专利名称：一种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法
技术领域：
本发明属于生物农业技术领域生物防治剂范畴，主要是一种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法。
背景技术：
蔬菜、粮食和其他经济农作物为广大消费者每天不可缺少的农产品。这些农产品的食品安全牵涉到千家万户人民大众的健康和安全。目前使用于蔬菜，粮食和经济农作物病虫害防治的农药仍然以化学农药为主。化学农药的使用面临如下挑战-高毒性进入食物生产链，影响人、畜的食品安全；-对使用高毒性化学农药的农民的健康造成危害；-残留严重进入地下水，影响水质、土壤，影响产品出口；-产生抗药性病虫害产生对药物的耐药性；-国际和国内已经禁止使用一大批化学农药，并在考虑禁止更多的化学农药的使用；-消费者对使用化学农药越来越持反对的态度。
鉴于上述原因，植物病虫害的生物防治方法，特别对于生产有机(农产品)食品和绿色食品，越来越受到青睐，越来越有发展的迫切性。在欧洲发达国家例如荷兰、瑞典和丹麦，曾经决心在10年的时间内把化学农药的用量降低50％。要达到这样的目标，不加大力气研究开发生物农药是不可能的。因此，从上一世纪80年代起，已经有相当数量的生物农药在欧洲实现了实验室规模的成功开发，例如针对农作物常见的虫害如蚜虫、白粉虱、蓟马、根结线虫和疫病等病虫害的微生物源农药(来源于轮枝霉菌)。
但是，由于这些生物农药都是以霉菌作为生产出发菌种(拮抗微生物)，以霉菌活性孢子作为生物杀虫剂的主要有效成分，要使生物农药能够低成本经济有效地大规模生产，必须要有适当的生物发酵技术和设备。另外，固态生物发酵往往比流行的液体深层发酵劳动力大，因此在劳动力日益昂贵的欧洲几乎没有竞争的能力。
相反，在我国已经有相当悠久的利用固态生物发酵方法的传统，技术和设备。加上广泛的廉价生产原料(一般都为农产品废弃物或副产品)和劳动力资源，使得在我国大规模生产这类生物农药成为可能。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述不足，而提供一种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，用此方法生产的生物防治剂针对的主要应用对象包括农作物的虫害例如蚜虫、白粉虱、蓟马、根结线虫；针对的病害主要为疫病(例如水稻纹枯病和土豆疫病等)。
本发明解决其技术问题采用的技术方案。这种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，用从自然界筛选得到的或者公共菌种保藏机构(荷兰CBS菌种保藏中心)能够商业化提供的我国主要农作物常见病虫害的拮抗微生物轮枝霉菌作为出发菌种，用微生物固态发酵方法，制备出含有霉菌孢子活体的农作物生物防治剂。
本发明所述的固态发酵是在天然发酵培养基上进行的固态发酵，其中天然培养基是麦麸、稻糠、豆粕、豆饼、秸秆或其混合物，该方法具体包括如下步骤1)、将固态发酵培养基原料与水按适当比例(30％-70％重量比，以混合物的水分活度大于0.97为准)充分混合后，于121℃高温蒸气灭菌40分钟，冷却备用；2)、接入事先培养获得的轮枝霉菌孢子悬浮液，在15-30℃范围内，相对湿度为90-97％条件下发酵6-22天；3)、将发酵结束后的混合物直接作为粗产品在冷藏或室温条件下保存，即为生物防治剂粗产品；4)、待需要应用时直接用冷水萃取获得孢子悬浮液作为生物防治剂使用，粗产品与水的重量比范围为1比4至1比8，然后经冷冻干燥工序，获得孢子浓缩液或孢子干粉作为产品。
本发明所述的固态发酵是用惰性固体载体吸附液体培养基进行的固态发酵，其中惰性固体载体为甘蔗渣、玉米芯、稻糠或有机泡沫材料或者无机吸附介质。该方法具体包括如下步骤1)、按固体惰性载体与液体培养基的重量比例为9比1至1比1的范围内，与上述液体深层发酵使用的培养基混合后在121℃高温蒸气灭菌40分钟，冷却备用；2)、接事先培养获得的轮枝霉菌孢子悬浮液或种子液入上述已灭菌冷却的惰性载体培养基混合物，在15-30℃范围内，相对湿度为90-97％条件下发酵6-12天；3)、将粗产品经过萃取，干燥工序，获得孢子浓缩液或孢子干粉作为产品。
其中所述的吸附液体培养基与液体深层发酵所使用的培养基是葡萄糖100克/升，蛋白胨50克/升，酵母浸出汁20克/升，磷酸氢二钾5克/升，硫酸镁2克/升。
本发明有益的效果1、应用天然拮抗微生物作为农作物天敌，农作物生物防治剂具有选择性、专一性地杀灭目标病虫害，对人、动物和生态系统其他动植物没有伤害，是一种天然、高效、安全、无污染的生物农药系列产品。
2、利用微生物生物发酵的方法生产我国农作物主要病虫害的生物防治剂。生产过程不用或者极少使用化学物质，有利于环境和生态保护。
3、使用原料为天然廉价的农产品废弃物或者副产物，来源丰富。
4、工艺简单；产品保质期长。
