专利名称：一种保健食品软胶囊及制备方法
技术领域：
本发明属于保健食品技术领域。具体涉及一种含有白藜芦醇和茶多酚的保健食品软胶囊及制备方法。
背景技术：
随着人们生活水平的提高，饮食结构的变化，较多的中老年人表现有高血脂及血液粘稠的症状。据统计世界现有老年人口约5.9亿，中老年人的心脑血管疾病已经成为一个严重的社会问题。据报道，2000年世界心脑血管药物市场已达400亿美元，其中降血脂药物占销售总额的18.7％，并以每年9％的增长率增长。随着社会的不断发展，人们要求“回归自然”的呼声愈来愈强，天然产物将被人们作为预防保健的首选产品。
科学研究证明，葡萄的皮、籽中含有丰富的白藜芦醇活性成份及多元酚类物质。白藜芦醇(Resveratrol，简称Res)，它是一种多酚类的化合物，近年来研究发现酚类物质大多具有显著的抗氧化、清除自由基的作用。自从发现白藜芦醇成份以来，人们陆续对其进行药理活性研究，发现它具有非常强的药理活性，主要表现在预防治疗肿瘤作用、抗炎免疫作用、保护心血管系统、抗氧化和清除自由基作用以及抑制HIV病毒的感染作用。自由基学说(free radical theory)由D.Harman于1965年首先提出，他认为生物体在细胞正常代谢中所产生的自由基，如果过量，就会造成DNA和其它大分子损伤，导致退变性疾病、恶性损伤及细胞死亡，最终使生物体衰老死亡。葡萄皮、籽提取物-白藜芦醇可以有效的清除多余的自由基，保持机体的正常代谢。
茶多酚是茶叶中儿茶素类、黄酮类、酚酸类和花色素类化合物的总称，其分子中带有多个活性羟基(-OH)，可终止人体中自由基链式反应，对超氧阴离子与过氧化氢自由基的消除率达95％以上，其效果优于维生素E和C；茶多酚对细胞膜与细胞壁有保护作用，对脂质过氧化自由基的消除作用十分明显；另外还有抑菌、杀菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收，防止动脉粥样硬化，是艾滋病(HIV)逆转酶的强抑制物，有增强机体免疫能力、抗肿瘤、抗辐射，具有抗氧化延缓衰老的作用。体外证实茶多酚可抑制铜诱导的低密度脂蛋白氧化修饰，在体外加入25-400μmol/L儿茶素和茶黄素对铜诱导的脂蛋白的氧化表现出明显的抑制作用。毒理学研究证实，茶多酚是安全无毒的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究开发含有白藜芦醇和茶多酚的功能性保健食品。
本发明提供了一种含有白藜芦醇和茶多酚的保健食品软胶囊(纳贝牌清知源软胶囊)。该保健食品软胶囊包括按重量百分比的下列组份组成每粒胶囊的重量为300-500mg，其中每粒白藜芦醇∶茶多酚＝(6.0-20.0)克∶(6.0-20.0)克。
本发明的含有白藜芦醇和茶多酚的保健食品软胶囊经动物试验具有延缓衰老和调节血脂作用。
一、延缓衰老作用1.材料和动物1.1.受试物纳贝牌清知源软胶囊，人体推荐用量1.2g/人/日。
1.2.动物a.蝇种由西北大学生命科学学院引进野生型“美国黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)”，本实验室扩大繁育备用。
b.大鼠中国军事医学科学院实验动物中心提供18月龄SPF级Wister雌性大鼠40只，体重294-404g和3月龄SPF级雌性Wister大鼠10只，体重199g-218g(京动许字99001号)。
1.3.试验环境室温20-24℃，生化培养箱温度25±1℃、湿度50％-70％RH。
2.设备与试剂2.1.果蝇生存试验LRH-250型生化培养箱(兰豹牌)，BS110S型电子天平(赛多利斯牌)，果蝇指管(ф2.5cm×高12cm)、搪瓷盘、试管架、乙醚、丙酸及基础培养基配料(玉米粉、白糖、琼脂粉、酵母粉)，电热恒温干燥箱，移动式紫外消毒灯(广西柳州第二医疗器械厂)。
