本发明涉及微生物领域，特别是涉及枯草芽孢杆菌HMB19198制剂在防治香蕉巴拿马病的方法。
背景技术：
香蕉(学名：Musa nana Lour.)芭蕉科芭蕉属植物。热带地区广泛栽培食用。香蕉味香、富含营养，终年可收获，在温带地区也很受重视。植株为大型草本，从根状茎发出，由叶鞘下部形成高3～6公尺(10～20尺)的假杆；叶长圆形至椭圆形，有的长达3～3.5公尺(10～11.5尺)，宽65公分(26寸)，10～20枚簇生茎顶。穗状花序大，由假杆顶端抽出，花多数，淡黄色；果序弯垂，结果10～20串，约50～150个。植株结果后枯死，由根状茎长出的吸根继续繁殖，每一根株可活多年。原产亚洲东南部：中国台湾、海南、广东、广西等地区均有栽培。
香蕉巴拿马病(Panama disease)，又名：香蕉枯萎病，是一种通过土壤传播的香蕉传染病，染病香蕉逐步巴拿马死亡，且因为土壤遗留，发病地区30年以上不能种植香蕉，是香蕉的“不治之症”，也是威胁全球香蕉种植业的最大杀手。
香蕉巴拿马病在我国南方数省香蕉产区都有发生的毁灭性病害，其表现在成株期病株先在下部叶片及靠外的叶鞘呈现特异的黄色，初期在叶片边缘发生，然后逐部向中肋扩展，与叶片的深绿部分对比显著。也有整片叶子发黄的，感病叶片迅速凋萎，由黄变褐而干枯，其最后一片顶叶往往迟抽出或不能抽出，最后病株枯死。有个别虽然不随即枯死，但果实发育不良，品质低劣。母株发病，在地上部(即假茎)枯死后，其地下部(即球茎)不立即枯死，仍能长出新芽，继续生长，要到生长中后期才显现症状。
经研究发现，香蕉巴拿马病是一种侵染香蕉植株维管束的真菌引起的土传病。是一种毁灭性病害，是国际植物检疫对象，由尖孢镰刀菌古巴专化型侵染引起。在中国南方数省香蕉产区都有发生。主要有布1号和4号小种，1 号小种主要为害粉蕉，4号小种为害粉蕉和香蕉。一般减产达到20％以上，严重的田块甚至绝收。
香蕉巴拿马病的病原菌在土壤里面可以残存30年以上，没有任何的农药可以去把它根除掉，所以虽然有一些简单的水稻轮作，或者是用一些有机质，土壤的改进内有效，但那都是局部性的，还是需要以用抗病的，或耐病的品种为主。
在目前的香蕉巴拿马病防治中，本技术领域技术人员还没有找到“特效药”。在本领域内，技术人员也正在不断的试验摸索中寻找能更好防治香蕉巴拿马病的制剂，其中依然是靠综合防治为主：1、严格执行检疫制度严格限制蕉苗和马尼拉麻苗及其所附带的土壤由病区输入；2、选栽无病种苗和抗病品种为确保蕉园无巴拿马病，应选栽无病蕉苗，基本方法是从没有香蕉巴拿马病的地区引种。此外，尽可能选用抗巴拿马病的品种；3、封锁病区，防止病害扩散。蕉园发现零星病株，要立即连根拔起并把病株斩碎，装入塑料袋内，加入石灰并密封袋口，移出且远离蕉园让其腐烂；4、病土处理为了清除侵染来源，杜绝传播机会，病土处理是一项很重要的措施；5、加强栽培管理增施肥料，开沟排水，增强植株抗病力。平地重病蕉园有条件的可淹水休闲半年或与水稻轮作。6、配合化学药剂进行相应防治。但由于化学药剂其存在根本性的弊端，如药性单一，易造成高毒、高残、导致香蕉品质降低，同时易产生抗药性。因为在同一地区长期，连续使用一种农药，或使用作用机理相同的农药，害虫、病菌或杂草对农药抵抗力就会的提高，进而产生一定的抗药性。
近年来，生物防治方法由于高效、环保、无污染、无残留等优点越来越受到重视。因此，如何寻找到能够防治香蕉巴拿马病生物菌剂是本领域技术人员目前亟需解决的技术问题。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种预防或治疗香蕉巴拿马病的方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种预防或治疗香蕉巴拿马病的方法，包括：为香蕉施用枯草芽孢杆菌HMB19198制剂。
为香蕉施用枯草芽孢杆菌HMB19198制剂。
优选的，所述枯草芽孢杆菌HMB19198制剂的活芽孢含量为：10亿活芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。
优选的，所述枯草芽孢杆菌HMB19198的用量为50g/株-200g/株。
优选的，所述施用为灌根法。
本发明的枯草芽孢杆菌制剂是一种利用生物防治香蕉巴拿马病的解决办法，该菌剂对香蕉巴拿马病有较好的防治效果，同时还是一种微生物菌剂，这样就更保证了香蕉巴拿马病的防治是高效环保，无污染的；同时制作方法也非常简单，成本也非常低，使用技术非常成熟，是防治香蕉巴拿马病的一种更佳手段。
具体实施方式
本发明的核心是提供一种预防或治疗香蕉巴拿马病的方法，能够有效的防治香蕉巴拿马病。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：枯草芽孢杆菌可湿性粉剂对香蕉苗的安全性测试。
本实施例的目的是测定枯草芽孢杆菌可湿性粉剂防治香蕉的安全性，为其防治香蕉巴拿马病提供依据。