5、利用惰性固体载体进行固态发酵，载体可循环使用。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1天然培养基固态发酵生产轮枝霉菌生物农药蜡蚧轮枝霉菌(Verticillium lecanii)在燕麦琼脂培养基上于25℃下培养7-12天，制成孢子悬浮液备用。麦麸与水按照6比4的重量比例充分混合后于121℃高温蒸气灭菌40分钟。冷却后按照1％的比例接入上述孢子悬浮液，并与麦麸充分搅拌混合。接种后的混合物于25-28℃下培养6-22天，根据每克麦麸(干重)产厚壁孢子达到1百万个作为发酵结束的判别准则。发酵产品可在室温下保存3个月备用。在施药前，发酵产物与4倍的自来水水充分混合萃取，获得厚壁孢子萃取液，萃取液可直接作为生物农药使用。农田杀虫试验在受到蚜虫侵害的种植蔬菜大棚中按照每平方米蔬菜叶面喷洒107霉菌活体孢子施药。在施药后三天内，虫害杀灭率达到85％以上。
实施例2惰性载体吸附培养基固态发酵生产轮枝霉菌生物农药取稻草作为固体发酵的惰性载体，液体发酵培养基的成分(克/升)，葡萄糖100、蛋白胨50、酵母浸出汁20、磷酸氢二钾5、硫酸镁2。稻草与液体培养基的比例为7比3。混合的稻草充分吸附了液体培养基，在121℃下高温蒸气灭菌40分钟。冷却后的稻草培养液混合物接入按照实施例1同样方法事先培养制备的轮枝霉菌(Verticillium lecanii)孢子悬浮液。在25℃下培养7-12天，以每克培养基(干重)产孢子达到107时作为判别发酵结束的依据。发酵产物保存和萃取方法同实施例1。农田杀虫试验在受到蚜虫侵害的种植蔬菜大棚中按照每平方米蔬菜叶面喷洒107霉菌活体孢子施药。在施药后三天内，虫害杀灭率达到85％以上。
权利要求
1.一种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于是以轮枝霉菌为生产出发菌种，用微生物固态发酵方法，制备出含有霉菌孢子活体的农作物生物防治剂。
2.根据权利要求1所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于所述的固态发酵是在天然发酵培养基上进行的固态发酵，其中天然培养基是麦麸、稻糠、豆粕、豆饼、秸秆或其混合物。
3.根据权利要求2所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于该方法具体包括如下步骤1)、将固态发酵培养基原料与水按适当重量比例(水分为30％-70％，以混合物的水分活度大于0.97为准)充分混合后，于121℃高温蒸气灭菌40分钟，冷却备用；2)、接入事先培养获得的轮枝霉菌孢子悬浮液，在15-30℃范围内，相对湿度为90-97％条件下发酵6-22天；3)、将发酵结束后的混合物直接作为粗产品在冷藏或室温条件下保存，即为生物防治剂粗产品。
4.根据权利要求3所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于待需要应用时直接用冷水萃取获得孢子悬浮液作为生物防治剂使用，粗产品与萃取用水的重量比范围为1比4至1比8，然后经冷冻干燥工序，获得孢子浓缩液或孢子干粉作为产品。
5.根据权利要求1所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于所述的固态发酵是包括用惰性固体载体吸附液体培养基进行的固态发酵，其中惰性固体载体为甘蔗渣、玉米芯、稻糠或有机泡沫材料或者无机吸附介质。
6.根据权利要求5所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于该方法具体包括如下步骤1)、按固体惰性载体与液体培养基的重量比例为9比1至1比1的范围内，与上述液体深层发酵使用的培养基混合后在121℃高温蒸气灭菌40分钟，冷却备用；2)、接事先培养获得的轮枝霉菌孢子悬浮液或种子液入上述已灭菌冷却的惰性载体培养基混合物，在15-30℃范围内，相对湿度为90-97％条件下发酵6-12天；3)、将粗产品经过萃取，干燥工序，获得孢子浓缩液或孢子干粉作为产品。
7.根据权利要求6所述的轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，其特征在于所述的吸附液体培养基与液体深层发酵所使用的培养基是葡萄糖100克/升，蛋白胨50克/升，酵母浸出汁20克/升，磷酸氢二钾5克/升，硫酸镁2克/升。
全文摘要
本发明涉及一种轮枝霉菌生物防治剂的制备方法，用从自然界筛选得到的或者公共菌种保藏机构能够商业化提供的我国主要农作物常见病虫害的拮抗微生物轮枝霉菌作为出发菌种，用微生物固态发酵方法，制备出含有霉菌孢子活体的农作物生物防治剂。本发明有益的效果1.应用天然拮抗微生物作为农作物天敌，农作物生物防治剂具有选择性、专一性地杀灭目标病虫害，对人、动物和生态系统其他动植物没有伤害。2.利用微生物生物发酵的方法生产我国农作物主要病虫害的生物防治剂。生产过程不用或者极少使用化学物质，有利于环境和生态保护。3.使用原料为天然廉价的农产品废弃物或者副产物，来源丰富。4.工艺简单，产品保质期长。
文档编号C12R1/625GK1864491SQ200610052070
公开日2006年11月22日 申请日期2006年6月20日 优先权日2006年6月20日
发明者朱阳, 徐向群, 莫海珍 申请人:徐向群, 朱阳