2.2.抗氧化功能指标测定930型荧光光度计、752C紫外可见分光光度计、恒温水箱、微量加样器、普通离心机、旋涡混旋器、组织匀浆器、紫外灯、离心管、试管、吸管等、SOD测定试验盒、MDA及GSH-PX省略测定试剂盒和脂褐质测定试剂盒(南京建成生物技术工程研究所出品)。
3.检验方法3.1.检验依据“保健食品功能学评价程序和方法”(卫生部 1997)。
3.2.果蝇生存试验剂量设计将“纳贝牌清知源软胶囊”按人体推荐用量1.2g/人/日推算设计为(人体推荐量/3000×100％)四个剂量组和一个空白对照组，培养基中含受试物剂量(W/V)按0.360％、0.120％、0.040％、0.015％四组分别配制各剂量组培养基，对照组给予普通基础培养基。
试验方法收集8小时内新羽化的果蝇成虫，乙醚麻醉下随机将雌、雄果蝇称重、分别分为5组，每组200只蝇。再按每管25只蝇，将每组果蝇分放8个基础培养基蝇管中，于搪瓷盘中平放，按组放入生化培养箱中喂养。至两周时将各剂量组果蝇换入相应含受试物培养基管中，继续喂养。每四天换培养管一次，每天定时两次观察果蝇活动状态，并记录死亡蝇数一次，至果蝇全部死亡为止。
观察指标各组分别统计半数死亡天数，平均寿命和最高平均寿命(最高平均寿命按每组最后死亡的20只蝇寿命均值计算)。各剂量组与对照组比较结果按方差分析处理(半数死亡天数按大于对照组4天为阳性)。
3.3.(大鼠)抗氧化功能指标测定剂量设计将“纳贝牌清知源”设计剂量0.4g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.1g/kg.bw三个剂量组，另设老龄对照组和少龄鼠对照组，每组10只大鼠，剂量分别相当于人体推荐量的20倍、10倍和5倍。受试物以2％淀粉糊配制各剂量浓度。
试验方法各剂量组按每天灌胃一次给予受试物，对照组均给予等容量淀粉糊，连续90天，每周大鼠称体重一次，于第91天摘眼球取全血、血清及肝组织分别进行以下四项生化指标测定大鼠肝组织中脂褐质含量测定按程序方法用930型荧光光度计进行测定。
血清中SOD含量测定按试剂盒法用752-C紫外可见分光光度计进行测定。
大鼠血清中MDA含量测定按试剂盒法用752-C紫外可见分光光度计进行测定。
大鼠全血中GSH-PX酶活力测定按试剂盒法用752-C紫外可见分光光度计进行测定。
观察指标过氧化脂质两项指标为肝组织中脂褐质含量测定和血清中MDA含量测定；抗氧化酶两项指标为血清中SOD含量测定和全血中GSH-PX酶活力测定。将各剂量组以上四个指标结果均与其老龄对照组比较，进行方差分析。
4.检验结果4.1.果蝇生存试验表1“纳贝牌清知源软胶囊”对果蝇寿命影响结果统计表(X±S)
由表1可见雄果蝇四个剂量最高平均寿命均高于对照组，雌果蝇0.040％、0.015％受试物组的最高平均寿命均高于对照组，其差异亦均有显著性(*P＜0.05，**P＜0.01)。雌果蝇0.015％受试物组平均寿命明显高于对照组，其差异有高度显著性(*P＜0.01)。雄果蝇的0.360％、0.040％、0.015％受试物组平均寿命高于对照组，其差异均有高度显著性(**P＜0.01)。半数死亡天数雌果蝇0.360％浓度显示为阳性。
4.2.抗氧化功能指标测定4.2.2.对体重的影响表2“纳贝牌清知源软胶囊”对大鼠体重的影响
表2显示，以0.4，0.2，0.1三个剂量组给药所得到的体重数据与老龄对照组体重指标基本一致，没有显著性的差异(P＞0.05)。
4.2.3.老龄对照与少龄对照四项生化指标比较表3“纳贝牌清知源软胶囊”老龄与少龄对照组结果统计
由表3可见，老龄对照组MDA指标6.97±0.88nmol/ml和脂褐质含量8.21±1.67μg/g较少龄对照组有明显的升高，SOD含量和GSH-PX酶活力明显降低，且差异均有高度显著性(P＜0.01)，即表明老龄对照组的老龄化生化指标是比较明显的。
4.3.脂褐质测定表4“纳贝牌清知源软胶囊”对肝组织中脂褐质含量的影响
从上表可以看出，各个剂量组(0.4，0.2，0.1g/kg.bw)的脂褐质含量指标都低于老龄对照组8.21±1.67μg/g数据，且差异均有显著性(P＜0.05，P＜0.01)，反映出“纳贝牌清知源软胶囊”可以降低体内的脂褐质含量，具有抗氧化的作用。
