一种美国红枫的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物组培育苗技术领域，具体设及一种美国红枫的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002] 美国红枫，械树科械属，原产于美国东北部，为大型乔木，树型圆形，整洁优美，是 美国最受欢迎的绿化树种。前几年，自其被引入国内之后，已成为园林绿化的新宠，因此，关 于美国红枫的研究也逐渐增多。目前主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是 很高，繁殖系数低，繁殖周期长，场地要求大，人工成本较高，远不能满足国内对种苗的需 求。
[0003] 近几年，国内对于美国红枫组培快繁技术的研究也取得了一定成果，然而该方法 尚不完善，繁殖时间较长，成活率不高，材料成本较高成为制约美国红枫组培快繁技术发展 的瓶颈，因此，如何提高其生产效率，缩短培育时间，降低人工成本，保持优良树种的遗传稳 定性，提高其繁殖系数成为目前亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本申请提供一种美国红枫的组培快繁方法，所用培养基配方简单，组培 流程简便，培养时间短，增殖频率高，成活率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管 理，降低了人工成本，能保证所长出的幼苗植株在形状上的一致性，易于操作，可进行产业 化生产。
[000引为解决W上技术问题，本发明提供的技术方案是一种美国红枫的组培快繁方法， 包括W下步骤：
[0006] (1)外植体选取及灭菌:切取美国红枫带芽茎段，采用酒精和升隶灭菌处理；
[0007] (2)启动培养:将步骤（1)处理后的外植体接种到启动培养基中培养2-3周，蔽芽 生成，所述启动培养基的组成包括:MS基本培养基，补充0.1-2.Omg/L PVP，所述启动培养 基的抑值为5.8-6.2;
[0008] (3)增殖培养:切取步骤(2)所得蔽芽，接种到增殖培养基中培养3-5周，丛生芽生 成，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.01-0.5mg/L 6-BA;
[0009] (4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单株，接种到生根培养基中培养2-3 周即得美国红枫无菌苗，所述生根培养基的组成包括：1/2MS基本培养基，补充0.05-0.5mg/L NAA；
[0010] 在步骤(2)启动培养中，切取所述外植体带芽茎段上部的可用茎段，重新接种到所 述启动培养基中培养，直至蔽芽生成，将所述蔽芽切下供步骤(3)增殖培养，循环2-3次。
[0011] 在启动培养过程中，外植体带芽茎段生长，此时可将带芽茎段的上部分带芽的部 分再次切取下来，重新作为外植体接种到启动培养基上，15-25天时，在原芽周围又会分化 出1-3个l-3cm的蔽芽，可切下供增殖培养所用，运样每次带芽茎段和启动培养基可用2-3次，采用此方法循环重复利用，可提高材料利用率，加快繁殖速率。
[0012]优选的，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：选取美国红枫幼嫩枝条，去掉叶 片，在洗涂液中浸泡5-15min，然后在流水中冲洗20-35min;在无菌操作台上，用75%的酒 精处理25-40s，无菌水冲洗2-4次，再用0.1 %的升隶处理4-8min，无菌水冲洗5-7次，惊 干，切割成长度为1一2cm的带芽茎段即可。
[001引优选的，所述启动培养基的组成包括墨基本培养基，补充0.5-2.0111邑/1口￥口。 [0014]更为优选的，所述启动培养基的组成包括:MS基本培养基，补充l.Omg/L PVP。
[0015] 优选的，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.05-0.5mg/L 6-BA。
[0016] 更为优选的，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充O.lmg/L 6-BA。
[0017] 优选的，所述生根培养基的组成包括:1/2MS基本培养基，补充0.1-0.5mg/L NAA。
[0018] 更为优选的，所述生根培养基的组成包括:1/2MS基本培养基，补充0.2mg/L NAA。
[0019] 优选的，所述启动培养基、所述增殖培养基中均还补充30g/L薦糖、6g/L琼脂;所述 生根培养基中，还补充20g/L薦糖、6g/L琼脂。
[0020] 优选的，所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中，培养溫度为23-27°C，光照强 度为2000-2500LX，所述启动培养的光周期为14/1化，所述增殖培养和所述生根培养的光 周期为16/她。
[0021] 本申请所述MS基本培养基为MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织 生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含 量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较 广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
[0022] 所述WPM基本培养基为木本植物用培养基(WPM，woody plant medium),无机盐浓 度适中，其它营养成分充足。能够满足植物细胞生长的营养和生理需要，特别适用于木本植 物的组培快繁。
[0023] 所述1/2MS基本培养基是MS基本培养基大量元素减半，其它成分不变。具有无机盐 浓度较低，但能够保证组织生长所需的矿质营养，满足植物细胞的营养和生理需要，最主要 是能促进植物组织生根，因而在植物组织培养快速繁殖常用它作为生根培养基的基本培养 基。
[0024] 所述?\^为聚乙締化咯烧酬(9〇17￥；[]171971'1'〇11(1〇]16)的简称，其用途广泛，因其 能与多酪类化合物络合而在植物组培中被用于防止外植体褐化。
[0025] 所述6-BA为6-节氨基腺嚷岭，是一种植物生长激素，其主要作用是促进芽的形成， 也可W诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物体内物质的积 累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中最常用的一种细胞分裂素。
[0026] 所述NAA为糞乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用杆插法繁殖时使用，也可用 于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄 花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
[0027] 本申请与现有技术相比，其详细说明如下:本申请技术方案提供了一种美国红枫 的组培快繁方法，包括外植体的选取及灭菌、启动培养、增殖培养、生根培养的步骤，通过对 启动培养基、增殖培养基、生根培养基的筛选，得到最佳的培养基组分和配比，采用前述植 物生长激素配比形成的培养基，配方简单，培养基成本低，配合各阶段的培养条件，得到的 幼苗繁殖时间短，培养流程简便，提高了美国红枫繁殖的效率，繁殖系数可高达7-8,成活 率高，能快速获得遗传性状一致的美国红枫无菌苗，利用组织培养技术，进行外植体培养， 可不受季节气候变化、自然灾害的影响，可进行大规模的工业化育苗及深加工。
【具体实施方式】
[0028] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。
[0029] 实施例1
[0030] 本实施例所述的一种美国红枫的组培快繁方法，包括W下步骤：
[0031 ] (1)外植体选取及灭菌:选取美国红枫幼嫩枝条，去掉叶片，在洗涂液中浸泡5 - 15min，然后在流水中冲洗20-35min;在无菌操作台上，用75%的酒精处理25-40s，无菌水 冲洗2-4次，再用0.1 %的升隶处理4-8min，无菌水冲洗5-7次，惊干，切割成长度为1 - 2cm的带芽茎段即可；
[0032] (2)启动培养:将步骤（1)处理后的外植体接种到抑值为6.0的启动培养基中培养 2-3周，蔽芽生成，所述启动培养基的组成为:MS基本培养基，补充1. Omg/L PVP、30g/L薦 糖、6g/L琼脂；
[0033] (3)增殖培养:切取步骤(2)所得蔽芽，接种到增殖培养基中培养3-5周，丛生芽生 成，所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.1 mg/L 6-BA、30g/L薦糖、6g/L琼脂；
[0034] (4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单株，接种到生根培养基中培养2-3 周即得美国红