专利名称：文冠果组培快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及到一种文冠果植物材料的组培快速繁殖方法，属于植物生物技术领域。
背景技术：
文冠果是我国特有的珍贵树种，主要分布在山西、河南、河北、宁夏、甘肃、内蒙古、辽宁等地。文冠果是木本油料作物之一，有着出油率高、油品好、降血压作用明显的特点，而且还是一种风味独特、营养丰富、味道鲜美的水果，更是一种抗旱抗寒能力强、耐瘠薄、移栽成活率高的绿化先锋树种。文冠果有极强的抗逆能力，可在低温、干旱的环境生存。在降雨量300mm以上地区均可栽植。文冠果种子含油率为30.4％；种仁含油量高达66.39％，其油份中不饱和脂肪酸含量高达94％，亚油酸占36.9％，油酸占57.16％。亚油酸是中药益寿宁的主要成份，具极好降血压作用，食用文冠果油可有效预防高血压病。果皮含糠醛12.2％，文冠果果皮是提取糠醛的最好原料，种壳可制活性炭，榨油后饼粕含蛋白质高，适口性好。国内文冠果多采用扦插繁殖方法进行种苗扩大，该方法不仅需要有大量基础苗，而且容易造成病毒积累，影响优良种苗的遗传特性，因而严重制约了油料植物文冠果在我国的大面积应用推广。现在市场上尚无利用组培技术大量工业化繁育文冠果的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是利用组培技术在短期内形成大量优良试管苗，为木本油料植物文冠果进行规模化、工厂化生产提供有效的技术途径。
本发明的技术方案是这样实现的这种文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于它包括如下步骤A、植物材料消毒取文冠果的茎尖或茎段，用流水冲洗4-24小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清；B、启动培养将冲洗至清的材料取0.3-0.5厘米，接种到包括如下比例的启动培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加水解乳蛋白200毫克/升，6-苄基嘌呤2-3毫克/升，活性炭0.5-1.0毫克/升，食用糖30-40克/升，放置22-28℃接种室，光照培养20-25天；C、增殖培养将培养至3厘米以上的试管苗，剪取成0.5厘米以上的茎段、茎尖，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加肌醇300-500毫克/升，水解乳蛋白300-500毫克/升，6-苄基嘌呤0.5-2.0毫克/升，食用糖30克/升，进行增殖培养，培养周期为30-40天；D、分化培养将增殖培养基中的丛生芽，以单芽的形式剪下，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加6-苄基嘌呤0.5-1毫克/升，噻苯隆0.5-2毫克/升，萘乙酸0.5-1毫克/升，水解乳蛋白500毫克/升，食用糖30-50克/升，琼脂6-7克/升，进行分化培养，培养周期20-30天；E、生根培养待试管苗长至3厘米以上，进行试管苗生根培养，剪取3厘米以上的健壮试管苗，接种到包括如下比例的生根培养基中在2368.22毫克/升的MS培养基中添加吲哚丁酸0.25-2.0毫克/升，萘乙酸0.5-3.0毫克/升，活性炭0.5-毫克/升，食用糖15-20克/升，培养周期为22-30天，根长0.5厘米左右即可移栽。
所述的文冠果组培快速繁殖方法，步骤A取文冠果的茎尖消毒，用流水冲洗4-8小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清。
所述的文冠果组培快速繁殖方法，步骤A取文冠果的茎段消毒，用流水冲洗12-24小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清。
所述的文冠果组培快速繁殖方法，步骤B启动培养培养基中还包括6-糠基嘌呤1-2毫克/升，琼脂6-7克/升。
所述的文冠果组培快速繁殖方法，步骤C增殖培养培养基中还包括萘乙酸0.5-3毫克/升，琼脂6-7克/升。
本发明的技术进步效果表现在采用植物组织培养的方法规模生产文冠果幼苗，该方法不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约育苗占地，降低生产成本。植物组织培养技术是利用细胞的全能性，采取植物体上的细胞团或一块组织，通过人为条件的控制，使这些组织形成干百万植株，并且保存了母体的全部优良性状，且遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，从而代替昂贵的进口种苗，为木本油料植物优良品种的规模化生产提供可靠的技术途径。
具体实施例方式
实施例11、取一年生文冠果植物材料的茎段，用流水冲洗12-24小时，用滤纸吸取多余水分，然后用二氯化汞0.1％常规消毒4-6分钟，无菌水冲洗至清。
2、启动培养将冲洗至清的材料取0.3-0.5厘米，接种到包括如下比例的启动培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加水解乳蛋白200毫克/升，6-苄基嘌呤2-3毫克/升，活性炭0.5-1.0毫克/升，食用糖30-40克/升，放置22-28℃接种室，光照培养20-25天；3、增殖培养将培养至3厘米以上的试管苗，剪取成0.5厘米以上的茎段、茎尖，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加肌醇300-500毫克/升，水解乳蛋白300-500毫克/升，6-苄基嘌呤0.5-2.0毫克/升，食用糖30克/升，进行增殖培养，培养周期为30-40天，待试管苗长至3-5厘米时，即可进行试管生根培养；4、分化培养将增殖培养基中的丛生芽，以单芽的形式剪下，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加6-苄基嘌呤0.5-1毫克/升，噻苯隆0.5-2毫克/升，萘乙酸0.5-1毫克/升，水解乳蛋白500毫克/升，食用糖30-50克/升，琼脂6-7克/升，进行分化培养，培养周期20-30天；生长一周左右基部膨大，20天以上分化为3-8个芽，30天以上生长为健壮的试管苗；
