本发明涉及植物生物
技术领域：
，更具体地说涉及一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法。
背景技术：
：罗汉果甜苷v属于葫芦烷型四环三萜类物质，本课题组前期根据罗汉果转录组数据，已推导出甜苷v可能的生物合成途径。罗汉果甜苷v生物合成的前体物质是异戊烯二磷酸(ipp)和3,3-二甲基烯内基焦磷酸(dmapp)，二者是通过甲羟戊酸(mva)和甲基赤藓糖醇磷酸化(mep)量条途径形成，mva途径发生在胞质中，mep途径发生在质体中。来源于上述量途径的ipp或dmapp经牻牛儿基焦磷酸合酶(gps)催化形成牻牛儿基焦磷酸(gpp)，ipp与gpp在法呢基焦磷酸合酶(fps)的催化作用下进而形成法呢基焦磷酸(fpp)，然后经角鲨烯合酶(ss)、角鲨烯环氧化酶(se)的催化形成2,3-氧化角鲨烯，葫芦二烯醇合酶(cs)进一步催化形成葫芦二烯醇，最后在cyp450酶和葡萄糖基转移酶(ugt)的作用下，形成罗汉果甜苷v。异戊二烯类物质的产生受到限速酶活性的严格调控，一直被认为在其生物合成途径中起着重要的调控作用。作为异戊二烯途径中的限速酶，ugt基因的表达对罗汉果甜苷v的生物合成起着决定性作用。过表达ugt基因，可以促进罗汉果甜苷v的积累；相反，如果抑制ugt基因的表达，罗汉果甜苷v的产量将显著降低。然而，ugt基因是个超基因家族，本课题组前期研究发现，ugt6可能参与罗汉果甜苷v的合成途径。现有技术中未见有促进罗汉果ugt6基因表达的报道。技术实现要素：本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本发明还有一个目的是提供一种促进罗汉果ugt6基因的表达方法，其通过含有茉莉酸甲酯的培养基培养，并在栽培过程中喷洒含有茉莉酸甲酯的乙醇溶液，可促进罗汉果中ugt6基因的表达，从而促进罗汉果甜苷v的生物合成，提高其产量。为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/l的乙醇溶液。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤一中培养基还包括：ms、1～2mg/l的6-ba、0.2～0.5mg/l的iba、3～4g/l的琼脂、20～40g/l的蔗糖、0.5～2g/l的活性炭。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60～66％，光照强度为1200～1500lux，光照时间为8h/d，温度为23±2℃条件下培养30d。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后20～30d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒200～300g，连续喷洒5d。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40～50℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1～0.5份、秦皮乙素0.1～0.5份、武夷菌素0.05～0.1份、春雷霉素0.05～0.1份、井冈霉素0.01～0.05份、木醋液20～30份、聚六亚甲基胍0.1～0.5份、水50～100份、黄连素0.01～0.05份、苯甲酸钠0.1～0.5份、甲磺酸1～2份、辛菌胺0.1～0.5份、溶菌酶1～2份、溶壁酶2～3份、黄芪多糖0.1～0.5份、植物提取液1～2份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5～10份的槐根、8～10份的千金藤、5～10份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1～5份的蜂蜜，兑重量份为50～100份的水，即得植物提取液。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后10～20d之间，每5d天采用注射的方式将茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/l的乙醇溶液在注射入罗汉果植株的主茎中，每次注射量为1～3ml。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为30～50g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.1～0.5，所述保水剂由质量比为1:0.1～0.3的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。优选的是，所述的促进罗汉果ugt6基因表达的方法，步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按1000～2000kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：a、取重量份为10～20份的泥炭、1～2份的河沙、1～2份的珍珠岩、2～5份的硅藻土混合，向其中加入重量份为30～40份的水、1～2份的碳酸钠、1～2份的氢氧化钠、2～3份的磷酸钠，于温度为40～80℃下搅拌4～8h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.1～0.5份的硫酸铝、0.5～1份的聚丙酰胺、1～2份的聚丙烯酸钠，调节ph为1～2，继续搅拌1～2h，过滤，烘干，粉碎至200～500目，得到第一混合物；b、将重量份1～2份的聚乙二醇、0.5～1份的聚乙烯醇、15～20份的水于温度为85～100℃下搅拌溶解，得到第一混合液；c、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:5～10:0.1～0.5:0.5～1:2～5:1～2:0.1～0.5:0.1～0.2:1～2:0.05～0.1。