本实施例的供试作物为香蕉，其中作物品种分别为高脚顿地雷，属于高干型香牙蕉，为广东省高州市优良品种之一；畦田大蕉，属大蕉类型，为广东新会的地方品种之一；中山大粉蕉，属粉蕉类型，为广东中山的地方品种之一，以上香蕉苗均从广东省农科院购买供试。
本实施例的供试药剂为利用枯草芽孢杆菌HMB19198生产的微生物菌剂，该微生物菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌HMB19198芽孢和它的胞外代谢产物。本实施例使用科绿丰生化科技有限公司以枯草芽孢杆菌HMB19198芽孢生产的10亿活芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂，其用量一般最高为50g/株，按其 1，2，3倍的梯度设计试验剂量，即50、100、200g/株。对照药剂为100亿孢子/克枯草芽孢杆菌，按照试验药剂的设计浓度，根据有效成分等量原则，确定为5g/株。以不含药剂清水处理作为空白对照。
本实施例的培养条件是在室内进行，将上述3个香蕉品种的组培苗栽种于营养钵中，以未种香蕉的肥沃田土加适量腐熟有机肥作为培养基质，常规管理，培养至香蕉5叶期备用。
本实施例的施药方法为灌根法，将药液稀释后均匀浇灌到盆栽香蕉根部土层，浇灌量以土层有明显浇灌湿润但无积水为止。
本实施例的试验方法如下：挑选叶片数5叶，假茎高度基本一致的香蕉苗，沿香蕉苗根周边挖深约10cm沟，进行穴施处理。以清水对照、本供试农药10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂50、100、200g/株，对照药100亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂5g/株，施药后盖薄土层。每处理4重复，每重复5株香蕉苗，即每处理共20株香蕉苗。置于室内，常规用水管理，试验期间不另施肥料。
本实施例采用的调查方法如下：本试验中，施药后5天，观察香蕉叶片，比对各药剂处理对叶片是否有药害，如有药害，记录药害产生的时间、症状和严重程度，根据NY/T 1965.1-2010中药害分级标准进行分级，培养至施药后21天，观察有无畸形，徒长等情况，如有药害，继续观察其发展程度，是否能恢复以及恢复情况等，分别计算其叶片数，测量其假茎高度(cm)，比较处理与CK之间的差异性，按下式计算安全系数I，评价对香蕉苗生长的影响。
安全系数I＝药剂对作物的最大无影响试验剂量/药剂田间最高推荐使用剂量
本实施例在试验处理后5天目测，供试10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂50、100、200g/株，以及对照药剂100亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂5g/株穴施处理后，3种受试验香蕉均是安全无药害，叶片均表现为浓绿色，无黄化、白化、褪绿、锈斑、枯斑等变色、坏死现象，叶缘正常，与清水对照CK无明显差异。施药处理后21天观察，各处理香蕉无徒长、叶片异常卷曲等畸形现象，假茎无缢缩，叶片数、假茎高度目测与CK无差异，说明供试在一般最高用量以及2倍、4倍条件下均对目标作物香蕉苗安全无药害。
测试结果见下表：
表1、供试10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP灌根对香蕉苗的安全性评价
注：相同品种同列数据后小写字母相同者，表示经DMRT法统计比较差异不显著(p-0.05)
从本实施例结果的数据可知，试验药剂10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂50、100、200g/株穴施，对“高脚顿地雷”、“畦头大蕉”和“中山大粉蕉”香蕉苗灌根处理后21天，叶片数分别为6.5-7.1、5.6-6.1、5.0-5.6叶/株，假茎高度方面分别为67.6-40.7、32.67-33.8、31.8-33.4cm均与对照药剂100亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP制剂5g/株穴施以及清水对照CK区的叶片数无显著差异或略优于CK，但均与对照药剂、CK的差异在“±10％”以内，且无其他症状，按照NY/T1965.1-2010规定标准，说明本试验剂量和方法下，10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP对3种供试香蕉品种安全。
原始数据如下：
表2 10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP对香蕉秒叶片数的影响(穴施法，药后21天，叶/株)
表3 10亿孢子/克枯草芽孢杆菌WP对香蕉苗假茎高度的影响(穴施法，药后21天，单位：cm)