5、生根培养待试管苗长至3厘米以上，进行试管苗生根培养，剪取3厘米以上的健壮试管苗，接种到包括如下比例的生根培养基中在2368.22毫克/升的MS培养基中添加吲哚丁酸0.25-2.0毫克/升，萘乙酸0.5-3.0毫克/升，活性炭0.5-毫克/升，食用糖15-20克/升，培养周期为22-30天，培养一周以上基部膨大，并逐渐出现乳白色。培养22天左右既可生根，生根率90％以上，根数3-5条，根长0.5厘米左右即可移栽，在正常管理条件下，移栽成活率达90％以上实施例21、取植物材料文冠果的茎尖，用流水冲洗4-8小时，用滤纸吸取多余水分，然后用二氯化汞0.1％消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清。
2、启动培养将冲洗至清的材料，剪取取0.3-0.5厘米，接种到包括如下比例的启动培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加水解乳蛋白200毫克/升，6-糠基嘌呤1-2毫克/升，6-苄基嘌呤2-3毫克/升，活性炭0.5-1克/升，食用糖15-50克/升，琼脂6-7克/升，放置22-28℃接种室，光照培养20-25天，培养的文冠果材料90％基部膨大，长出0.2-1cm愈伤组织。
3、增殖培养将培养至3厘米以上的试管苗，剪取成0.5厘米以上的茎段、茎尖，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加肌醇300-500毫克/升，水解乳蛋白300-500毫克/升，6-苄基嘌呤0.5-2.0毫克/升，食用糖30克/升，萘乙酸0.5-3毫克/升，肌醇300毫克/升，琼脂6-7克/升，接种5天以后芽开始萌动，15天左右芽分化数达到4-6个，培养周期为30-40天，增值达到高峰，一般分化数5-8个；4、分化壮苗培养同实施例1；5、生根培养同实施例1.
采用本发明的技术方案，采用的文冠果植物材料少，试管苗的单芽增殖系数达8个以上，一年可继代8-10代。可利用较小的空间，生产比较多的优良种苗，在50平方米的培养室内，年产试管苗能力达500万株以上。
本发明列举的实施例旨在更进一步地阐明文冠果组培快速繁殖方法，不对本发明的范围构成任何限制。
权利要求
1.文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于它包括如下步骤A、植物材料消毒取文冠果的茎尖或茎段，用流水冲洗4-24小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清；B、启动培养将冲洗至清的材料取0.3-0.5厘米，接种到包括如下比例的启动培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加水解乳蛋白200毫克/升，6-苄基嘌呤2-3毫克/升，活性炭0.5-1.0毫克/升，食用糖30-40克/升，放置22-28℃接种室，光照培养20-25天；C、增殖培养将培养至3厘米以上的试管苗，剪取成0.5厘米以上的茎段、茎尖，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加肌醇300-500毫克/升，水解乳蛋白300-500毫克/升，6-苄基嘌呤0.5-2.0毫克/升，食用糖30克/升，进行增殖培养，培养周期为30-40天；D、分化培养将增殖培养基中的丛生芽，以单芽的形式剪下，接种到包括如下比例的增殖培养基中在4736.43毫克/升的MS基本培养基中添加6-苄基嘌呤0.5-1毫克/升，噻苯隆0.5-2毫克/升，萘乙酸0.5-1毫克/升，水解乳蛋白500毫克/升，食用糖30-50克/升，琼脂6-7克/升，进行分化培养，培养周期20-30天；E、生根培养待试管苗长至3厘米以上，进行试管苗生根培养，剪取3厘米以上的健壮试管苗，接种到包括如下比例的生根培养基中在2368.22毫克/升的MS培养基中添加吲哚丁酸0.25-2.0毫克/升，萘乙酸0.5-3.0毫克/升，活性炭0.5-毫克/升，食用糖15-20克/升，培养周期为22-30天，根长0.5厘米左右即可移栽。
2.根据权利要求1所述的文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于步骤A取文冠果的茎尖消毒，用流水冲洗4-8小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清。
3.根据权利要求1所述的文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于步骤A取文冠果的茎段消毒，用流水冲洗12-24小时，用滤纸吸取多余水分，然后用0.1％二氯化汞消毒3-5分钟，无菌水冲洗至清。
4.根据权利要求1所述的文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于步骤B启动培养培养基中还包括6-糠基嘌呤1-2毫克/升，琼脂6-7克/升。
5.根据权利要求1所述的文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于步骤C增殖培养培养基中还包括萘乙酸0.5-3毫克/升，琼脂6-7克/升。
全文摘要
本发明提供一种利用组培技术对木本油料植物文冠果组培快速繁殖方法，其特征在于它包括如下步骤A.植物材料消毒；B.启动培养；C.增殖培养；D.分化培养；E.生根培养几个步骤。技术进步效果表现在采用植物组织培养的方法规模生产文冠果幼苗，该方法不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约育苗占地，降低生产成本。植物组织培养技术是利用细胞的全能性，采取植物体上的细胞团或一块组织，通过人为条件的控制，使这些组织形成千百万植株，并且保存了母体的全部优良性状，且遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，从而代替昂贵的进口种苗，为木本油料植物优良品种的规模化生产提供可靠的技术途径。
文档编号C12N5/04GK101032226SQ200710061710
公开日2007年9月12日 申请日期2007年4月18日 优先权日2007年4月18日
发明者王玉珍, 李霞, 张弛 申请人:中国科学院遗传与发育生物学研究所