本发明至少包括以下有益效果：1、本发明通过在将罗汉果组培苗置于含有茉莉酸甲酯的培养基中培养和栽培罗汉果过程中施加茉莉酸甲酯，短期内快速诱导罗汉果甜苷v生物合成途径中关键酶基因ugt6的高表达，从而促进罗汉果甜苷v的生物合成，为提高罗汉果甜苷v含量的积累打下坚实基础。2、在罗汉果授粉后通过注射方式向罗汉果植株注射茉莉酸甲酯溶液，以注射方式通过一定压力把茉莉酸甲酯溶液压到植株的各个部位，使罗汉果植株在短时间内吸收茉莉酸甲酯溶液，短期内加快ugt6的高表达，从而促进罗汉果甜苷v含量的提高。3、在罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒杀菌液，杀菌液中的蛇床子素、秦皮乙素、武夷菌素、春雷霉素、井冈霉素、溶菌酶、溶壁酶可与病毒结合后能使病毒、真菌失活；其中木醋液具有杀菌、促进植物生长等作用；杀菌液中的植物提取液可以防止培养环境中的细菌、病毒和真菌影响罗汉果组培苗的生长，提高罗汉果果实中甜苷v的含量，也能降低对培养环境的要求。4、本发明的培养基中还含有保水剂和核桃壳粉，保水剂培养基没有凝固时，能吸收培养基中的有效成分，保水剂中的沸石和核桃壳粉具有微孔结构，也能吸附很多培养基中的有效成分，这样能有效地保持营养成分，使营养成分的分布比较均匀，被保水剂和核桃壳粉吸收和吸附的营养成分能缓慢释放出来，有利于培养物长效地吸收有效成分，从而能促进罗汉果组培苗的生长，有利于提高罗汉果甜苷v的含量。5、本发明在罗汉果栽培前在待栽培土壤表面施加营养土，先将泥炭、河沙、珍珠岩、硅藻土用碳酸钠、氢氧化钠处理后，再用硫酸铝、聚丙酰胺、聚丙烯酸钠处理，调节ph，过滤、烘干、粉碎得到的第一混合物，第一混合物施加在土壤中可以使改善土壤结构激活土壤中的被固化的营养物质，同时保持土壤保水透气功能以罗汉果疏松润湿的土壤环境；同时在营养土中加入炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆、坚果壳粉、腐殖酸这些物质一方面可以为罗汉果生长提供营养物质，另一面这些物质均为疏松状，加入土壤中可进一步提高土壤的保水效果；在营养土表面喷洒聚乙二醇、聚乙烯醇溶液，聚乙二醇、聚乙烯醇中的羟基，通过氢键粘附在土壤表面减少土壤的固化，增加土壤的孔隙，促进罗汉果的生长，进而使ugt6的高表达，从而促进罗汉果甜苷v含量的提高。本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、1mg/l的6-ba、0.2mg/l的iba、3g/l的琼脂、20g/l的蔗糖、0.5g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60％，光照强度为1200lux，光照时间为8h/d，温度为21℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后20d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒200g，连续喷洒5d。实施例2一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为250μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为200μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、1.5mg/l的6-ba、0.3mg/l的iba、3.5g/l的琼脂、30g/l的蔗糖、1g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为63％，光照强度为1400lux，光照时间为8h/d，温度为23℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后25d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为200μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒250g，连续喷洒5d。实施例3一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、2mg/l的6-ba、0.5mg/l的iba、4g/l的琼脂、40g/l的蔗糖、2g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为66％，光照强度为1500lux，光照时间为8h/d，温度为25℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后30d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒300g，连续喷洒5d。实施例4一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、1mg/l的6-ba、0.2mg/l的iba、3g/l的琼脂、20g/l的蔗糖、0.5g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60％，光照强度为1200lux，光照时间为8h/d，温度为21℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后20d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒200g，连续喷洒5d。