一种利用ghrelin减少新生雏鸡脂肪细胞分化和降低脂肪沉积的方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及减少新生维鸡脂肪细胞分化和降低脂肪沉积的方法，具体设及一种 利用曲relin减少新生维鸡脂肪细胞分化和降低脂肪沉积的方法及应用。
【背景技术】
[0002] 研究表明，内脏脂肪会破坏人体内部的信息传导系统，被脂肪包裹的内脏器官会 向身体输出错误化学信号，致使器官内部也继续围积脂肪。人体器官内部一旦形成脂肪 堆积，就会增加患糖尿病、高血压、动脉硬化、屯、脏病等各种代谢性疾病的机会，进而增加中 风、屯、肌梗死等屯、脑血管疾病的发生率。同时，内脏脂肪不断挤压肠胃，严重影响消化功能， 导致便秘。鸡油（鸡的皮下脂肪和腹部脂肪）中甘油Ξ醋和胆固醇的含量较高，随着社会的 进步和人们健康意识的提高，人们对鸡油也越来越嫌弃，因而在对肉鸡进行加工和烹任前， 常常被扔掉，运不但造成了大量的资源浪费，而且还严重损害了消费者的利益。
[0003] 随着社会的快速发展和生活水平的提高，我们的食物结构也发生了较大改变，现 在每天的肉类占的比重越来越大，而其中的肉鸡（鸡肉）更甚。随之而来的是脂肪摄入过 高，化及脂肪带来的高胆固醇。研究表明，内脏脂肪会破坏人体内部的信息传导系统，被脂 肪包裹的内脏器官会向身体输出错误化学信号，致使器官内部也继续围积脂肪。人体器官 内部一旦形成脂肪堆积，就会增加患糖尿病、高血压、动脉硬化、屯、脏病等各种代谢性疾病 的机会，进而增加中风、屯、肌梗死等屯、脑血管疾病的发生率。同时，内脏脂肪不断挤压肠胃， 严重影响消化功能，导致便秘。
【发明内容】
[0004] 为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种利用曲relin减少新生维鸡脂肪细 胞分化和降低脂肪沉积的方法及应用。
[0005] 本发明的技术方案是：一种利用曲relin减少新生维鸡脂肪细胞分化和降低脂肪 沉积的方法，具体是通过在受精蛋开始解化的第五天至第十五天之间向卵白内注射至少一 次曲relin溶液。
[0006] 本发明的进一步改进包括：
[0007] 所述曲relin溶液的浓度为100-15化g/ul，每次每蛋注射量为0. 1ml。
[000引在受精蛋开始解化的第五天和第十五天时，分别向卵白内注射一次曲relin溶 液。
[0009] 在受精蛋开始解化的第五天时，每枚蛋注射浓度为l(K)ng/ul的曲relin溶液 0. 1ml〇
[0010] 在受精蛋开始解化的第五天时，每枚蛋注射浓度为15化g/ul的曲relin溶液 0. 1ml〇
[0011] 在受精蛋开始解化的第十五天时，每枚蛋注射浓度为l(K)ng/ul的曲relin溶液 0. 1mlο
[0012] 在受精蛋开始解化的第十五天时，每枚蛋注射浓度为15化g/ul的曲relin溶液 0. 1ml〇
[0013] 所述的曲re1in来源是优选鼠。
[0014] 本发明的另一目的在于，曲relin在减少新生维鸡脂肪细胞分化和降低脂肪沉积 中的应用。
[0015]本发明实施方法简单，能显著降低新生维鸡皮下脂肪细胞的分化、减少脂肪细胞 的沉积，降低新生维鸡脂肪的含量，为后期肉鸡饲养中防止脂肪过度沉积，减少鸡体内脂肪 含量奠定良好的基础。从而降低中的脂肪含量和胆固醇含量。通过减少鸡肉中脂肪细胞的 分化，减少脂肪细胞的沉积，进一步减少了鸡肉中脂肪和胆固醇的含量，降低了鸡肉中脂肪 和胆固醇对人们身体健康的危害。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例对本发明做详细说明。
[0017] 实验材料与方法 [001引 1试验材料