4.4.血清中MDA含量测定表5“纳贝牌清知源软胶囊”对血清中MDA含量的影响
从表5可以看出，各个剂量组(0.4，0.2，0.1g/kg.bw)的MDA指标含量与老龄对照组基本上相同，变化幅度非常小，没有显著性的比较差异(P＞0.05)。
4.5.血清中SOD含量测定表6“纳贝牌清知源软胶囊”对血清中SOD含量的影响
从上表可以看出，三个剂量组(0.4，0.2，0.1g/kg.bw)的SOD含量高于老龄对照组的301.91±60.38nu/ml，并且与老龄对照组比较差异均有高度显著性(P＜0.05，P＜0.01)。
4.6.全血中GSH-PX活力测定表7“纳贝牌清知源软胶囊”对全血中GSH-PX酶活力单位的影响
从上表可以看出，各个剂量组(0.4，0.2，0.1g/kg.bw)的GSH-PX酶活力单位高于老龄对照组的7.96±2.92活力单位，并且中、低剂量组与老龄对照组比较差异均有高度显著性(P＜0.01)。
5.结论5.1.果蝇生存试验5.1.1.果蝇平均寿命结果雌蝇有一组为阳性，雄蝇有三组为阳性。
5.1.2.果蝇最高平均寿命结果雌蝇有两组为阳性，雄蝇有四组为阳性。
5.1.3.半数死亡天数结果雌蝇有一组为阳性。
5.2.(大鼠)抗氧化功能指标测定5.2.1.肝组织中脂褐质含量测定为阳性结果。
5.2.2.血清中SOD含量测定为阳性结果。
5.2.3.血清中MDA含量测定为阴性结果。
5.2.4.全血中GSH-PX活力测定为阳性结果。
综上所述，果蝇生存试验与(大鼠)抗氧化功能指标测定结果均为阳性，可以判断“纳贝牌清知源软胶囊”具有延缓衰老的作用。
二、调节血脂作用1.材料和方法1.1.样品
“纳贝牌清知源软胶囊”由上海纳贝生物技术有限责任公司生产，成品为软胶囊，内容物为紫色膏状物，人体最大推荐用量为每人每日1.2g，即0.02g/kg.bw/d。用3％淀粉糊配制各剂量浓度。
1.2.实验动物由第四军医大学试验动物中心提供健康成年雄性二级SD大白鼠50只(医动证字08-014号)体重150～200g。动物房合格证号为医动字第08-32号，温度为18℃～24℃，湿度为50～68％。饲料、垫料均由第四军医大学试验动物中心提供。
1.3.仪器和试剂解剖器械、美国产AGII全自动生化分析仪，总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒(北京中生生物制品有限公司生产)和高脂饲料(配方79％基础饲料、1％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油)等。
1.4.剂量设计将50只雄性大鼠随机分为五组受试物高剂量(0.20g/kg.bw)、中剂量(0.10g/kg.bw)、低剂量(0.05g/kg.bw)三个剂量组，分别相当于人体推荐用量的10倍、5倍、2.5倍，另设一个高脂模型对照组和一个溶剂对照组(3％淀粉糊)。每组10只大鼠。
1.5.实验方法购进实验用大鼠，喂养观察一周，第8天内眦采血测定血清总胆固醇，根据血脂水平进行随机分组。各个剂量组和高脂模型对照组均喂饲高脂饲料，溶剂对照组喂饲基础饲料。然后各剂量组按照上述剂量每天罐胃给予受试物一次，高脂模型对照组和溶剂对照组给予等容量的3％淀粉糊，连续罐胃28天。拔眼球取血(取血前禁食16小时)，分离血清，用全自动生化分析仪测定各项血脂指标。在确定高脂模型建立成功后对各项血脂指标统计，各剂量组结果与高脂模型组比较并进行方差分析。
2.结果2.1.“纳贝牌清知源软胶囊”对于大鼠体重的影响表8“纳贝牌清知源软胶囊”对于大鼠体重的影响
由表8可以看出，各个剂量组(0.20，0.10，0.05g/kg.bw)的大鼠体重增重数据与高脂对照组数据156.7±14.6g比较，没有明显的差异，说明剂量组与对照组无显著性差异(P＞0.05)。
2.2.高脂模型的建立表9高脂对照与溶剂对照各血脂指标比较
