专利名称:常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法
技术领域：
本发明涉及一种贝类遗传育种技术，具体的说是一种常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法。
背景技术：
常见滩涂贝类大多为分布较广的养殖品种，具有养殖周期短、投资少、收益大的特点。目前，滩涂贝类在养殖中存在种质资源基础状况不清、品质下降、抗逆性差、个体小型化、单位产量降低等不良现象。而且养殖对象均为野生型，几乎没有人工培育的高产、抗逆优良品种。对滩涂贝类进行遗传改良，培育出生长速度快，抗逆性强的新品种是解决这些问题的重要途径(闫喜武，2005)。
选择育种是新品种培育的有效方法，杂交则是培育新品种的重要方法，已经在动植物的育种中取得广泛的成功。聚合杂交是指通过一系列杂交将若干个亲本品种的优良基因聚合在一起，分为最大重组原理的组合杂交和超亲重组原理的聚合杂交。目前，聚合杂交主要应用在植物育种上。
申请公开号为CN101103708的中国专利公开了虾夷扇贝三元杂交的育种方法，此发明采用的3个地理群体的虾夷扇贝进行杂交，得到了三元杂交个体。然而，采用该方法进行贝类育种的子代具有杂合度较低，使用的杂交周期较长的缺陷。
发明内容
本发明旨在通过不同地理群体滩涂贝类最大重组原理的聚合杂交，在较短的杂交周期内得到具有高度杂合度的杂交个体，淘汰致死基因，使得优良基因得到表达。最终达到解决当前滩涂贝类种质抗逆性差，生长速度慢等问题。
本发明的技术方案是采集> 4个不同地理群体中的滩涂贝类亲本；对不同地理群体贝类亲本进行生态促熟开展两两地理群体间的二元正反群体杂交；三段法养成二元正反杂交组合的子一代；二元杂交子一代的聚合杂交，得到聚合杂交子一代；在此基础上， 重复以上步骤，直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止。
本发明的工艺过程包括以下步骤
第一步、采集> 4个不同地理群体中的贝类作为亲本；
第二步、对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟；
第三步、两两群体的二元正反杂交待亲本成熟后，对亲本进行性别鉴定，鉴别后； 通过阴干、流水刺激，亲本可以同步产卵、排精；然后按照两两群体组合进行杂交，得到若干个正反交组合的子一代；
第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法进行正反交子一代的养成， 直至杂交子一代性腺同步成熟；
第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三、四步，开展二元杂交子一代的聚合杂交，得到聚合杂交子一代；若贝类的地理群体数量>4个，需要重复以上步骤，进行二次或多次聚合杂交，直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止。
所述的对不同地理群贝类亲本进行生态促熟的步骤可以采用以下方法将采集的亲本放置于生态虾池或自然海区中，采用底播养殖的方法进行生态促熟，直至不同地理群贝类亲本性腺同步成熟。
所述亲本鉴定按以下方式进行，可以得到更高的鉴别率所述亲本鉴定的步骤为采用直径为0. 6mm的电钻，根据要鉴定贝的种类，确定贝类亲本的性腺位置，在贝类亲本的壳上钻孔直至深入至性腺部位，将微型注射器消毒，用消毒过的微型注射器取出精或卵，在显微镜下采用水滴法，加入少许海水，进行性别鉴定；卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形；精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。
所述不同地理群体贝类以下标准采集时，育种效果更佳(1)2龄健康无损的个体作为亲本；( 要求其亲本有足够大的地理差异和遗传差异。
所述的三段法养成二元正反杂交子一代具体为将二元正反杂交子一代采集的亲本放置于生态虾池或自然海区中，采用底播养殖的方法进行生态促熟。
三段法，即在室内进行贝类苗种繁育，繁育得到的稚贝在虾池内(海上)进行中间育成，中间育成得到的幼贝在虾池(海上)进行养成。
本发明对亲本采用生态促熟法，克服了不同地理群体间的地理隔离、性成熟和繁殖的生理差异，促使性腺同步发育精卵同步排放。与现有养殖的滩涂贝类品种相比，聚合了 >4个地理群体的优良基因，其杂合度大大提高，并最大程度上缩短了贝类的杂交周期。使得聚合杂交个体表现出生长快、抗逆性强的特点。本方法采用的是群体杂交方式，避免了单体杂交基因型相对单一的弊端，丰富了杂交个体的基因组成。由于是多次正反杂交，所以能够更加充分的利用亲本效应，从中得到的最有效的杂交组合；且杂交个体的生长、存活远大于亲本，表现出超亲本效应，由于聚合杂交个体累加了各地理群体贝类的优良基因，其生长速度提高30-60%，存活率提高80-120%。这为贝类杂交新品种的开发奠定了坚实的基础。
具体实施方式
下面以菲律宾蛤仔为实施例，进一步说明本发明，但不构成对本发明的限制。
实施例1
第一步、采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本于2005年，选择2龄健康无损的个体作为亲本，其亲本分别来自于中国南方莆田、中国北方大连、韩国釜山、日本东京。
