一种条件性过表达CD98转基因小鼠的模型制作方法与流程

本发明涉及转基因技术领域，尤其涉及一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法。

背景技术：

转基因小鼠是研究疾病发生发展机制、制定治疗策略的有力工具。

cd98是型跨膜糖蛋白，大小约85kda，由一条重链(cd98heavychain[cd98hc]，slc3a2)和一条轻链(lat1、lat2、xct、y+lat1、y+lat2或asc1)通过二硫键共价连接形成异源二聚体。cd98已经被证实在多种肿瘤中高表达，有望成为肿瘤诊断及判断预后的新的标志物，并且与肿瘤细胞的生物学行为密切相关，包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移等，可能成为肿瘤治疗新的分子靶点。

技术实现要素：

技术问题：本发明的目的在于提供一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，通过转基因技术建立cd98条件性过表达小鼠模型，以获得一种可稳定遗传、定位表达cd98蛋白的小鼠模型。该模型将可用于研究该蛋白在体功能分析、疾病发病机制探讨、药物新靶点发现及临床前药效评价等研究，具有十分重要的科学意义和临床价值。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，包括以下步骤：

s1、cag+loxp+stop+loxp+slc3a2转基因载体构建；

s2、转基因载体原核显微注射；

s3、品系基因鉴定，最终建立小鼠基因组中带有外源cd98基因的遗传性小鼠突变模型。

优选的，第一步的转基因载体构建方法是：将cag+loxp+stop+loxp+slc3a2表达序列插入小鼠rosa26位点。

优选的，第二步的转基因载体原核显微注射是：将外源线性转基因载体注射到c57bl/6小鼠受精卵细胞核内；用显微注射的方法将线性化的目的基因片段注入到小鼠受精卵的原核中，使其与小鼠基因组整合，随着细胞不断分裂，每个细胞将携带该片段；最终构建的cd98转基因小鼠能够在cre重组酶的作用下过表达cd98蛋白。

优选的，第三步的品系基因鉴定是：将经显微注射后成活的受精卵植入假孕鼠的输卵管的壶腹部，产生f0代转基因小鼠，该小鼠基因组中整合有外源性表达序列；出生的首代cd98转基因阳性的小鼠即为首建鼠；每只首建鼠都将被视为一个独立的品系进行繁育，对每只首建鼠品系都进行剪尾基因鉴定。

本发明的有益效果是：本发明提供可条件性诱导过表达cd98蛋白的模型小鼠，通过不同部位表达cre的工具鼠交配，诱导cd98蛋白在不同组织器官表达。该模型的建立，有助于研究不同器官肿瘤发生发展机制、发现药物新靶点及评价临床前药效等。

附图说明

图1为本发明提出的一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法的cd98转基因小鼠载体构建策略图。

图中：cag是启动子，slc3a2是待表达的序列，后跟3'utr和polya序列，polya为终止信号。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

本实施例中，参照图1，一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，包括以下步骤：

s1、cag+loxp+stop+loxp+slc3a2转基因载体构建。其中，将cag+loxp+stop+loxp+slc3a2表达序列插入小鼠rosa26位点，如附图1所示。rosa26基因不具有任何功能，序列插入rosa26位点表达稳定，且不会影响小鼠表型。cag是能够全身表达的强启动子，loxp序列能被cre重组酶特异性识别。

s2、转基因载体原核显微注射。其中，将外源线性转基因载体注射到c57bl/6小鼠受精卵细胞核内；用显微注射的方法将线性化的目的基因片段注入到小鼠受精卵的原核中，使其与小鼠基因组整合，随着细胞不断分裂，每个细胞将携带该片段；最终构建的cd98转基因小鼠能够在cre重组酶的作用下过表达cd98蛋白。

s3、品系基因鉴定，最终建立小鼠基因组中带有外源cd98基因的遗传性小鼠突变模型。其中，将经显微注射后成活的受精卵植入假孕鼠的输卵管的壶腹部，产生f0代转基因小鼠，该小鼠基因组中整合有外源性表达序列；出生的首代cd98转基因阳性的小鼠即为首建鼠；每只首建鼠都将被视为一个独立的品系进行繁育，对每只首建鼠品系都进行剪尾基因鉴定。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

s1、cag+loxp+stop+loxp+slc3a2转基因载体构建；

s2、转基因载体原核显微注射；

s3、品系基因鉴定，最终建立小鼠基因组中带有外源cd98基因的遗传性小鼠突变模型。

2.根据权利要求1所述的一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，其特征在于，第一步的转基因载体构建方法是：将cag+loxp+stop+loxp+slc3a2表达序列插入小鼠rosa26位点。

3.根据权利要求1所述的一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，其特征在于，第二步的转基因载体原核显微注射是：将外源线性转基因载体注射到c57bl/6小鼠受精卵细胞核内；用显微注射的方法将线性化的目的基因片段注入到小鼠受精卵的原核中，使其与小鼠基因组整合，随着细胞不断分裂，每个细胞将携带该片段；最终构建的cd98转基因小鼠能够在cre重组酶的作用下过表达cd98蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种条件性过表达cd98转基因小鼠的模型制作方法，其特征在于，第三步的品系基因鉴定是：将经显微注射后成活的受精卵植入假孕鼠的输卵管的壶腹部，产生f0代转基因小鼠，该小鼠基因组中整合有外源性表达序列；出生的首代cd98转基因阳性的小鼠即为首建鼠；每只首建鼠都将被视为一个独立的品系进行繁育，对每只首建鼠品系都进行剪尾基因鉴定。

技术总结
本发明涉及转基因技术领域,尤其涉及一种条件性过表达CD98转基因小鼠的模型制作方法,包括以下步骤：S1、CAG+LoxP+Stop+LoxP+Slc3a2转基因载体构建；S2、转基因载体原核显微注射；S3、品系基因鉴定，最终建立小鼠基因组中带有外源CD98基因的遗传性小鼠突变模型，本发明提供可条件性诱导过表达CD98蛋白的模型小鼠，通过不同部位表达Cre的工具鼠交配，诱导CD98蛋白在不同组织器官表达。该模型的建立，有助于研究不同器官肿瘤发生发展机制、发现药物新靶点及评价临床前药效等。

技术研发人员：夏蒲
受保护的技术使用者：夏蒲
技术研发日：2019.09.24
技术公布日：2019.11.26