一种大花序桉的组培快繁方法_2

文档序号:9694644阅读:来源:国知局
粉100-50化9111水溶 液浸泡10-30min,移栽后特殊培养25-30天,将长出真根的苗和未长出真根的苗分开管理, 再培养60-80天后,得到再生植株。
[0014] 上述的大花序按的组培快繁方法中,所述的优良家系是指,从澳大利亚引种的种 源/家系,通过栽培试验、测定分析,选择出适合本地生长、生长量高、抗逆性强,已成功驯化 的家系/种群。
[0015] 上述步骤的大花序按的组培快繁方法中,所述的优良单株是指,经试验测定分析 后,确定的优良家系中树高、胸径、蓄积量等生长指标突出,木材材性、干形、抗病虫害能力 等指标优越的优势木个体。
[0016] 上述步骤(7)中的无菌芽诱导培养基为:改良MS+N6苄基腺嚷岭(6-BA)1.0mg/L+糞 乙酸0.2-0.4mg/L+维生素 C(Vc)2.0 mg/L+核黄素(维生素 B2)7.0 mg/L+薦糖30g/L+琼脂 3.75g/L,pH 5.8-6.0。
[0017] 上述步骤(8)中的继代增值培养基为:改良MS+N6苄基腺嚷岭(6-BA)0.3-0.5mg/L+ 糞乙酸0.1-0.15111邑/1+核黄素(维生素82)7.0 111邑几+维生素0 2.0111邑/1+薦糖30邑几+琼脂 3.75g/L,pH 5.8-6.0。
[0018] 上述步骤(9)中的生根培养基为:1/2改良MS+ABTIO. 6mg/L+IBA0. lmg/L+薦糖15g/ L+琼脂3.9g/L,pH δ.8-6.2。
[0019] 上述步骤(11 )中的发育不完全根是指,从苗茎切口长出的根状突起,长0.5-1.0cm,表面光滑,没有根毛,又称假根的根状组织。
[0020] 上述步骤(11)中的特殊培养是指,将发育不完全根的苗移栽后弱光培养,光照强 度lOOOLux,用微型喷头喷淋雾状水保湿,始终保持叶面湿润,栽培基质保持不干不溃状态, 不积水,小苗生长稳定后,叶面喷施低浓度大量元素和微量元素肥。
[0021] 本发明生根培养基中的ABT1能通过强化、调控植物内源激素的含量、重要酶的活 性,促进生物分子的合成,诱导植物不定根或不定芽的形态建成,调节植物代谢作用强度, 从而提高组培苗的成活率;IBA能够促进植物主根生长,提高发芽率,成活率。本发明其它的 培养基化合物可W从化学词典或农作物栽培的教科书检索到其名称和作用,本发明采用运 些化合物进行组合对大花序按最为适合,是经过多次试验筛选才最终确定的。
[0022] 本发明的有益效果为: 1、本发明采用大花序按优良家系的优良单株萌芽作为外殖体,组培快繁材料来源的遗 传信息是已知的,并经过栽培试验检测过的,优树的生长量和抗逆性是可靠的,所有培育的 目标明确,而非随机和盲目。
[0023] 2、本发明的组培快繁方法中,组培无菌芽获得方式是由芽器官(带潜伏芽的茎段) 离体诱导丛生芽,不经过愈伤组织途径,无菌芽诱导过程中没有经过脱分化过程,培育的组 培苗遗传性状稳定,能够完整保持母树的遗传特性,不易发生变异。
[0024] 3、本发明的大花序按的组培快繁方法操作难度不高、生产成本较低。针对难生根 树种大花序按的生根技术,采用瓶内促根和移植后促根两步成苗方法,对瓶内促根后长出 发育不全根者,通过移植后特殊培养获得再生植株,并获得成功,总的生根率高达72.8% W 上,从而解决了大花序按瓶内促根率不高的缺陷,最终打破制约大花序按无性系推广的瓶 颈,在技术上取得了突破。采用本发明的大花序按的组培快繁方法可W获得大量整齐一致, 遗传性状稳定的再生植株。
[0025] 4、本发明的大花序按的组培快繁方法试验结果稳定,重复性良好,组培再生植株 经初步造林试验,造林成活率95%W上,生长良好,苗木能够保持优树的优良遗传特性,适合 大面积种植,可W应用于大规模商品化育苗。另外,在此基础上,也可W进行大花序按的转 基因育种。
【附图说明】