所述步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1份、秦皮乙素0.1份、武夷菌素0.05份、春雷霉素0.05份、井冈霉素0.01份、木醋液20份、聚六亚甲基胍0.1份、水50份、黄连素0.01份、苯甲酸钠0.1份、甲磺酸1份、辛菌胺0.1份、溶菌酶1份、溶壁酶2份、黄芪多糖0.1份、植物提取液1份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5份的槐根、8份的千金藤、5份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1份的蜂蜜，兑重量份为50份的水，即得植物提取液。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后10～20d之间，每5d天，即授粉后第15d、20d采用注射的方式将茉莉酸甲酯浓度为50μmol/l的乙醇溶液在注射入罗汉果植株的主茎中，每次注射量为1ml。所述步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为30g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.1，所述保水剂由质量比为1:0.1的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。所述步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按1000kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：a、取重量份为10份的泥炭、1份的河沙、1份的珍珠岩、2份的硅藻土混合，向其中加入重量份为30份的水、1份的碳酸钠、1份的氢氧化钠、2份的磷酸钠，于温度为40℃下搅拌4h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.1份的硫酸铝、0.5份的聚丙酰胺、1份的聚丙烯酸钠，调节ph为1，继续搅拌1h，过滤，烘干，粉碎至200目，得到第一混合物；b、将重量份1份的聚乙二醇、0.5份的聚乙烯醇、15份的水于温度为85℃下搅拌溶解，得到第一混合液；c、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:5:0.1:0.5:2:1:0.1:0.1:1:0.05。实施例5一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为250μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为200μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、1.5mg/l的6-ba、0.3mg/l的iba、3.5g/l的琼脂、30g/l的蔗糖、1g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为63％，光照强度为1400lux，光照时间为8h/d，温度为23℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后25d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为200μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒250g，连续喷洒5d。所述步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为45℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.3份、秦皮乙素0.3份、武夷菌素0.07份、春雷霉素0.08份、井冈霉素0.03份、木醋液25份、聚六亚甲基胍0.3份、水80份、黄连素0.03份、苯甲酸钠0.3份、甲磺酸1份、辛菌胺0.3份、溶菌酶1.5份、溶壁酶2.5份、黄芪多糖0.3份、植物提取液1.5份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为8份的槐根、9份的千金藤、7份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为3份的蜂蜜，兑重量份为70份的水，即得植物提取液。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后10～20d之间，每5d天，即授粉后第15d、20d采用注射的方式将茉莉酸甲酯浓度为250μmol/l的乙醇溶液在注射入罗汉果植株的主茎中，每次注射量为2ml。所述步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为40g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.3，所述保水剂由质量比为1:0.2的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。