2000Lux，培养30天，形成2cm长的具 有3个茎节的芽条，将其切成带茎节的切段，每个芽分割成2段；每30天如此继代一次，扩 繁试管苗； ⑤ 生根培养：待步骤④扩繁的试管苗取出，转入生根培养，生根培养基成分为： MS+NAA 0· 5mg/L+6-BA4mg/L+2. 0% 氨基寡糖素 +18% 糖蜜 +200mg/L 土豆；光照强度为 3000Lux，培养温度25 ±2°C，培养至25天，根长至2cm，苗长高3cm时出瓶； ⑥ 炼苗：选择健壮、株茎粗壮的试管苗出瓶，清水清洗根部，移栽在泥炭土：椰糠配比 为1:3的营养基质中，保持空气湿度85%，光照120001UX ; ⑦移栽：炼苗15天后移到露天培养。
[0015] 实施例二： 本发明一种铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：它包括以下步骤： ① 外植体的建立：选择3年龄，生长健壮、株茎粗大、无病虫害的优良植株，从离地面 8-12cm处截断，取茎部上段，再将茎段切成长度为4cm，带有1-2个腋芽的小茎段作为外植 体材料；为减少材料污染源，采取茎段时，应选择连续三天以上晴好天气后进行；将采回的 莖段去除大部分叶片后，用自来水冲洗l〇min，0. 5%洗衣液溶液浸泡20min，再用自来水冲 洗干净； ② 外植体消毒：步骤①得到的外植体用75 %的酒精浸泡30S，无菌水冲洗5次，沥干水， 然后置于0. 1 %的升汞溶液中消毒15min，无菌水冲洗5次； ③ 初代培养：将步骤②处理过的茎段在无菌条件下接种到初代培养基，初代培养基成 分为：MS+ NAAL 5mg/L+6-BA2mg/L+5%糖蜜，培养基ρΗ5· 7 ;光照强度1500Lux，培养温度 25 ±2 °C，培养时间45天； ④ 继代培养：初代培养至腋芽萌发成丛芽，取丛芽进行继代培养，继代培养基成分 为：MS+6-BA6mg/L+NAA0. 5mg/L+0. 05% 氨基寡糖素 +8% 糖蜜 + 150mg/L 土豆；培养温度 25±2°C，光照时间15h/d，培养基pH 5. 7 ;光照强度2000Lux，培养30天，形成2cm长的具 有3个茎节的芽条，将其切成带茎节的切段，每个芽分割成2段；每30天如此继代一次，扩 繁试管苗； ⑤ 生根培养：待步骤④扩繁的试管苗取出，转入生根培养，生根培养基成分为： MS+NAA 0· 5mg/L+6-BA4mg/L+2. 0% 氨基寡糖素 +18% 糖蜜 +200mg/L 土豆；光照强度为 3000Lux，培养温度25 ±2°C，培养至25天，根长至2cm，苗长高3cm时出瓶； ⑥ 炼苗：选择健壮、株茎粗壮的试管苗出瓶，清水清洗根部，移栽在泥炭土：椰糠配比 为1:3的营养基质中，保持空气湿度90%，光照120001UX ; ⑦ 移栽：炼苗15天后移到露天培养。
[0016] 实施例三： 本发明一种铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：它包括以下步骤： ① 外植体的建立：选择3年龄，生长健壮、株茎粗大、无病虫害的优良植株，从离地面 8-12cm处截断，取茎部上段，再将茎段切成长度为5cm，带有1-2个腋芽的小茎段作为外植 体材料；为减少材料污染源，采取茎段时，应选择连续三天以上晴好天气后进行；将采回的 莖段去除大部分叶片后，用自来水冲洗lOmin，0. 5%洗衣液溶液浸泡20min，再用自来水冲 洗干净； ② 外植体消毒：步骤①得到的外植体用75 %的酒精浸泡30S，无菌水冲洗5次，沥干水， 然后置于0. 1 %的升汞溶液中消毒15min，无菌水冲洗5次； ③ 初代培养：将步骤②处理过的茎段在无菌条件下接种到初代培养基，初代培养基成 分为：MS+ NAAL 5mg/L+6-BA2mg/L+5%糖蜜，培养基ρΗ5· 6 ;光照强度1500Lux，培养温度 25 ±2 °C，培养时间45天； ④ 继代培养：初代培养至腋芽萌发成丛芽，取丛芽进行继代培养，继代培养基成分 为：MS+6-BA6mg/L+NAA0. 5mg/L+0. 05% 氨基寡糖素 +8% 糖蜜 + 150mg/L 土豆；培养温度 25±2°C，光照时间15h/d，培养基pH 5. 8 ;光照强度2000Lux，培养30天，形成2cm长的具 有3个茎节的芽条，将其切成带茎节的切段，每个芽分割成2段；每30天如此继代一次，扩 繁试管苗； ⑤ 生根培养：待步骤④扩繁的试管苗取出，转入生根培养，生根培养基成分为： MS+NAA 0· 5mg/L+6-BA4mg/L+2. 0% 氨基寡糖素 +18% 糖蜜 +200mg/L 土豆；光照强度为 3000Lux，培养温度25 ±2°C，培养至25天，根长至2cm，苗长高3cm时出瓶； ⑥ 炼苗：选择健壮、株茎粗壮的试管苗出瓶，清水清洗根部，移栽在泥炭土：椰糠配比 为1:3的营养基质中，保持空气湿度95%，光照120001UX ; ⑦ 移栽：炼苗15天后移到露天培养。