[0026] 图1是大花序按优良家系中的优良单株(24年生); 图2是大花序按优良家系中的优良单株伐倒后的萌芽; 图3是大花序按优树萌芽条作为外殖体,诱导萌生的无菌芽; 图4是大花序按无菌芽继代增殖苗; 图5是大花序按瓶内生根苗; 图6是大花序按组培瓶苗移栽; 图7是大花序按移栽苗特殊培养荫棚; 图8是大花序按组培成苗; 图9是大花序按造林情况。
【具体实施方式】
[0027] 下面对本发明的具体实例进行详细阐述,W使本发明的优点和特征能更易于被本 领域技术人员理解,从而对本发明的保护范围作出更为清楚明确的界定。
[002引 实施例1 一种大花序按的组培快繁方法,其步骤如下: (1) 在澳大利亚引种的家系试验林中,经测试对比,选择出适合本地生长的大花序按优 良家系; (2) 在大花序按优良家系中,通过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性W及干 形指标,综合对比后选择出优良单株; (3)将优良单株在离地面15cm高度处伐倒,促萌芽,当萌芽条长到12cm时,剪取萌芽条, 用水浸泡基部带回实验室备用; (4 )萌芽条修剪去叶片、叶柄,用自来水流水冲洗3 m i η,再用饱和洗衣粉溶液洗涂 lOmin,用纯净水清洗干净; 巧)在超净工作台上,将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分,留半木质化茎段,切成长 2-3cm,保留有1-2个潜伏芽的切段做消毒材料; (6) 将待消毒材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中,用75%酒精溶液浸泡15s,无菌水清 洗3次,洗去残留酒精,再用0.1%HgCL2溶液浸泡并适当揽拌,7min后倒去化化2溶液至专用收 集罐中,用无菌水清洗材料5次; (7) 用綴子夹取清洗好的茎段,放置在灭菌的接种碟上,用灭菌过的滤纸吸干表面水 分,切去叶柄和茎段的两端,接种到无菌芽诱导培养基上,无菌芽诱导培养基为:改良MS+N 6 苄基腺嚷岭(6-BA)1.0mg/L+糞乙酸0.2mg/L+维生素 C 2.0 mg/L+核黄素7.0 mg/L+薦糖 30g/L+琼脂3.75g/L,pH 5.8-6.0;全暗培养8天后,在溫度26 ± 2°C,光照12h/d,光照强度 1500-20001UX条件下培养25天; (8) 外殖体萌芽后,侧芽和不定芽不断生长,萌芽15天后,选取没有污染的无菌芽,切割 后转入继代增殖培养基上,继代增值培养基为:改良MS+N 6苄基腺嚷岭(6-BA)0.3mg/L+糞乙 酸0.1111旨/1+核黄素7.0 111旨/1+维生素0 2.0111旨/1+薦糖30旨/1+琼脂3.75旨/1,抑5.8-6.0;在 溫度26 ± 2°C,光照强度2000-25001UX条件下,培养23天,W促进丛芽增殖和生长,在增殖培 养基上反复继代培养,无菌芽苗数量不断增多; (9) 当继代培养的芽苗长到2-3cm,并有3-4对叶片时,切取芽苗转入生根培养基上培 养,生根培养基为:1/2改良MS+ABT10.6mg/L+IBA0. lmg/L+薦糖15g/L+琼脂3.9g/L,pH 5.8-6.2;溫度28-30°C,光照强度1200-15001UX,培养8天,当切口冒出短根或根点,出根率达到 30-40%时,移瓶至溫度28-35°C,光照强度3000-50001UX的自然光下培养18天; (10) 将生根齐全,苗高3-4cm的生根瓶苗,洗去琼脂,移栽至用KMn化消毒过的黄屯、±和 赔石做基质的营养杯或羟基质育苗杯上,黄屯、上和赔石的比例为5:1,培养60天,得到再生 植株; (11) 将具有发育不完全根,苗高1.5-2.0cm的生根瓶苗,洗去琼脂,移栽到用KMn04消毒 过的黄屯、±+赔石+河沙按照4:1:1做基质的营养杯,移栽前用ABT1生根粉50化pm水溶液浸 泡lOmin,移栽后特
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