所述步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按1500kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：a、取重量份为15份的泥炭、2份的河沙、1份的珍珠岩、3份的硅藻土混合，向其中加入重量份为35份的水、1份的碳酸钠、2份的氢氧化钠、3份的磷酸钠，于温度为60℃下搅拌6h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.3份的硫酸铝、0.7份的聚丙酰胺、1份的聚丙烯酸钠，调节ph为1，继续搅拌1h，过滤，烘干，粉碎至300目，得到第一混合物；b、将重量份1份的聚乙二醇、0.8份的聚乙烯醇、18份的水于温度为90℃下搅拌溶解，得到第一混合液；c、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:8:0.3:0.7:3:1:0.3:0.1:1.5:0.07。实施例6一种促进罗汉果ugt6基因表达的方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、在栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗过程中，施加茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的乙醇溶液。所述步骤一中培养基还包括：ms、2mg/l的6-ba、0.5mg/l的iba、4g/l的琼脂、40g/l的蔗糖、2g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为66％，光照强度为1500lux，光照时间为8h/d，温度为25℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后30d后，每天喷洒三次茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的乙醇溶液，每株每次喷洒300g，连续喷洒5d。步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40～50℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1～0.5份、秦皮乙素0.1～0.5份、武夷菌素0.05～0.1份、春雷霉素0.05～0.1份、井冈霉素0.01～0.05份、木醋液20～30份、聚六亚甲基胍0.1～0.5份、水50～100份、黄连素0.01～0.05份、苯甲酸钠0.1～0.5份、甲磺酸1～2份、辛菌胺0.1～0.5份、溶菌酶1～2份、溶壁酶2～3份、黄芪多糖0.1～0.5份、植物提取液1～2份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5～10份的槐根、8～10份的千金藤、5～10份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1～5份的蜂蜜，兑重量份为50～100份的水，即得植物提取液。所述步骤二中在罗汉果栽培过程中，在罗汉果授粉后10～20d之间，每5d天，即授粉后第15d、20d采用注射的方式将茉莉酸甲酯浓度为400μmol/l的乙醇溶液在注射入罗汉果植株的主茎中，每次注射量为3ml。所述步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为50g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.5，所述保水剂由质量比为1:0.3的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。所述步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按2000kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：a、取重量份为20份的泥炭、2份的河沙、2份的珍珠岩、5份的硅藻土混合，向其中加入重量份为40份的水、2份的碳酸钠、2份的氢氧化钠、3份的磷酸钠，于温度为80℃下搅拌8h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.5份的硫酸铝、1份的聚丙酰胺、2份的聚丙烯酸钠，调节ph为2，继续搅拌2h，过滤，烘干，粉碎至500目，得到第一混合物；b、将重量份2份的聚乙二醇、1份的聚乙烯醇、20份的水于温度为100℃下搅拌溶解，得到第一混合液；c、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:10:0.5:1:5:2:0.5:0.2:2:0.1。对比例1一种罗汉果种植方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗，得到罗汉果果实。所述步骤一中培养基包括：ms、1mg/l的6-ba、0.2mg/l的iba、3g/l的琼脂、20g/l的蔗糖、0.5g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60％，光照强度为1200lux，光照时间为8h/d，温度为21℃条件下培养30d。对比例2一种罗汉果种植方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗，得到罗汉果果实。所述步骤一中培养基包括：ms、1mg/l的6-ba、0.2mg/l的iba、3g/l的琼脂、20g/l的蔗糖、0.5g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60％，光照强度为1200lux，光照时间为8h/d，温度为21℃条件下培养30d。