一种微生物复合制剂及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种微生物复合制剂，属于微生物【技术领域】。微生物复合制剂，由制剂a）菌种保藏号为CGMCCNo.5652的枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis发酵培养液、制剂b）菌种保藏号为ATCC11077的蜡质芽孢杆菌Bacilluscereus发酵培养液、制剂c）菌种保藏号为ATCC11946的地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis发酵培养液，复配成的复合菌剂为药效成分，再辅以药剂学上可接受的添加剂制成；所制成的微生物复合制剂中菌落总数比为，菌种保藏号为CGMCCNo.5652的枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis：菌种保藏号为ATCC11946的地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis：菌种保藏号为ATCC11946的地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis=（40-180）：（3-15）：（9-33）。本发明能够有效防治茄科作物多种土传病害，并具有防效突出的优点。
【专利说明】—种微生物复合制剂及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种防治茄科作物土传病害的微生物复合制剂，属于微生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]茄科作物常见土传病害主要有镰刀枯萎病、疫病、青枯病、根结线虫病等。该类病害在田间常混合发生，如根结线虫病害会大大加重镰刀枯萎病或青枯病发生，生产上既缺乏抗病品种，又缺少高效低毒的农药，因而损失巨大。
[0003]土传病害生物防治实施过程中，有多种微生物菌剂通过与基肥混施、灌根等措施取得了一定防效，但仍存在的突出问题是:1、防效单一，广谱性差；2、防效持续时间短；
3、连续使用成本高昂。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种防治茄科作物土传病害的微生物复合制剂，该制剂能够有效防治茄科作物多种土传病害，具有防效好、操作简单、易于推广的优点。
[0005]本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:
微生物复合制剂，由制剂a)菌种保藏号为CGMCC N0.5652的枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis发酵培养液、制剂b)菌种保藏号为ATCC 11077的蜡质芽孢杆菌Bacilluscereus发酵培养液、制剂c)菌种保藏号为ATCC 11946的地衣芽孢杆菌BacillusIicheniformis发酵培养液，复配成的复合菌剂为药效成分，再辅以药剂学上可接受的添加剂制成；所制成的微生物复合制剂中菌落总数比为，菌种保藏号为CGMCC N0.5652的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis:菌种保藏号为ATCC 11946的地衣芽孢杆菌BacillusIicheniformis:菌种保藏号为 ATCC 11946 的地衣芽抱杆菌 Bacillus Iicheniformis=(40-180):(3-15):(9-33)o
[0006]作为上述技术方案的优选，制剂a)浓度为α X 10lclcfu/ml、制剂b)浓度为β X109cfu/ml、制剂c)浓度为Y X109cfu/ml，且体积比制剂a:制剂b:制剂C= (1-3):(1-3):(1-3) ； α =2.0 ~ 3.0, β =1.5 ?2.5，Y =4.5 ?5.5。
[0007]作为上述技术方案的优选，体积比制剂a:制剂b:制剂c=3:1:2，α =2.5，β =2.0,Y _5.0 ο
[0008]作为上述技术方案的优选，所述药剂学上可接受的添加剂包括作为稳定剂的微晶纤维素、作为乳化剂的非离子型表面活性剂。
[0009]作为上述技术方案的优选，所述微晶纤维素为羧甲基纤维素钠，用量2.0?3.0g/L ;所述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚，用量4.0?5.0g/L。
[0010]本发明的还一个目的是提供上述微生物复合制剂在防治茄科作物土传病害方面的应用。
[0011]作为上述技术方案的优选，微生物复合制剂在防治茄科作物青枯病病害方面的应用。
[0012]作为上述技术方案的优选，微生物复合制剂在防治茄科作物辣椒、番茄、茄子青枯病病害方面的应用。
[0013]本发明具有以下有益效果:
本发明能够有效防治茄科作物多种土传病害，并具有防效突出的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1是发病情况统计表。
【具体实施方式】
[0015]本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
[0016]实施例一
1、微生物复合制剂，它是通过以下方法制备的:
(1)菌种活化
将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis (菌种保藏号CGMCCN0.5652 )、蜡质芽孢杆菌Bacillus cerews 菌种保藏号(ATCC 11077)、地衣芽抱杆菌Iicheniformis {鬼种保藏号ATCC 11946)菌株自_80°C超低温冰箱取出后，经3次转接活化培养，培养基为LB固体培养基；
(2)种子菌液制备
分别挑取单菌落，在新的液体种子培养基LB中，28°C，180rpm，培养15小时；
(3)按0.5%的接种量，接种到发酵罐液体培养基中；
所述液体培养基配方为:以重量百分比计，麦芽糖0.2% ;玉米粉，0.5% ;黄豆粉，0.4% ；胰蛋白胨，0.5% ；CaCl2,0.02% ；MnSO4,0.05% ;Κ2ΗΡ04，0.1% ;余下为水；所述液体培养基的pH为 7.0 ;
(4)200rpm，20°C培养 3 天；
