一种噻苯隆甘草增殖培养基的制作方法

文档序号:11711079阅读:553来源:国知局

本发明属于甘草组织培养技术领域,尤其涉及一种噻苯隆甘草增殖培养基。



背景技术:

甘草,(学名:glycyrrhizauralensisfisch)别名:国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本,根与根状茎粗壮,是一种补益中草药。对人体很好的一种药,药用部位是根及根茎,药材性状根呈圆柱形,长25~100厘米,直径0.6~3.5厘米。外皮松紧不一,表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形,表面有芽痕,断面中部有髓。气微,味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿,日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源,造成水土流失和严重土壤沙漠化。另外,甘草种子主要来自野生甘草,其品种混杂,种子稀缺,发芽率极低,野生资源不适应规模化和标准化生产的需要。同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖,使野生植物几乎灭绝,对甘草的保护性利用迫在眉睫,但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求,从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用,然而现有的甘草组培增值系数太低,已经无法满足目前的需求增长速度。

稀土元素是17种特殊的元素的统称,它的得名是因为瑞典科学家在提取稀土元素时应用了稀土化合物,所以得名稀土元素。然而稀土是历史遗留下来的名称,稀土是从18世纪末开始陆续发现,当时人们常把不溶于水的固体氧化物称为土,例如,将氧化铝称为“陶土”,氧化钙称为”碱土“等。稀土一般是以氧化物状态分离出来的,当时比较稀少,因而得名为稀土(rareearth,简称re或r),然而经过大量的科学研究,在组织培养当中添加了稀土元素会大大地提高组织培养的质量。

铈是周期系第ιιι族副族镧系元素,一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素:136、138、140、142。灰色金属,有展性。密度:正方晶体6.9,立方晶体6.7。熔点799℃,沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属,粉末在空气中易自燃,易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%,是稀土元素中丰度最高的。



技术实现要素:

基于现有技术中甘草的需求量巨大但供给品质参差不齐,且现有培养基的诱导效率低的问题,本发明提供一种噻苯隆甘草增殖培养基,其以ms培养基为基础培养基,并添加tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖,其在培养基当中添加了噻苯隆,调整了激素的组成成分及比例以及添加了稀土元素,提高了甘草的增值率,本发明具有增值系数高的优点。

一种噻苯隆甘草增殖培养基,其以ms培养基为基础培养基,并添加tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)、活性炭、硝酸铈、维生素、琼脂粉和白砂糖。

其中,tdz(噻苯隆)的浓度为0.04-0.08mg/l、naa(萘乙酸)的浓度为1-4mg/l、活性炭的浓度为0.05-0.2mg/l、硝酸铈的浓度为1-5g/l,维生素的浓度为0.1-0.5mg/l,琼脂粉的浓度为8-12g/l、白砂糖的浓度为5-10g/l。

其中,tdz(噻苯隆)的浓度为0.05-0.07mg/l、naa(萘乙酸)的浓度为2-3mg/l、活性炭的浓度为0.1-0.15mg/l、硝酸铈的浓度为2-4g/l,维生素的浓度为0.2-0.4mg/l,琼脂粉的浓度为9-11g/l、白砂糖的浓度为6-8g/l。

其中,所述的培养基的ph值为5.0-6.0。

其中,所述的培养基的ph值为5.4。

其中,所述的维生素是维生素c。

一种噻苯隆甘草增殖培养基的配制方法,其包括以下步骤:

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液;

步骤s20,取ms培养基母液配制ms培养基,并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖,使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基ph值;

步骤s30,使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟,取出培养基并在超净工作台中静置冷却;

步骤s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和维生素溶液,并进行过滤灭菌;

步骤s50,待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤s40配制好的试剂,摇晃均匀,静置,冷却凝固。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。

实施例一:

按以下步骤配制实验组ms培养基:

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液。

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液;

步骤s20,取ms培养基母液配制ms培养基,并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖,使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基ph值为5.0;

步骤s30,使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟,取出培养基并在超净工作台中静置冷却;

步骤s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和维生素c溶液,并进行过滤灭菌;

步骤s50,待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤s40配制好的试剂,摇晃均匀,静置,冷却凝固。

其中培养基的配方如下:以ms培养基为基础培养基,添加tdz(噻苯隆)的浓度为0.04mg/l、naa(萘乙酸)的浓度为1mg/l、活性炭的浓度为0.05mg/l、硝酸铈的浓度为1g/l,维生素c的浓度为0.1mg/l,琼脂粉的浓度为8g/l、白砂糖的浓度为5g/l。

将健康的甘草愈伤组织接种到实验组ms培养基中出行常规组织培养,20天后计算甘草增值系数,达到3.48。

实施例二:

实施例二与实施例一的不同之处在于,调整了培养基配方浓度和ph值。

按以下步骤配制实验组ms培养基:

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液。

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液;

步骤s20,取ms培养基母液配制ms培养基,并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖,使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基ph值为6.0;

步骤s30,使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟,取出培养基并在超净工作台中静置冷却;

步骤s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和维生素c溶液,并进行过滤灭菌;

步骤s50,待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤s40配制好的试剂,摇晃均匀,静置,冷却凝固。

其中培养基的配方如下:以ms培养基为基础培养基,添加tdz(噻苯隆)的浓度为0.08mg/l、naa(萘乙酸)的浓度为4mg/l、活性炭的浓度为0.2mg/l、硝酸铈的浓度为5g/l,维生素c的浓度为0.5mg/l,琼脂粉的浓度为12g/l、白砂糖的浓度为10g/l。

将健康的甘草愈伤组织接种到实验组ms培养基中出行常规组织培养,20天后计算甘草增值系数,达到3.89。

实施例三:

实施例三与实施例一和二的不同之处在于,调整了培养基配方浓度ph值。

按以下步骤配制实验组ms培养基:

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液。

步骤s10,使用电子秤按照ms培养基标准配方配制1000倍ms培养基母液;

步骤s20,取ms培养基母液配制ms培养基,并按配方添加活性炭、硝酸铈、琼脂粉和白砂糖,使用盐酸或者氢氧化钠调节培养基ph值为5.4;

步骤s30,使用高温高压蒸汽灭菌锅用121℃对培养基灭菌20分钟,取出培养基并在超净工作台中静置冷却;

步骤s40,按照配方配制tdz(噻苯隆)、naa(萘乙酸)和维生素c溶液,并进行过滤灭菌;

步骤s50,待培养基冷却到60℃时向培养基中加入步骤s40配制好的试剂,摇晃均匀,静置,冷却凝固。

其中培养基的配方如下:以ms培养基为基础培养基,添加tdz(噻苯隆)的浓度为0.06mg/l、naa(萘乙酸)的浓度为2.5mg/l、活性炭的浓度为0.15mg/l、硝酸铈的浓度为3g/l,维生素c的浓度为0.3mg/l,琼脂粉的浓度为10g/l、白砂糖的浓度为7g/l。

将健康的甘草愈伤组织接种到实验组ms培养基中出行常规组织培养,20天后计算甘草增值系数,达到4.32。

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