实施例二：芽孢杆菌可湿性粉剂防治香蕉巴拿马病室内生物活性测定。
本实施例的目的是测定200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂对香蕉巴拿马病室内生物活性，确定药剂的最佳使用剂量和合理的使用技术。
本实施例的供试靶标为香蕉巴拿马病菌，是尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium o×ysporum f.sp.cubense4号生理小种B2菌株，由华南农业大学农学院植物病理学系真菌研究室提供，活化供试。
本实施例的供试药剂为利用枯草芽孢杆菌HMB19198生产的微生物菌剂，该微生物菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌HMB19198芽孢和它的胞外代谢产物。本实施例使用科绿丰生化科技有限公司以枯草芽孢杆菌HMB19198芽孢生产的200亿活芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂；对照药剂选用由湖北省武汉天惠生物工程有限公司提供的2000亿孢子/克枯草芽孢杆菌；并选用乳化剂0203B作为其他溶剂使用。
本实施例的药剂配制如下：
根据预备试验，设计试验药剂和对照药剂枯草芽孢杆菌的试验浓度为1×104、1×105、1×106、1×107、1×108cfu/mL(抑菌率约20％-90％，PDA培养基中含药浓度，下同)。
取试验药剂200亿孢子/克枯草芽孢杆菌(R31)原粉和对照药剂2000亿孢子/克枯草芽孢杆菌母药，分别用含0.05％0203B乳化剂的清水配制枯草芽孢杆菌成2×109cfu/mL，其他浓度的药液，均由上一级浓度药液稀释而来。
本实施例的药剂处理如下：在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌PDA培养基定量加入无菌锥形瓶中，按药液与培养基体积比1∶19比例，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加入上述锥形瓶中，制成上述浓度的含药PDA培养基，然后倒入直径为9cm的培养皿，每皿培养基20mL，制成相应浓度的含药平板。每浓度设4个重复，每重复1个培养皿。
本实施例接种与培养：将活化培养7d的香蕉巴拿马病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘且取菌饼，用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上皿盖，置于温度25±1℃，湿度80％-90％培养箱黑暗连续培养7d后调查。
调查过程如下：培养7d后，对照培养皿中病菌已覆盖培养皿90％以上，用直尺以十字交叉法垂直测量菌落直径各一次，单位为cm。
本实施例的统计与分析方法如下：每处理4重复，取其平均值D，按如下公式计算各处理对供试香蕉巴拿马病菌菌丝生长抑制率，单位为百分比(％)
D＝D1-D2(其中D：菌落增长直径；D1：菌落直径；D2：菌饼直径)
I＝(D0-Dt)/D0×100
I：菌丝生长抑制率；D0＝空白对照菌落增长直径，Dt＝药剂处理菌落增长 直径
根据各药剂浓度对数值及对应的防效几率值作线性回归分析，求毒力回归方程，计算各单剂及其各配比的抑制中浓度EC50、EC90及其95％置信限(mg/L)。
本实施例结果分析：
各处理菌落直径数据见表1，EC50值等做指标计算结果见表2，。结果显示，培养后7d，CK菌落直径增加7.81cm，供试药剂200亿孢子/克枯草芽孢杆菌原粉抑制供试香蕉巴拿马病菌菌丝生长的EC50值和EC90值分别为1.64×105CFU/mL和156.78×105CFU/mL，对照药剂2000亿孢子/克枯草芽孢杆菌母药对同种香蕉巴拿马病菌的EC50和EC90值分别为1.81×105CFU/mL和128.40×105CFU/mL，EC50值与供试枯草芽孢杆菌原粉基本一致(±10％以内)，符合此类产品的常规活性特征。
表4枯草芽孢杆菌对香蕉巴拿马病菌的室内生物活性测定数据(cm，平皿法)
注：菌落直径增加值＝菌落直径值(0.5cm)抑菌率(％)(CK增加值-处理增加值)/CK增加值×100％
表5枯草芽孢杆菌对香蕉巴拿马病菌的毒力(平皿法)
注：EC50/EC90机器95％置信限浓度单位均为×105CFU/mL
本实施例结论为枯草芽孢杆菌原粉对香蕉巴拿马病菌抑制活性为EC50值和EC90值分别为1.64CFU/mL和1.56.78CFU/mL，与使用的同类产品的母药的生物活性差异不明显，即达到了其防治水平。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明的基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。