1.一种转基因鸡,其中所述转基因鸡包含基因组,所述基因组包含修饰的内源性免疫球蛋白重链(igh)基因座,所述基因座:
(a)缺少整个连续内源性鸡v-d-j区;和
(b)以可操作的连接包含:
(i)免疫球蛋白重链基因启动子;
(ii)人种系vh区段,其包含可变结构域的编码序列,所述可变结构域包含fr1、cdr1、fr2、cdr2和fr3序列;
(iii)人d簇;
(iv)单个人j区段;
(v)多个编码恒定区的序列;和在(b)(ii)的人种系vh区段的上游:
(vi)结构fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3的多个假基因,其各自包含:
与(b)(ii)的功能性人vh区段基本上相同的fr1、fr2和fr3序列;和
在假基因之间不同的cdr1和cdr2序列,
其中:
修饰的igh基因座在鸡中经历v(d)j重组;
v(d)j重组后,多个人种系vh假基因通过基因转换将核苷酸序列施予给人种系vh区段;和
所述鸡产生包含多样化的免疫球蛋白重链的抗体。
2.根据权利要求1所述的转基因鸡,其中(b)(vi)的cdr1和cdr2序列编码与(b)(ii)的功能性人vh区段属于同一家族的不同人vh区段的cdr1和cdr2。
3.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中(a)的整个连续内源性鸡v-d-j区的长度在10-12kb的范围内。
4.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中(b)(i)的启动子是鸡免疫球蛋白重链基因启动子。
5.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中(b)(ii)的人种系vh区段和(vi)的cdr1和cdr2序列来自vh3家族、vh1家族或vh4家族。
6.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中在d簇中,半胱氨酸的任何密码子已被突变以编码另一种氨基酸。
7.根据权利要求6所述的转基因鸡,其中在d簇中,半胱氨酸的任何密码子已被突变以编码酪氨酸或色氨酸。
8.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中d簇中的间插序列来自鸡。
9.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中(b)(v)的多个假基因包含至少10个假基因。
10.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中(b)(v)的假基因与(b)(ii)的人种系vh区段处于相反方向。
11.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中编码(b)(v)的恒定区的多个序列对于所述鸡是内源性的。
12.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中所述修饰的免疫球蛋白重链(igh)基因座的转录物包含将编码j的序列的一个拷贝的3'端与(b)(v)的恒定区编码序列的一个拷贝的5'端连接的内含子。
13.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中所述鸡对于修饰的igh基因座是纯合的。
14.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中所述鸡对于修饰的igh基因座是杂合的,并且同源染色体上的igh基因座被敲除。
15.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中所述鸡对于修饰的igh基因座是杂合的,并且同源染色体上的igh基因座是野生型的。
16.根据权利要求14所述的转基因鸡,其中所述鸡对于修饰的igh基因座是杂合的,并且同源染色体上的igh基因座缺少其整个连续内源性鸡v-d-j区。
17.根据权利要求14所述的转基因鸡,其中所述鸡对于修饰的igh基因座是杂合的,并且同源染色体上的igh基因座缺少j区。
18.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡,其中所述鸡产生的抗体在重链cdr1、cdr2和cdr3区中是多样化的。
19.一种转基因鸡,其在其同源染色体中的一个或两个中缺少其整个连续内源性鸡v-d-j区。
20.一种来自任何前述权利要求的转基因鸡的b细胞。
21.一种方法,包括:
(a)用抗原免疫任何前述权利要求的转基因鸡;和
(b)从所述鸡中获得与所述抗原特异性结合的抗体。
22.根据权利要求21所述的方法,其中所述抗体是多克隆的。
23.根据权利要求21所述的方法,其中所述抗体是单克隆的。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的方法,还包括:
(c)使用所述转基因鸡的b细胞制作杂交瘤;和
(d)筛选所述杂交瘤以鉴定产生特异性结合抗原的抗体的杂交瘤。
25.根据权利要求21至24中任一项所述的方法,其进一步包括使用pcr从转基因动物的b细胞扩增编码重链和轻链可变区的核酸,并使用所述扩增的核酸表达重组抗体。
26.一种由根据权利要求1-19中任一项所述的转基因鸡产生的抗体。
27.一种方法,包括:
(a)从鸡的免疫球蛋白重链(igh)基因座中去除整个连续内源性鸡v-d-j区;和
(b)将构建体插入基因座,所述构建体包含:
(i)免疫球蛋白重链基因启动子;
(ii)人种系vh区段,其包含可变结构域的编码序列,所述可变结构域包含fr1、cdr1、fr2、cdr2和fr3序列;
(iii)人d簇;
(iv)人j区段;和
(vi)结构fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3的多个假基因,其各自包含:
与(b)(ii)的功能性人vh区段基本上相同的fr1、fr2和fr3序列;和
在假基因之间不同的cdr1和cdr2编码序列,其中步骤(a)和(b)以任何顺序进行。