所述步骤一中罗汉果置于培养基中培养时同时喷洒温度为40℃的杀菌液，得到罗汉果幼苗；所述杀菌液由以下重量份原料组成：蛇床子素0.1份、秦皮乙素0.1份、武夷菌素0.05份、春雷霉素0.05份、井冈霉素0.01份、木醋液20份、聚六亚甲基胍0.1份、水50份、黄连素0.01份、苯甲酸钠0.1份、甲磺酸1份、辛菌胺0.1份、溶菌酶1份、溶壁酶2份、黄芪多糖0.1份、植物提取液1份；其中，植物提取液的制备方法为：将重量份为5份的槐根、8份的千金藤、5份的土木香，用质量分数为70％的乙醇溶液提取量次，得到浸膏，加入重量份为1份的蜂蜜，兑重量份为50份的水，即得植物提取液。所述步骤一中培养基还含有保水剂与核桃壳粉，每升培养基含保水剂与核桃壳粉的重量为30g，所述保水剂与核桃壳粉质量比为5:0.1，所述保水剂由质量比为1:0.1的聚丙烯酸钾和沸石粉组成。对比例3一种罗汉果种植方法，包括以下步骤：步骤一、将罗汉果组培苗置于培养基中培养，得到罗汉果幼苗；步骤二、栽培步骤一中得到的罗汉果幼苗，得到罗汉果果实。所述步骤一中培养基包括：ms、1mg/l的6-ba、0.2mg/l的iba、3g/l的琼脂、20g/l的蔗糖、0.5g/l的活性炭；其中，6-ba为6-苄氨基腺嘌呤，iba为吲哚丁酸。所述步骤一中罗汉果组培苗的培养方法为：于相对湿度为60％，光照强度为1200lux，光照时间为8h/d，温度为21℃条件下培养30d。所述步骤二中在罗汉果栽培前，在待栽培土壤表面按1000kg/亩施加营养土，并翻耕均匀；所述营养土的制备方法包括以下步骤：a、取重量份为10份的泥炭、1份的河沙、1份的珍珠岩、2份的硅藻土混合，向其中加入重量份为30份的水、1份的碳酸钠、1份的氢氧化钠、2份的磷酸钠，于温度为40℃下搅拌4h，冷却至室温，然后再加入重量份为0.1份的硫酸铝、0.5份的聚丙酰胺、1份的聚丙烯酸钠，调节ph为1，继续搅拌1h，过滤，烘干，粉碎至200目，得到第一混合物；b、将重量份1份的聚乙二醇、0.5份的聚乙烯醇、15份的水于温度为85℃下搅拌溶解，得到第一混合液；c、将第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸混合均匀，然后表面均匀喷洒第一混合液即得营养土；其中，第一混合物、炉渣灰、花生壳粉、木屑、腐殖土、草木灰、大豆秸秆粉、坚果壳粉、腐殖酸、第一混合液的质量比为20:5:0.1:0.5:2:1:0.1:0.1:1:0.05。采用上述实施例1～6、对比例1～3方法得到的罗汉果果实，针对ugt6基因表达量以及甜苷v含量进行测定，具体方法以及结果如下。1、ugt6基因表达量测定方法：利用abi7500实时荧光定量pcr仪，采用qrt-pcr检测ugt6基因的表达，具体步骤如下：步骤一、采集罗汉果果实，挑取果肉，切成2-4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于-80℃备用。步骤二、先采用改良trizol法提取罗汉果果实总rna；步骤三、将rna反转录为cdna的反应体系为rna10.0μl，primescriptrtenzymemixi1.0μl，rtprimermix1.0μl，5×primescriptbuffer24.0μl，rnasefreedh2o4.0μl；反应条件为37℃(15min)→85℃(5s)→4℃；步骤四、采用primerpremier5.0软件设计引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，其中，ugt6引物序列为：fp：tcactgtggatggaactcgt，rp：cgttttgctatctcatgtctcg；内参基因用ubq5，序列为fp：ataaaagacccagcaccacattc，rp：cccttgccgactacaacatcc；步骤五、qrt-pcr反应体系(20μl)为sybrpremixextaqii(tlirnasehplus)(2×)10.0μl，pcrforwardprimer(10μm)0.8μl，pcrreverseprimer(10μm)0.8μl，roxreferencedyeofdyeii(50×)0.4μl，template2.0μl，dh2o6.0μl。反应条件为95℃(30s)，接着进行40个cycles[95℃(5s)，95℃(34s)]。2、罗汉果甜苷v含量的测定：采用高效液相色谱法测定罗汉果中罗汉果甜苷v的含量。实施例1～6、对比例1～3得到的罗汉果果实ugt6基因表达量和甜苷v含量的测量结果如下表1所示，其中实验数据均为上述每一个实施方案得到的20棵罗汉果果树上任选其中5棵中得到的罗汉果果实进行平行试验得到的。从表1中可以看出实施例1～6的罗汉果果实ugt6基因表达量和甜苷v含量均高于对比例1～3。因此可以推断将罗汉果组培苗置于含有茉莉酸甲酯的培养基中培养和栽培罗汉果过程中施加茉莉酸甲酯，可促进基因ugt6的高表达，从而促进罗汉果甜苷v的生物合成，提高罗汉果甜苷v含量。进一步第从对比例1和对比例2可以看出在罗汉果组培苗置于培养基中培养时喷洒杀菌液同时在培养基中加入保水剂和核桃壳粉，可以促进罗汉果甜苷v含量的提高；从对比例1和3对比可以得出在罗汉罗待栽培的土壤表面施加营养土可促进罗汉果的生长，进而使ugt6的高表达，从而促进罗汉果甜苷v含量的提高。表1不同实施例罗汉果ugt6基因表达量和甜苷v含量实施例甜苷v含量/(w/w％)ugt6基因表达量实施例12.1512.9实施例22.2414.2实施例32.3615.5实施例43.1122.9实施例53.2124.4实施例63.3225.6对比例10.733.8对比例21.326.3对比例31.377.1尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。当前第1页12