充分溶出，先武火再文 火利于有效成分充分煎出。
[0024] 根据上述的制备方法制得的能够促进白芨种子萌发的培养基。
[0025] 与现有的技术相比，本能够促进白芨种子萌发和幼苗生长的培养基及其配方和制 备方法的优点在于：
[0026] 第一，MS或1/2MS作为基础培养基，NAA促进种子的萌发，香蕉泥和活性炭利于白 芨壮苗生根。紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活、紫花地丁、淡竹叶、山豆根、天冬和芦根属于中药 组份。其中，紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活联合使用能够直接促进种子萌发和幼苗生长。
[0027] 第二，紫花地丁、淡竹叶、山豆根、天冬和芦根能够促进白芨共生菌的生长，因为白 芨共生菌对白芨种子萌发和幼苗生长均有促进作用，即能够间接促进白芨种子萌发和幼苗 生长，直接促进和间接促进相结合，利于提高白芨幼苗快速繁殖的效率。
[0028] 第三，苍术、艾叶、白芷、苦参、蛇床子、白鲜皮、百部、黄柏和洋葱属于中药组份，其 联合使用能有效抑制杂菌生长在培养基上生长增殖，避免培养基污染。
【具体实施方式】
[0029] 实施例1
[0030] 本能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配方包括下述组份：MS或1/2MS、0. 1? 2.Omg/L的NAA、0. 8?4.Og/L的活性炭、40?60g/L的马铃薯泥、40?60g/L的香蕉泥、 1?7g/L的紫苏梗、2?5g/L的威灵仙、3?10g/L的漏芦、2?9g/L的羌活、3?6g/L的 紫花地丁、2?5g/L的淡竹叶、1?4g/L的山豆根、2?5g/L的天冬和4?7g/L的芦根。
[0031] MS或1/2MS作为基础培养基，NAA促进种子的萌发，香蕉泥和活性炭利于白芨壮 苗生根。紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活、紫花地丁、淡竹叶、山豆根、天冬和芦根属于中药组份。 其中，紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活、联合使用能够直接促进种子萌发和幼苗生长；紫花地丁、 淡竹叶、山豆根、天冬和芦根能够促进白芨共生菌的生长，因为白芨共生菌对白芨种子萌发 和幼苗生长均有促进作用，即能够间接促进白芨种子萌发和幼苗生长，直接促进和间接促 进相结合，利于提高白芨幼苗快速繁殖的效率。作为一种改进，本配方还包括紫萁小菇，将 紫萁小菇提取液或无菌培养物的提取液加入到培养基中能直接促进白芨共生菌的生长。
[0032] 作为一种改进，本制备配方还包括1?5g/L的苍术、1?3g/L的艾叶、2?3g/L的 白]E、2?5g/L的苦参、3?4g/L的蛇床子、2?4g/L的白鲜皮、3?5g/L的百部、2?4g/ L的黄柏和3?5g/L的洋葱。苍术、艾叶、白芷、苦参、蛇床子、白鲜皮、百部、黄柏和洋葱属 于中药组份，其联合使用能有效抑制杂菌在培养基上生长增殖，有效降低组培生产中的感 染率。
[0033] 本能够促进白芨种子萌发的培养基的制备方法，其特征在于，本制备方法包括下 述步骤：
[0034] A.浸出液的制备：取制备配方中的各中药组份，混合打磨成粉末，放入容器内且 加蒸馏水300?400ml，放冰箱内冷藏浸泡过夜，第二天煎煮15?45min，补足水分，让其自 然冷却沉淀后吸取上清液，再用滤纸过滤，所得的液体即为浸出液；
[0035] B.制备琼脂液和备用液：称取6?15g的琼脂，加蒸馏水300?400ml，加热并不 断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热，得琼脂液；称取0. 1?2.Omg的NAA、0. 8? 4.Og的活性炭、40?60g的马铃薯泥和40?60g的香蕉泥，加适量水，加热并搅拌溶解后 得备用液；
[0036] C.组份混合：称取70ml?IOOml的MS或1/2MS培养基母液，在MS或1/2MS培 养基母液中加入浸出液和备用液，再加入适量B步骤中的琼脂液，充分搅拌，加热水定容到 IOOOml；
[0037] D.pH值调节：用盐酸或氢氧化钠将pH值调至5. 8?6.0,得培养基。
[0038] 作为一种改进，在步骤C中，在MS或1/2MS培养基母液中先加入浸出液，搅拌均 匀，再加入备用液，搅拌均匀。作为一种改进，在步骤C中，将pH值调至5. 8,因为pH值为 5. 8时最利于白芨种子萌发和幼苗生长。在步骤A中，放冰箱内冷藏浸泡过夜时冰箱内的温 度为5?15°C，所述的浸泡过夜后的浸泡液先用武火煮沸lOmin，再文火慢煎30min，放入冰 箱过夜利于中药组份中的有效成分充分溶出，先武火再文火利于有效成分充分煎出。
[0039] 对照实验1 :采用本实施例的制备配方制得的能够促进白芨种子萌发的培养基作 为实验组培养基；另采用MS作为对照组培养基。实验过程如下：
[0040] 将其蒴果用流水洗净后，再用75 %酒精表面消毒lmin，然后在10 %的NaClO溶 液中消毒lOmin，无菌水冲洗4?6次。在无菌条件下，纵向剖开蒴果，用镊子夹取蒴果 外壳，将粉末状的种子分别轻轻抖落到实验组培养基和对照组培养基上。将培养温度设定 为24?26°C，光照强度2000?25001x，光照12?18h/d。种子萌发期间暗培养，15天以 后观察，统计种子的发芽率，于35天时分别切取实验组和对照组的白芨根段，做成切片，显 微镜观察共生菌的生长情况，于70天后观察，统计幼苗生长情况，同时观察培养基杂菌污 染情况。实验结果如表1所示。
