专利名称：新的细胞及其在制备天麻素中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的来自植物的细胞，其在制备天麻素中的用途及制备天麻素的方法。进一步讲，本发明的植物细胞来自茄科曼陀罗属，尤其是白花曼陀罗和紫花曼陀罗。
背景技术：
天麻素(对羟基甲基苯-β-O-吡喃葡糖甙)是天麻的主要活性成分，具有镇静、抗炎、抗惊厥、镇痛及增强机体免疫功能作用。天麻素现已通过化学合成制备且人工合成的天麻素具有与天然来源的天麻素相同的生物或药理活性。但现有的化合合成天麻素工艺存在着制备成本高，所用原料易燃，环境易受污染，经济效益差等缺陷。因此开发新的经济、安全、无污染且高效的天麻素制备方法是十分必要的。戴均贵等(2001，2002)研究了桔梗和长春花悬浮培养对天麻素的生物转化，其利用培养液中的生物酶去除天麻素分子结构中的葡萄糖基，将天麻素转化为对羟基苯甲醇，然后再化学合成天麻素。
发明内容
本发明的目的是开发新的合成天麻素方法。本发明经研究现已出人意料地发现通过对茄科曼陀罗属中的白花曼陀罗和紫花曼陀罗进行细胞水平上的选择性培养，得到了能将对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇直接有效转化为天麻素的高活性细胞(株)，该高活性细胞(株)保藏在中国微生素菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.1122和CGMCC No.1123。
因此，本发明第一方面涉及细胞(株)，其保藏号为CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123。
本发明再一方面涉及细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123在制备天麻素中的用途。
本发明再一方面涉及制备天麻素的方法，其包括在液体培养基存在下，将细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123与对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇接触。
根据本发明，本发明中所述的液体培养基可是对本发明细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123活性无影响的任何液体培养基，其包括但不限于LS液体培养基，等。
根据本发明，在用本发明细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCCNo.1123制备天麻素过程中，温度通常为环境温度，如20-25℃。在天麻素用生成后，可用能溶解天麻素有机溶剂或有机溶剂与水的混合物提取转化液中的天麻素，然后用色谱法，如硅胶柱层析，高压液相色谱，大孔树脂等对提取液中天麻素进行进一步分离。其中作用有机溶剂包括但不限于直链或支链C1-6烷基醇，丙酮，二氯甲烷，氯仿，乙腈等；C1-6烷基醇举例讲有甲醇，乙醇，丙醇，正丁醇等。分离后的天麻素，可进行重结晶。
根据本发明，在用细胞(株)(CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123)制备天麻素过程中，可先将液体培养基如LS与细胞(株)(CGMCCNo.1122和/或CGMCC No.1123)混合并在摇床中旋转4-5天，摇床转速为100-120转/分钟，然后再加入对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇；或者将液体培养基与细胞(株)(CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123)及对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇同时在摇床中混合并旋转，转速可为100-120转/分钟。但以上这些因素如原料的混合顺序，摇床的转速，温度，提取方式等对用细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123能否将对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇转化为天麻素是可选择或变化的。
根据本发明，本发明中所用原料如对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇或液体培养基LS都是已知的，并可按本领域已知方法制备或可从市场上买到。
下面的实施例用来进一步详细描述本发明，但其不意味着本发明仅限于此。
实施例1.天麻素的制备在250ml三角瓶中加入100ml LS液体培养基和15g细胞(株)(CGMCC No.1122)，再加入70.00mg对羟基苯甲醛于室温在摇床旋转培养12天，转速100-120转/分钟。用正丁醇提取转化液，然后浓缩正丁醇提取液，浓缩后残余物在硅胶柱层析上层析，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)洗脱，浓缩洗脱液，得天麻素粗品，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)重结晶，得天麻素56.66mg，产率80.95％，熔点154-156℃。
实施例2.天麻素的制备在250ml三角瓶中加入100ml LS液体培养基和15g细胞(株)(CGMCC No.1122)，于室温在摇床中旋转4-5天，转速100-120转/分钟，然后再加入30.00mg对羟基苯甲醛于室温在摇床旋转培养10天，转速100-120转/分钟。用正丁醇提取转化液，然后浓缩正丁醇提取液，浓缩后残余物在硅胶柱层析上层析，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)洗脱，浓缩洗脱液，得天麻素粗品，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)重结晶，得天麻素24.89mg，产率82.96％，熔点154-156℃。
实施例3.天麻素的制备在250ml三角瓶中加入100ml LS液体培养基和10g细胞(株)(CGMCC No.1123)，于室温在摇床中旋转4-5天，转速100-120转/分钟，然后再加入30.00mg对羟基苯甲醛于室温在摇床旋转培养10天，转速100-120转/分钟。用正丁醇提取转化液，然后浓缩正丁醇提取液，浓缩后残余物在硅胶柱层析上层析，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)洗脱，浓缩洗脱液，得天麻素粗品，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)重结晶，得天麻素25.80mg，产率86.00％，熔点154-156℃。
实施例4.天麻素制备用对羟基苯甲醇为原料。
在500ml三角瓶中加入300ml LS液体培养基和100g细胞(株)(CGMCC No.1123)，于室温在摇床中旋转4-5天，转速100-120转/分钟，然后再加入40.00mg对羟基苯甲醛于室温在摇床旋转培养10天，转速100-120转/分钟。用正丁醇提取转化液，然后浓缩正丁醇提取液，浓缩后残余物在硅胶柱层析上层析，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)洗脱，浓缩洗脱液，得天麻素粗品，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)重结晶，得天麻素30.00mg，产率75.00％，熔点154-156℃。
实施例5.天麻素制备用对羟基苯甲醇为原料。
在2000ml三角瓶中加入1700ml LS液体培养基和350g细胞(株)(CGMCC No.1123)，于室温在摇床中旋转4-5天，转速100-120转/分钟，然后再加入900.00mg对羟基苯甲醛于室温在摇床旋转培养10天，转速100-120转/分钟。用正丁醇提取转化液，然后浓缩正丁醇提取液，浓缩后残余物在硅胶柱层析上层析，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)洗脱，浓缩洗脱液，得天麻素粗品，用三氯甲烷∶甲醇(9∶1，v/v)重结晶，得天麻素240.00mg，产率27.00％，熔点154-156℃。
权利要求
1.细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123。
2.细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123在制备天麻素中的用途。
3.天麻素的制备方法，其包括在液体培养基存在下，将细胞(株)CGMCC No.1122和/或CGMCC No.1123与对羟基苯甲醛或对羟基苯甲醇接触。
4.权利要求1的细胞(株)，其中所述细胞株来自曼陀罗属。
5.权利要求1的细胞(株)，其中所述细胞株来自白花曼陀罗或紫花曼陀罗。
6.权利要求2的用途，其中所述细胞株来自曼陀罗属。
7.权利要求2的用途，其中所述细胞株来自白花曼陀罗或紫花曼陀罗。
8.权利要求3的方法，其中液体培养基为LS。
9.权利要求3的方法，其中所述细胞株来自曼陀罗属。
10.权利要求3的方法，其中所述细胞株来自白花曼陀罗或紫花曼陀罗。
全文摘要
本发明涉及新的来自植物的细胞，其在制备天麻素中的用途及制备天麻素的方法。进一步讲，本发明的植物细胞来自茄科曼陀罗属，尤其是白花曼陀罗和紫花曼陀罗。
文档编号C12P19/00GK1676601SQ200410029828
公开日2005年10月5日 申请日期2004年3月29日 优先权日2004年3月29日
发明者龚加顺 申请人:昆明制药集团股份有限公司