第二步、不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟将采集的亲本放置于庄河海洋村的虾池中进行生态促熟，经过6-12个月的底播养殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中国南北方、韩日群体的二元正反杂交采用直径为0. 6mm的电钻进行亲本性别鉴定，鉴别后；通过阴干8h、流水Ih的刺激，亲本可以同步产卵排精；然后按照中国南方早X中国北方中国北方早X中国南方韩国早X日本d，日本早X韩国3开展群体间的正反杂交，每个杂交组合用亲本200个，得到中国南北方正反交子一代和韩日正反交子一代。
第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法在生态虾池中进行北方正反交子一代和韩日正反交子一代的养成，养成周期> 1年。于第2007年的秋季，杂交子一代性腺同步成熟。[0025]第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三步，开展中国南北方早X韩日d，中国南北方早X日韩d，中国北南方早X韩日d，中国北南方早X日韩d群体间的杂交，得到中国南北方日韩、中国南北方日韩、中国北南方韩日、中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾蛤仔。
通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔，其生长速度提高了 40-60%、存活率提高了 90-120% ο
实施例2
第一步、采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本于2005年，选择2龄健康无损的个体作为亲本，其亲本分别来自于中国南方莆田、中国北方大连、韩国釜山、日本东京。
第二步、不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟将采集的亲本放置于庄河海洋村的滩涂中进行生态促熟，经过6-12个月的底播养殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中国南北方、韩日群体的二元正反杂交采用直径为0. 6mm的电钻进行亲本性别鉴定，鉴别后；通过阴干8h、流水Ih的刺激，亲本可以同步产卵排精；然后按照中国南方早X中国北方3，中国北方早X中国南方韩国早X日本d，日本早X韩国3开展群体间的正反杂交，每个杂交组合用亲本240个，得到中国南北方正反交子一代和韩日正反交子一代。
第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法在生态虾池中进行北方正反交子一代和韩日正反交子一代的养成，养成周期> 1年。于第2007年的秋季，杂交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三步，开展中国南北方早X韩日d，中国南北方早X日韩d，中国北南方早X韩日d，中国北南方早X日韩3群体间的杂交，得到中国南北方日韩、中国南北方日韩、中国北南方韩日、中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾蛤仔。
通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔，其生长速度提高了 30-40%、存活率提高了 80-90%。
实施例3
第一步、采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本于2005年，选择2龄健康无损的个体作为亲本，其亲本分别来自于中国南方莆田、中国北方大连、韩国釜山、日本东京。
第二步、不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟将采集的亲本放置于庄河海洋村的虾池中进行生态促熟，经过6-12个月的底播养殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中国南北方、韩日群体的二元正反杂交通过阴干他、流水Ih的刺激，亲本可以同步产卵排精；在产卵排精的过程中，可以分辨出雌雄，将雌雄个体分别抓取出来； 然后按照中国南方早X中国北方d，中国北方早X中国南方韩国早X日本d，日本早X 韩国3开展群体间的正反杂交，每个杂交组合用亲本60个，得到中国南北方正反交子一代和韩日正反交子一代。
第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法在生态虾池中进行北方正反交子一代和韩日正反交子一代的养成，养成周期> 1年。于第2007年的秋季，杂交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三步，开展中国南北方早X韩日召，中国南北方早X日韩^中国北南方早X韩日^中国北南方早X日韩召群体间的杂交，得到中国南北方日韩、中国南北方日韩、中国北南方韩日、中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾蛤仔。
通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔，其生长速度提高了 30-50%、存活率提高了 80-100%。
实施例4
第一步、采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本于2005年，选择2龄健康无损的个体作为亲本，其亲本分别来自于中国南方莆田、中国北方大连、韩国釜山、日本东京。