[0017] 在铁皮石斛生长过程中防治病虫害及使用药剂如下：对黄斑病采用75%百菌清可 湿性粉剂1000倍液+70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液进行喷洒；对炭疽病采用80%多 菌灵可湿性粉剂600倍液进行喷洒，每周一次；对叶枯病采用75%百菌清可湿性粉剂1000 倍液进行喷洒，每周一次，连续三次；对花叶病及时清除病株、改善环境卫生、科学消毒用 具，以防止蔓延，常用消毒液有2%福尔马林和2%氢氧化钠水溶液；对石斛菲盾蚊采用40% 乐果乳油1000倍液进行喷杀；对蜗牛用麸皮拌敌百虫，撒在蜗牛经常活动的地方进行毒饵 诱杀；对地老虎可在早春或初秋使用辛硫磷2000倍液灌施预防。节省工时，提高工效，保证 了铁皮石斛的丰产。
[0018] 以下为本发明方法得到的铁皮石斛组培苗繁育结果：
可以看出，本发明铁皮石斛组培快繁方法，繁殖系数高，生根率达99%以上，成活率在 98%以上，组培苗移栽后能迅速适应露天环境，生长迅速，抗外界不良环境能力强，创造了较 大的经济效益和社会效益。
【主权项】
1. 一种铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：它包括以下步骤： ① 外植体的建立：选择3年龄，生长健壮、株茎粗大、无病虫害的优良植株，从离地面 8-12cm处截断，取茎部上段，再将茎段切成长度为3-5cm，带有1-2个腋芽的小茎段作为外 植体材料；为减少材料污染源，采取茎段时，应选择连续三天以上晴好天气后进行；将采回 的莖段去除大部分叶片后，用自来水冲洗lOmin，0. 5%洗衣液溶液浸泡20min，再用自来水 冲洗干净； ② 外植体消毒：步骤①得到的外植体用75%的酒精浸泡30S，无菌水冲洗4-5次，沥干 水，然后置于〇. 1 %的升汞溶液中消毒15min，无菌水冲洗4-5次； ③ 初代培养：将步骤②处理过的茎段在无菌条件下接种到初代培养基，初代培养基成 分为：MS+ NAAL 5mg/L+6-BA2mg/L+5%糖蜜，培养基pH5. 6 ;光照强度1500Lux，培养温度 25 ±2 °C，培养时间45天； ④ 继代培养：初代培养至腋芽萌发成丛芽，取丛芽进行继代培养，继代培养基成分 为：MS+6_BA6mg/L+NAA0. 5mg/L+0. 05% 氨基寡糖素 +8% 糖蜜 + 150mg/L 土豆；培养温度 25±2°C，光照时间15h/d，培养基pH 5. 6-5. 8 ;光照强度2000Lux，培养30天，形成2cm长的 具有3个茎节的芽条，将其切成带茎节的切段，每个芽分割成2段；每30天如此继代一次， 扩繁试管苗； ⑤ 生根培养：待步骤④扩繁的试管苗取出，转入生根培养，生根培养基成分为： MS+NAA 0? 5mg/L+6_BA4mg/L+2. 0% 氨基寡糖素 +18% 糖蜜 +200mg/L 土豆；光照强度为 3000Lux，培养温度25 ±2°C，培养至25天，根长至2cm，苗长高3cm时出瓶； ⑥ 炼苗：选择健壮、株茎粗壮的试管苗出瓶，清水清洗根部，移栽在泥炭土：椰糠配比 为1:3的营养基质中，保持空气湿度85-95%，光照120001UX ; ⑦ 移栽：炼苗15天后移到露天培养。2. 根据权利要求1所述的铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：还包括组培苗移栽 后的管理，具体为：移栽前，将组培苗在定根水中浸泡l_2h ;施足基肥，及时追肥，并及时防 治病虫害。3. 根据权利要求2所述的铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：所述定根水组成为： 3%甲霜灵+3%恶霉灵+0. 05%吲哚丁酸+0. 05%萘乙酸钠+0. 5%聚丙烯酸钠+纯净水余量。4. 根据权利要求2所述的铁皮石斛的组培快繁方法，其特征在于：所述防治病虫害为： 防治病害是黄斑病、炭疽病、叶枯病或花叶病；防治虫害是石斛菲盾蚊、蜗牛或地老虎。
【专利摘要】本发明公开了一种铁皮石斛的组培快繁方法，通过外植体的建立、外植体处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽等步骤实现，针对初代培养、继代和生根培养选择了专用的培养基组成，合理的炼苗措施使铁皮石斛移栽后生长快，成活率高，达到了繁殖系数高，繁殖效果好的目的。同时本发明方法生产成本低廉，得到的组培苗遗传状一致，是铁皮石斛组培快繁的有效途径，且适用范围广。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105230489
【申请号】CN201510725916
【发明人】黄忠勤
【申请人】大新县生产力促进中心
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年11月2日