由表9可以看出，高脂模型对照组大鼠血清总胆固醇2.85±0.43mmol/L高于溶剂对照组的1.67±0.10mmol/L、甘油三酯1.11±0.33mmol/L也明显高于溶剂对照组0.53±0.15mmol/L，两者均显著高于阴性对照组。高密度脂蛋白胆固醇汉来那个0.47±0.05mmol/L明显低于溶剂对照组的指标0.71±0.13mmol/L，并且差异均有高度显著性(P＜0.01)，由此可以判定本次实验的高脂模型是成功的。
2.3.血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇测定结果表10“纳贝牌清知源软胶囊”对于大鼠血清总胆固醇的影响(X±S)
由表10可以看出“纳贝牌清知源软胶囊”各个剂量组血清总胆固醇均低于高脂对照组2.85±0.43mmol/L，说明纳贝牌清知源软胶囊具有总胆固醇的作用，其差异性均有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。
表11“纳贝牌清知源软胶囊”对于大鼠血清甘油三酯的影响(X±S)
由表11可以看出“纳贝牌清知源软胶囊”各个剂量组的大鼠血清甘油三酯均低于高脂对照组1.11±0.33mmol/L，具有明显的降低甘油三酯的功能，并且高、中、低剂量组与高脂对照组比较差异均有高度显著性(P＜0.01)。
表12“纳贝牌清知源软胶囊”对于大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇的影响(X±S)
由表12可见“纳贝牌清知源软胶囊”各剂量组大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇均高于高脂对照组，具有升高高密度脂蛋白胆固醇的作用，并且高、中剂量组与高脂对照组比较差异有高度显著性(P＜0.01)。
3.小结(1)大鼠血清总胆固醇(TC)测定为阳性结果。
(2)大鼠血清甘油三酯(TG)测定为阳性结果。
(3)大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定为阳性结果。本次试验以上三项指标均为阳性结果，故可以判定“纳贝牌清知源软胶囊”对大鼠具有调节血脂作用。
本发明的另一目的是提供了上述一种含有白藜芦醇和茶多酚的保健食品软胶囊的制备方法。
纳贝牌清知源软胶囊生产制备方法1.葡萄籽、皮提取物葡萄籽、皮经纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液，浓缩液经过硅胶柱层析，洗脱液洗脱，浓缩60-70℃、30分钟以上至波美度15°，喷雾干燥≥180℃，瞬间灭菌，辐照消毒，提取物成品，装入无菌袋；2.茶多酚绿茶经热水浸提，浸体液离心、浓缩，浓缩液经硅胶柱分离，水、醇分别洗脱，分段收集洗脱液，回收乙醇、浓缩，浓缩液经喷雾干燥≥180℃，瞬间灭菌，辐照消毒，即得茶多酚，装入无菌袋；3.食用油采用食用级葵花籽油；4.囊壳胶液配制明胶经纯净水浸泡吸水膨胀，浸泡液加热(60℃100min)搅拌熔融，过滤、保温，滤液脱泡、保温静置，即得囊壳用胶液；5.囊化液配制葡萄皮、籽提取物白藜芦醇含量≥30％∶茶多酚含量≥30％∶食用油＝10-20∶10-20∶280-460的比例混合，混合液加热50℃30min，再进行过滤、静置消泡，即为囊化液；6.制丸囊壳胶液和囊化液，经旋转膜法制丸机制丸，得到湿丸，经50℃干燥成干丸，经打光即得成品，再检验包装。
本发明选择以葡萄皮、籽提取物为主要原料，以茶多酚活性成份作为“纳贝牌清知源软胶囊”的辅助功效成份，通过合理的配方和必要的食用原料，研制出具有明显的调节血脂和延缓衰老功能的保健食品。针对高血脂和中老年人群体，纳贝牌清知源软胶囊可以有效的改善中老年人的高血脂症状，同时还可以明显改善中老年人的机体衰老状态，提高人们的生活质量。
图1纳贝牌清知源软胶囊生产制备方法工艺流程图具体实施方式