第二步、不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟将采集的亲本放置于庄河海洋村的虾池中进行生态促熟，经过6-12个月的底播养殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中国南北方、韩日群体的二元正反杂交采用直径为0. 6mm的电钻进行亲本性别鉴定，鉴别后；通过阴干8h、流水Ih的刺激，亲本可以同步产卵排精；然后按照中国南方早X中国北方3，中国北方早X中国南方韩国早X日本日本早X韩国S开展群体间的正反杂交，每个杂交组合用亲本300个，得到中国南北方正反交子一代和韩日正反交子一代。
第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法在庄河海洋村贝类养殖场的滩涂中进行北方正反交子一代和韩日正反交子一代的养成，养成周期> 1年。于第2007 年的秋季，杂交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三步，开展中国南北方早X韩日d，中
国南北方早X日韩3，中国北南方早X韩日d，中国北南方早X日韩d群体间的杂交，得
到中国南北方日韩、中国南北方日韩、中国北南方韩日、中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾蛤仔。
通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔，其生长速度提高了 40-50%、存活率提高了 80-110%。
权利要求
1.一种常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法，包括以下步骤 第一步、采集> 4个不同地理群体中的贝类作为亲本； 第二步、对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟；第三步、两两群体的二元正反杂交待亲本成熟后，对亲本进行性别鉴定，鉴定后；通过阴干、流水刺激，亲本可以同步产卵、排精；然后按照两两群体组合进行杂交，得到若干个正反交组合的子一代；第四步、三段法养成二元正反杂交子一代按照三段法进行正反交子一代的养成，直至杂交子一代性腺同步成熟；第五步、二元杂交子一代的聚合杂交同第三、四步，开展二元杂交子一代的聚合杂交， 得到聚合杂交子一代；若贝类的地理群体数量> 4个，需要重复以上步骤，进行二次或多次聚合杂交，直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止；所述的对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟的步骤具体为将采集的亲本放置于生态虾池或自然海区中，采用底播养殖的方法进行生态促熟，直至不同地理群体贝类亲本性腺同步成熟；所述的三段法养成二元正反杂交子一代具体为将二元正反杂交子一代采集的亲本放置于生态虾池或自然海区中，采用底播养殖的方法进行生态促熟；三段法，即在室内进行贝类苗种繁育，繁育得到的稚贝在虾池内或海上进行中间育成， 中间育成得到的幼贝在虾池或海上进行养成。
2.如权利要求
1所述的常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法，其特征在于所述亲本性别鉴定的步骤为采用直径为0. 6mm的电钻，根据要鉴定贝的种类，确定贝类亲本的性腺位置，在贝类亲本的壳上钻孔直至深入至性腺部位，将微型注射器消毒，用消毒过的微型注射器取出精或卵，在显微镜下采用水滴法，加入少许海水，进行性别鉴定；卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形；精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。
3.如权利要求
1所述的常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法，其特征在于所述采集不同地理群体贝类作为亲本的标准为(1)、2龄健康无损的个体作为亲本；(2)、要求其亲本有足够大的地理差异和遗传差异。
专利摘要
常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法，采集≥4个不同地理群体中的滩涂贝类亲本；对不同地理群体贝类亲本进行生态促熟开展两两地理群体间的二元正反群体杂交；三段法养成二元正反杂交组合的子一代；继而进行二元杂交子一代的聚合杂交，得到聚合杂交子一代；在此基础上，重复以上步骤，直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止。本发明克服了不同地理群体间的地理隔离、性成熟和繁殖的生理差异。与现有养殖的滩涂贝类品种相比，聚合了≥4个地理群体的优良基因，其杂合度大大提高，使得聚合杂交个体表现出生长快、抗逆性强的特点。
文档编号A01K61/00GKCN101361469 B发布类型授权 专利申请号CN 200810013427
公开日2012年5月23日 申请日期2008年9月25日
发明者张国范, 张跃环, 杨凤, 王 琦, 金晶宇, 闫喜武, 霍忠明 申请人:大连水产学院导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (1), 非专利引用 (3),