[0019] 1.1实验动物
[0020] 选用Ross肉鸡受精种蛋（新乡大用有限公司）称重，挑取重量在65-70g的蛋140 枚，随机分成7组，每组20枚，分别为Control组（正常解化倍，不做任何处理）、E5-100组、 E5-150组、E5-醋酸组、E15-100组、E15-150组、E15-醋酸组。对各组蛋进行编号，记录。 解化条件：37. 5 ± 0. 2 °C，相对湿度55 ± 2 %。
[0021] 1.2动物处理：卵内喂食曲relin
[0022] Control组在整个解化的过程中不做任何处理；
[0023]E5-100组在E5胚龄时每枚蛋注射浓度为10化g/ul的曲relin溶液0. 1ml;
[0024]E5-150组在E5胚龄时每枚蛋注射浓度为150ng/ul的曲relin溶液0. 1ml，
[00巧]E5-醋酸组在E5胚龄时每枚蛋注射醋酸0. 1ml;
[0026]E15-100组在E15胚龄时每枚蛋注射浓度为lOOng/ul曲relin溶液0. 1ml，
[0027]E15-150组在E15胚龄时每枚蛋注射浓度为150ng/ul曲relin溶液0. 1ml。
[0028]El5-醋酸组在E5胚龄时每枚蛋注射醋酸0. 1ml;
[0029] 曲relin溶液的配方：鼠曲relin粉末，用浓度为0.1 %的醋酸稀释。
[0030] 卵内喂食的具体步骤：E5(开始解化的第五天）胚龄时，通过照蛋器照蛋发现卵白 的位置在气室的正下方，E15胚龄时，通过照蛋器照蛋，发现卵白的位置在气室的斜下方，标 出注射位点。采用22G针头卵白注射曲relin(曲relin也称为生长激素促分泌素的内源性 配基，或饥饿素，或脑肠肤）溶液，注射后，玻璃纸蜡封注射口，继续解化，此时，解化器摇蛋 按钮关闭，24小时后，蜡封的口凝固后，重新打开摇蛋按钮，继续解化。
[0031] 1.3组织取材
[0032] 维鸡出壳后新生维鸡称重，记录。按100mg/lOOg体质量乌拉坦麻醉，然后颈椎脱 白处死，其中每组10只鸡取肝脏、蔽下脂肪用0. 75%的生理盐水冲洗干净，用滤纸吸去多 余的水分，再用万分之一的分析天平称重后置于4%的多聚甲醒憐酸缓冲液（PH7. 4)中固 定。每组另外10只鸡取肝脏、蔽下脂肪液氮冷冻后，移入低溫冰箱，用于提取RNA。
[003引2试验方法
[0034] 2. 1固定组织冰冻切片的制作
[0035] 多聚甲醒固定好的组织放入10%的葡萄糖溶液中过夜，等其沉底后再放入20% 的葡萄糖溶液过夜沉底，第Ξ天再放入30 %的薦糖溶液沉底，最后将组织放入包埋剂中进 行冰冻切片，切片厚度为0. 5μm，展贴在载玻片上，-20°C冰箱中储存备用。
[0036] 2. 2脂肪细胞油红0染色
[0037] 1、从-20°C冰箱中取出切片放在70%的酒精中30s-Imin
[003引 2、然后放入油红0染液中13-18min
[0039] 3、用蒸馈水洗去染液
[0040] 4、苏木精复染5min
[0041] 5、自来水蓝化15min
[0042] 6、蒸馈水水洗Imin
[0043] 7、甘油封固剂封片
[0044] 染色结果：脂肪呈红色，胞核呈蓝色。
[0045] 2. 3肝脏中ATCL和FAS的表达W及蔽下脂肪ATCL、PPAR- 丫、SCD等基因的表达
[0046] 2. 3. 1引物设计（引物由上海英驗生物技术有限公司提供）
[0047]
[0048]
[0049] 2. 3. 2不同基因的实时定量PCR
[0050] 将不同处理组的肝脏、皮下脂肪、腹部脂肪分别在液氮中研磨成粉末，按照TRIzol 法化ifeTechnologies, 15596018,Carlsbad,USA)提取组织总RNA，根据P