫酸镁0.02-0.03份、葡萄糖0.02-0.08份、维生素B10.0005-0.001份、水30-40份。
3.一种高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，包括以下步骤: (a)将蛹虫草菌种活化培养，制得浓度为l_3X107CFU/ml的孢子悬液； (b)将所述孢子悬液以体积百分数为3-8%的比例接种于权利要求1所述的蛹虫草种子培养基中培养，得到种子液； (c)将所述种子液接种于权利要求2所述的蛹虫草生长培养基中依次进行暗培养、菌丝转色培养和子实体培养，得到蛹虫草子实体。
4.根据权利要求3所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(b)中，培养条件为:25-30°C，240-260rpm/min振荡培养。
5.根据权利要求4所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(b)中，培养3-5d，得到所述种子液。
6.根据权利要求5所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，将所述种子液稀释20-30倍后，以体积百分数为5-8%进行接种。
7.根据权利要求6所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，所述暗培养在已消毒的培养间进行培养，培养条件为:温度20-25°C，湿度60-70%，培养 6-8d。
8.根据权利要求7所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，所述菌丝转色培养的培养条件为:温度15-20°C，湿度60-70%，每天通风1.5-2.5h，光照8-12h，光照强度为250-300Lux，培养5_8d。
9.根据权利要求8所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，所述子实体培养的培养条件为:透气培养，温度为20°C ±2°C，湿度为80-90%，每天通风1.5-2.5h，光照6-8h，光照强度为250-300Lux，培养至子实体长度为6_10cm，采收得到所述蛹虫草子实体。
10.根据权利要求7所述的高产多糖蛹虫草的培养方法，其特征在于，所述消毒为:将装有过氧乙酸溶液的容器置于75-85°C的水浴中熏蒸对所述培养间消毒，熏蒸时间为90-100min，所述过氧乙酸每立方米空间用量为3_3.2g ;消毒期间，培养间室温不低于20°C，湿度为 60% -80%。
【文档编号】A01G1/04GK103988712SQ201410234859
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年5月29日 优先权日:2014年5月29日
【发明者】熊艳 申请人:熊艳