(5)将枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌发酵液按3:1:2比例(体积比)混合；
(6)在混合菌液中添加稳定剂羧甲基纤维素钠(CMCNa2.2g/L)与表面活性剂(脂肪醇聚氧乙烯醚)4.5g/L制成微生物复合制剂。
[0017]2、复合微生物菌剂施用方式
(I)茄科作物(辣椒、番茄、茄子)种子处理:穴盘育苗前，选取颗粒饱满的种子在微生物复合制剂100倍稀释液浸泡30分钟，避光阴干。
[0018](2)穴盘育苗:浸种处理后，在装有育苗基质的穴盘播种，覆土后喷灌微生物复合制剂100倍液至基质湿透，育苗棚温度为18?33°C，每天光照时间为8?15h。所用基质中含有泥炭土、珍珠岩、蛭石及食用菌废料中的一种或多种。
[0019](3)壮苗移栽:3-5片真叶的壮苗、带基质从穴盘中取出，移栽至常年发生严重青枯病的田块中，每株苗浇微生物复合制剂250倍稀释液200-250ml。
[0020](4)盛果期每株浇微生物复合制剂250倍稀释液200_250ml。
[0021](5)每30个植株作为一个处理单元。
[0022]实施例二
1、微生物复合制剂，它是通过以下方法制备的:
(1)菌种活化
将枯草芽孢杆菌Bacillus sub tilis (菌种保藏号CGMCCN0.5652 )、蜡质芽孢杆菌Bacillus cerews 菌种保藏号(ATCC 11077)、地衣芽抱杆菌Iicheniformis {鬼种保藏号ATCC 11946)菌株自_80°C超低温冰箱取出后，经3次转接活化培养，培养基为LB固体培养基；
(2)种子菌液制备
分别挑取单菌落，在新的液体种子培养基LB中，37°C，200rpm，培养15小时；
(3)按0.5%的接种量，接种到发酵罐液体培养基中；
所述液体培养基配方为:以重量百分比计，麦芽糖0.5% ;玉米粉，0.7% ;黄豆粉，1% ;胰蛋白胨，0.5% ；CaCl2,0.02% ；MnSO4,0.05% ;Κ2ΗΡ04，0.1% ;余下为水；所述液体培养基的pH为7.0 ；
(4)200rpm，37°C培养 2 天；
(5)将枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌发酵液按3:1:2比例(体积比)混合；
(6)在混合菌液中添加稳定剂羧甲基纤维素钠(CMCNa2.2g/L)与表面活性剂(脂肪醇聚氧乙烯醚)4.5g/L制成微生物复合制剂。
[0023]2、复合微生物菌剂施用方式
(I)茄科作物(辣椒、番茄、茄子)种子处理:穴盘育苗前，选取颗粒饱满的种子在微生物复合制剂100倍稀释液浸泡30分钟，避光阴干。
[0024](2)穴盘育苗:浸种处理后，在装有育苗基质的穴盘播种，覆土后喷灌微生物复合制剂100倍液至基质湿透，育苗棚温度为18?33°C，每天光照时间为8?15h。所用基质中含有泥炭土、珍珠岩、蛭石及食用菌废料中的一种或多种。
[0025](3)壮苗移栽:3-5片真叶的壮苗、带基质从穴盘中取出，移栽至常年发生严重青枯病的田块中，每株苗浇微生物复合制剂250倍稀释液200-250ml。
[0026](4)盛果期每株浇微生物复合制剂250倍稀释液200_250ml。
[0027]在该测试系统中，以水作为空白对照；以72%农用链霉素可溶性粉剂，稀释3000倍作为阳性对照。
[0028](5)每30个植株作为一个处理单元。
[0029]进入盛果期后开始统计发病植株的数量，采收后期进行数据统计。
[0030]病情统计:青枯病发病一般不分级，病株调查记录为发病或不发病两种结果。
[0031]发病率=(发病株数/30) X 100%
相对防效={ (CK单元发病率一用药单元发病率)/CK单元发病率} X 100%
发病情况统计如图1所示:
由以上实验结果可以看出，该微生物复合制剂作为一种生物制剂防治青枯病效果显著，而单独施用任何一种微生物菌剂的防治效果较差。
【权利要求】
1.微生物复合制剂，其特征在于:由制剂a)菌种保藏号为CGMCCN0.5652的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis发酵培养液、制剂b)菌种保藏号为ATCC 11077的蜡质芽孢杆菌Bacillus cereus发酵培养液、制剂c)菌种保藏号为ATCC 11946的地衣芽孢杆菌BaciIIusIicheniformis发酵培养液，复配成的复合菌剂为药效成分，再辅以药剂学上可接受的添加剂制成；所制成的微生物复合制剂中菌落总数比为，菌种保藏号为CGMCC N0.5652的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis:菌种保藏号为ATCC 11946的地衣芽孢杆菌BacillusIicheniformis:菌种保藏号为 ATCC 11946 的地衣芽抱杆菌 Bacillus Iicheniformis=(40-180):(3-15):(9-33)o
2.根据权利要求1所述的一种微生物复合制剂，其特征在于:制剂a)浓度为α X 101Qcfu/ml、制剂b)浓度为β X 109cfu/ml、制剂c)浓度为y X 109cfu/ml,且体积比制剂 a:制剂 b:制剂 C= (1-3):(1-3):(1-3) ;α =2.0 ?3.0，β =1.5 ?2.5，Y =4.5 ?5.5。
3.根据权利要求2所述的一种微生物复合制剂，其特征在于:体积比制剂a:制剂b:制剂 c=3:1:2, α =2.5，β =2.0, Y =5.0。
4.根据权利要求1所述的一种微生物复合制剂，其特征在于:所述药剂学上可接受的添加剂包括作为稳定剂的微晶纤维素、作为乳化剂的非离子型表面活性剂。
5.根据权利要求4所述的一种微生物复合制剂，其特征在于:所述微晶纤维素为羧甲基纤维素钠，用量2.0?3.0g/L ;所述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚，用量4.0?5.0g/L。
6.权利要求1-5所述的微生物复合制剂在防治爺科作物土传病害方面的应用。
7.权利要求1-5所述的微生物复合制剂在防治茄科作物青枯病病害方面的应用。
8.权利要求1-5所述的微生物复合制剂在防治茄科作物辣椒、番茄、茄子青枯病病害方面的应用。
【文档编号】A01N63/02GK104365677SQ201410685038
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】高丙利, 王成树, 李师默, 张鹏 申请人:中国科学院上海生命科学研究院湖州现代农业生物技术产业创新中心