[0041] 表1白芨种子萌发和幼苗生长情况
[0042]
【主权项】
1. 一种能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配方，其特征在于，本制备配方包括下 述组份：MS或1/2MS、0. 1?2. Omg/L的ΝΑΑ、0· 8?4. Og/L的活性炭、40?60g/L的马铃薯 泥、40?60g/L的香蕉泥、1?7g/L的紫苏梗、2?5g/L的威灵仙、3?10g/L的漏芦、2? 9g/L的羌活、3?6g/L的紫花地丁、2?5g/L的淡竹叶、1?4g/L的山豆根、2?5g/L的天 冬和4?7g/L的芦根。
2. 根据权利要求1所述的能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配方，其特征在于， 本制备配方的优化组份为：1/2MS、1. Omg/L的NAA、2. Og/L的活性炭、50g/L的马铃薯泥、 50g/L的香蕉泥、5g/L的紫苏梗、3g/L的威灵仙、6g/L的漏芦、5g/L的羌活、4g/L的紫花地 丁、3g/L的淡竹叶、2g/L的山豆根、3g/L的天冬和6g/L的芦根。
3. 根据权利要求2所述的能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配方，其特征在于， 本制备配方还包括1?5g/L的苍术、1?3g/L的艾叶、2?3g/L的白芷、2?5g/L的苦参、 3?4g/L的蛇床子、2?4g/L的白鲜皮、3?5g/L的百部、2?4g/L的黄柏和3?5g/L的 洋葱。
4. 根据权利要求3所述的能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配方，其特征在于， 优化组份为：2g/L的苍术、lg/L的艾叶、3g/L的白芷、4g/L的苦参、3g/L的蛇床子、2g/L的 白鲜皮、4g/L的百部、3g/L的黄柏和4g/L的洋葱。
5. 基于权利要求1-4中的任意一项所述的制备配方制备能够促进白芨种子萌发的培 养基的方法，其特征在于，本制备方法包括下述步骤： A. 浸出液的制备：取制备配方中的各中药组份，混合打磨成粉末，放入容器内且加蒸 馏水300?400ml，放冰箱内冷藏浸泡过夜，第二天煎煮15?45min，补足水分，让其自然冷 却沉淀后吸取上清液，再用滤纸过滤，所得的液体即为浸出液； B. 制备琼脂液和备用液：称取6?15g的琼脂，加蒸馏水300?400ml，加热并不断搅 拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热，得琼脂液；称取0. 1?2. Omg的ΝΑΑ、0. 8?4. Og 的活性炭、40?60g的马铃薯泥和40?60g的香蕉泥，加适量水，加热并搅拌溶解后得备用 液； C. 组份混合：称取70ml?IOOrnl的MS或1/2MS培养基母液，在MS或1/2MS培养基母液 中加入浸出液和备用液，再加入适量B步骤中的琼脂液，充分搅拌，加热水定容到1000ml ; D. pH值调节：用盐酸或氢氧化钠将pH值调至5. 8?6. 0,得培养基。
6. 根据权利要求5所述的制备能够促进白芨种子萌发的培养基的方法，其特征在于， 在步骤C中，在MS或1/2MS培养基母液中先加入浸出液，搅拌均匀，再加入备用液，搅拌均 匀。
7. 根据权利要求6所述的制备能够促进白芨种子萌发的培养基的方法，其特征在于， 在步骤C中，所述的pH值调至5. 8。
8. 根据权利要求7所述的制备能够促进白芨种子萌发的培养基的方法，其特征在于， 在步骤A中，放冰箱内冷藏浸泡过夜时冰箱内的温度为5?15°C，所述的浸泡过夜后的浸泡 液先用武火煮沸l〇min，再文火慢煎30min。
9. 一种根据权利要求5-8中任意一项所述的制备方法制得的能够促进白芨种子萌发 的培养基。
【专利摘要】本发明属于植物组织培养技术领域，尤其是涉及一种能够促进白芨种子萌发和幼苗生长的培养基及其配方和制备方法。本能够促进白芨种子萌发的培养基的制备配包括下述组份：MS或1/2MS、0.1～2.0mg/L的NAA、0.8～4.0g/L的活性炭、40～60g/L的马铃薯泥、40～60g/L的香蕉泥、1～7g/L的紫苏梗、2～5g/L的威灵仙、3～10g/L的漏芦、2～9g/L的羌活、3～6g/L的紫花地丁、2～5g/L的淡竹叶、1～4g/L的山豆根、2～5g/L的天冬和4～7g/L的芦根。优点在于：MS或1/2MS作为基础培养基，NAA促进种子的萌发，香蕉泥和活性炭利于壮苗生根，紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活联合使用能够直接促进种子萌发和幼苗生长，紫花地丁、淡竹叶、山豆根、天冬和芦根能够促进白芨共生菌生长，间接促进种子萌发和幼苗生长。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104604680
【申请号】CN201510026364
【发明人】杜漾青, 郭铭心, 易浩君
【申请人】杭州雷威农业开发有限公司
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月19日