实施例1选取葡萄皮、籽提取物干粉(白藜芦醇含量35％)200g，然后称量200g纯度为90％的茶多酚干粉，两者充分搅拌，向其中加入2600g的食用油，搅拌溶解得到混合液，加热50℃30min，再过滤、静置消泡，即为囊化液。
另选取适量的明胶经纯净水浸泡吸水膨胀，浸泡液加热(60℃100min)搅拌熔融，过滤保温、过滤液脱泡、保温静置，即得囊壳用胶液。
囊壳胶液和囊化液经旋转膜法制丸机制丸，得到湿丸，然后经50℃干燥成干丸，经打光即得成品，制得成品10000粒“纳贝牌清知源软胶囊”，每粒胶囊的重量为300mg。其中每粒含有白藜芦醇6.88mg，茶多酚17.68mg。
实施例2选取葡萄皮、籽提取物干粉(白藜芦醇含量为60％)3000g，70％的茶多酚干粉3000g，两者充分混合。然后再加入39kg的食用油，搅拌溶解得到混合液，加热50℃30min，再过滤、静置消泡，即为囊化液。
另选取适量的明胶经纯净水浸泡吸水膨胀，浸泡液加热(60℃100min)搅拌熔融，过滤保温、过滤液脱泡、保温静置，即得囊壳用胶液。
囊壳胶液和囊化液经旋转膜法制丸机制丸，得到湿丸，经50℃干燥成干丸，经打光即得成品，制得成品11.2万粒软胶囊，每粒胶囊的重量为400mg。其中每粒白藜芦醇的重量为15.80mg，茶多酚重量为每粒18.10mg。
实施例3选取葡萄皮、籽提取物干粉(白藜芦醇含量95％)1000g，然后称量1000g纯度为50％的茶多酚干粉，两者充分搅拌，向其中加入23kg的食用油，搅拌溶解得到混合液，加热50℃30min，再过滤、静置消泡，得到囊化液。
另选取适量的明胶经纯净水浸泡吸水膨胀，浸泡液加热(60℃100min)搅拌熔融，过滤保温、过滤液脱泡、保温静置，即得囊壳用胶液。
囊壳胶液和囊化液经旋转膜法制丸机制丸，得到湿丸，然后经50℃干燥成干丸，经打光即得成品，制得成品30000粒“纳贝牌清知源软胶囊”，每粒胶囊的重量为500mg。其中每粒含有白藜芦醇18.76mg，茶多酚9.62mg。
权利要求
1.一种保健食品软胶囊，其特征在于该保健食品软胶囊包括按重量百分比的下列组份组成每粒胶囊的重量为300-500mg，其中每粒白藜芦醇∶茶多酚＝(6.0-20.0)克∶(6.0-20.0)克。
2.一种保健食品软胶囊的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤1)葡萄籽、皮提取物葡萄籽、皮经纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液，浓缩液经过硅胶柱层析，洗脱液洗脱，浓缩60-70℃、30分钟以上至波美度15°，喷雾干燥≥180℃，瞬间灭菌，辐照消毒，提取物成品，装入无菌袋；2)茶多酚绿茶经热水浸提，浸体液离心、浓缩，浓缩液经硅胶柱分离，水、醇分别洗脱，分段收集洗脱液，回收乙醇、浓缩，浓缩液经喷雾干燥≥180℃，瞬间灭菌，辐照消毒，即得茶多酚，装入无菌袋；3)食用油采用食用级葵花籽油；4)囊壳胶液配制明胶经纯净水浸泡吸水膨胀，浸泡液加热(60℃ 100min)搅拌熔融，过滤、保温，滤液脱泡、保温静置，即得囊壳用胶液；5)囊化液配制葡萄皮、籽提取物白藜芦醇含量≥30％∶茶多酚含量≥30％∶食用油＝10-20∶10-20∶280-460的比例混合，混合液加热50℃ 30min，再进行过滤、静置消泡，即为囊化液；6)制丸囊壳胶液和囊化液，经旋转膜法制丸机制丸，得到湿丸，经50℃干燥成干丸，经打光即得成品，再检验包装。
全文摘要
本发明属于保健食品领域。本发明提供了一种含有白藜芦醇和茶多酚的保健食品软胶囊(纳贝牌清知源软胶囊)。本发明以葡萄皮、籽提取物(白藜芦醇)与茶多酚为活性成分研制的软胶囊，有显著调节血脂和延缓衰老功能作用。本发明提供了制备方法。
文档编号A23L1/29GK1559290SQ20041001641
公开日2005年1月5日 申请日期2004年2月18日 优先权日2004年2月18日
发明者尉亚辉, 栾龙, 李小平, 姜涛 申请人:上海纳贝生物技术有限责任公司