一种基于真菌提取物的草莓表面杀菌剂的制作方法

本发明涉及一种基于真菌提取物的草莓表面杀菌剂。

背景技术：

真菌来源为植物射干，产地四川雅安某种植基地，二年生根茎中分离得到。经鉴定真菌为细极链格孢(alternariatenuissima)。其保藏编号为cgmccno.4443。

而草莓是冬春间市场中上销售最火爆的水果之一，其鲜美红嫩，果肉多汁，此外还含有丰富的维生和人体必需的矿物质和部分微量元素。草莓因其营养丰富且有特殊的浓郁水果芳香受到人们的喜爱。草莓的高营养、高含水量和含糖量加之质地柔软一方面为草莓提供食用基础，另一方面也为微生物的繁殖生长提供了良好的条件，这为草莓的食用带来了严重的安全隐患。

由于草莓极易受微生物感染存在食用安全的隐患，对其微生物的控制也有大量的研究，传统方法为农药杀菌剂应用于草莓生长阶段，冷激、氯化钙、植酸、过氧乙酸、低温等用于草莓采摘后保鲜生物制剂在草莓保鲜上有所应用，例如中药提取剂，抗生素，防腐剂，精油熏蒸，膜技术等。现有中药提取剂包括鹿蹄草、黄芩、黄柏、半边莲、北豆根、丁香对等中草药的单一或组配制剂等，中药提取物现有茶皂素、茶多酚等；精油有茶树、黄花、小茴香、百里香、罗勒、迷迭香百里香精油等；主要的防腐剂为柠檬酸钠、柠檬酸钙和山梨酸钾等。

除防腐剂外，现有的保鲜杀菌单剂或组方剂都真对的草莓致腐真菌青霉、灰霉菌等真菌进行控制，采用腐败率、感官评价等指标判断其杀菌保鲜能力，对其表面肠道致病菌的作用都没有进行专门的研究。

现有的生物技术虽然能对草莓进行一定的保鲜作用，但中药制剂和精油制剂成本较高，往往控制成本大于草莓本身的成本。

技术实现要素：

本发明所解决的技术问题在于提供一种基于真菌提取物的草莓表面杀菌剂，以解决上述背景技术中的缺点。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种基于真菌提取物的草莓表面杀菌剂，该提取物的提取步骤如下；

用直径为4mm的无菌打孔器打取已活化的细极链格孢菌株的菌饼2个，接种于含50mlczapek培养基的150ml锥形瓶中，于28℃、120r·min^-1培养7d，无菌滤纸过滤，加入等体积的乙酸乙酯萃取上清液3次，合并乙酸乙酯相，于40℃、8×10³pa条件下旋转蒸发，蒸馏水定容至3mg·ml^-1，4℃；得到细极链格孢scsg15提取物的水溶液。

本发明中，进一步的，所述培养基为mgso4·7h2o0.5g，k2hpo41g，kcl0.5g，feso4·7h2o0.01g，蔗糖30g，nano33g，定容至1000ml，ph＝7.0。

本发明的有益效果：scsg15为中药植物内生真菌提取物，相较下生物安全性较高，scsg15为微生物发酵液提取物相对成本较低廉，易于推广。

附图说明

图1为scsg15分子量图谱；

图2为采用scsg15对草莓抑菌实验后实测细菌总数的散点图；

图3为采用scsg15对草莓抑菌实验后大肠菌群对数值的散点图；

图4为scsg15its序列鉴定结果图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示，进一步阐述本发明。

一种基于真菌提取物的草莓表面杀菌剂，该提取物的提取步骤如下；用直径为4mm的无菌打孔器打取已活化的细极链格孢菌株的菌饼2个，接种于含50mlczapek培养基的150ml锥形瓶中，于28℃、120r·min^-1培养7d，无菌滤纸过滤，加入等体积的乙酸乙酯萃取上清液3次，合并乙酸乙酯相，于40℃、8×10³pa条件下旋转蒸发，蒸馏水定容至3mg·ml^-1，4℃；得到细极链格孢scsg15提取物的水溶液，对scsg15its序列采用mega6.0进行系统发育树构建获得真菌分子鉴定相关内容，鉴定结果如图4所示。所述培养基为mgso4·7h2o0.5g，k2hpo41g，kcl0.5g，feso4·7h2o0.01g，蔗糖30g，nano33g，定容至1000ml，ph＝7.0。

一、对scsg15提取物有效成分研究

对scsg15水溶液进行maldi-tof-ms质谱法分析，分子量图谱见图1，其中分别在分子量190，212，228，379,418有物质峰，可能为其有效物质成分。

scsg15的抗氧化能力为低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。食品中的保鲜剂的保鲜的原理就是其具有抗氧化能力。就是对scsg15进行抗氧化能力测试，实验结果见图，可见其抗氧化能力较强，抗氧化能力与中药射干根提取物的抗氧化能力相当。其抗氧化能力如表1：(表1中scsg茎1、scsg根1、scsg茎5、scsg根5、sg根30、sg根33为中药射干鲜品均质后乙酸乙酯萃取后，40℃、8×10³pa条件下旋转蒸发，甲醇定容至3mg·ml^-1后测定其抗氧化能力，采用二苯代苦味酰基自由基(dpph)法测定其自由基清除能力,四次平行试验，

表1

二、scsg15对草莓品质的影响

分别对喷施scsg15和未喷施草莓进行vc，总糖和可溶性固形物进行检测，方法标准施用gb5009.86-2016，ny/t2742-2015，检测样品分别为草莓喷施scsg15当天，4℃保藏2d，5d，常温保藏2d，5d数据如表2，试验结果表明喷施scsg15对其品质指标无影响，随着保藏时间增加scsg15可以延缓其腐败，保证其品质。

表2

三、scsg15对草莓表面常见致病微生物的影响

对草莓进行连续3年的微生物收集和整理，获得草莓表面微生物主体群落信息，包括常见致腐微生物：假单胞菌属，沙雷菌属，阴沟肠杆菌等；常见致病微生物：阪崎肠杆菌，沙门氏菌；细菌总数的数量级在10⁵-10⁸，大肠菌群计数的整体水平在10⁴-10⁶。施用scsg15对细菌总数和大肠生长有一定的抑制作用，表现如表3，红色的为细菌总数和大肠菌群的常温生长预测学模型，如图2、图3中的散点图为实测细菌总数和大肠菌群的对数值，试验结果表明scsg15不会清除草莓表面全部微生物，但可以使微生物数量以对数值减少，起到抑菌作用。此外对20份施用scsg15草莓样品进行沙门氏菌添加试验，仅有8份样品检出沙门氏菌，可见scsg15对草莓表面的致病微生物有一定的抑制作用，对沙雷菌属和假担保菌属也有一定的抑菌作用。

表3

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。