专利名称：一种制备食用菌胶体菌种的方法
技术领域：
本发明涉及制备食用菌胶体菌种的方法。
背景枝术食用菌菌种是食用菌生产的技术关键，目前通常是采用固体菌种，即先将食用菌的斜面菌种取一小块，接入固体培养基为第一次培养，也称原种培养，接下去再取出培养成熟的原菌种小块，接入新的培养基中，进行下一次培养至成熟，也称一级种；一级种可以用于作生产栽培种，也可以再次接种进行二级或三级培养，至成熟后用于生产；最后成熟的菌种，对开始的斜面菌种而言，已是至少转接了三至四次。但每一级固体培养至成熟，至少要28天左右。固体菌种应用于食用菌生产至今已有近几十年历史，其优点在于，制作方便，技术要求难度小，只要会栽培食用菌几乎都能制作菌种。固体食用菌种的缺点在于1、固体菌种要三级、四级地代代转接，制种时间长，一转就是半年，菌种培养需占用大量空间；2、生产过程易污染，管理过程怕老化，接种过程烟熏火烧，繁琐复杂，劳动强度大；3、固体菌种生产质量低，菌丝生长参差不齐，即使是同一菌种袋(或瓶)内，上面的菌丝已经老化，而下面的还没长好，菌袋(或瓶)上下之间，菌丝菌龄相差悬殊，导致接种后，出菇时间难以集中，管理费用高；4、作坊式的固体菌种生产人人都会做，自繁自种随处可见，由于转代次数过多，菌种纯度与活力严重下降，生产栽培萌发迟缓，导致污染居高不下，种植大户出现大面积污染的地区数不胜数。5、固体菌种简单易做，同时产品质量不一，影响企业加工与产品出口。实践证明，固体菌种已是非常落后的生产技术，但目前为止，我国食用菌生产过程中，固体菌种仍然占居主导地位。随着科学技术的进步，食用菌生产将向着菌种高纯度，生产标准化、工厂化、周年化方向发展，食用菌效益要有大幅度提高，而固体菌种无疑将成为食用菌规模化发展的限制因素。
采用液体菌种可以份服上述难题，它的最大好处是，通过工厂化发酵制种，菌龄一致，菌种标准化程度高，质量好，用于生产发菌快、出菇集中，可省去二级、三级等固体菌种的制作烦琐，因此具有固体菌种所不可比拟的发展优势。早在上一世纪70年代，我国就有人尝试用液体菌种生产灵芝菌并取得成功，此后不断有人开发这一技术在金针菇以及其它食用菌应用的实例，至今已有30余年。但该技术始终未能得到普遍推广，主要原因除价格昂贵外，该技术目前还尚存有以下技术问题1、菌种生产需要有专业设备和专业技术人员，一般小厂难以实现；2、液体状态下，菌种不易保存，生产出的菌种要尽快使用。3、接种时要配有严格的无菌设备及条件，否则易污染，即推广应用的技术难度相对较高。4、由于食用菌本身的生物学特性，液体菌种产品的包装、贮藏、运输等问题仍存在许多困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种低成本，高效、高产，自动化、标准化制备食用菌胶体菌种的方法。
本发明的制备食用菌胶体菌种方法，其步骤如下1)制备固体培养基将阔叶树碎木榍、棉籽壳、玉米秸杆、稻草、玉米芯和杂草中的一种或几种混合，干燥后粉碎至20～60目，取60～85份；将麸皮、豆粕和玉米粉中的一种或几种混合，干燥后粉碎至20～60目，取10～30份；葡萄糖或蔗糖1～5份；磷酸二氢钾0.5～3份；硫酸镁0.01～1.0份；石膏粉1～3份；将以上成分混合后加水，混合物总量与水的份数比为1∶1～1.5；2)固体培养基接种将上述培养基料装于容器中，料面压实后用棉花塞封口，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.2～1.5kg，温度T＝110～120℃，保持时间t＝30～90分钟；冷却后接入少许食用菌的斜面菌种，于15～28℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种；3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯和新鲜南瓜泥中的一种或其混合物10～50份，麸皮2～10份，加水100～250份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.01～0.1份，磷酸二氢钾0.5～3份，葡萄糖或蔗糖2～3份，吸水倍数＞200～1000倍的交联型吸水材料0.1～2.0份，液体增稠剂1.0～5.0份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.2～1.5kg，温度T＝110～120℃下灭菌，保持时间t＝30～90分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶1～50份，在无菌条件下，混合成均质状，存放在除菌过滤容器内，于0～22℃下保存。
本发明中，所说的吸水倍数＞200～1000倍的交联型吸水材料可以是聚丙烯酰胺和聚乙烯醇中的一种或其混合物。所说的液体增稠剂可以是羧甲基纤维素、海藻酸盐、200～300目的滑石粉、膨润土和热电厂粉煤灰中的一种或几种混匀后的混合物。
本发明中，所说的食用菌的斜面菌种为金针菇、灵芝、猴头菇、草菇、平菇、滑菇、灰树花、杏鲍菇或黑木耳。
本发明的有益效果1.制种速度快，可现用现做，比液体发酵制种更为方便，易得，生产操作简便，制备过程中不需要发酵罐等昂贵设备，成本低，易于推广并工业化生产，有利于保证产品质量。
2.利用胶体营养液将固体菌种制成半流动状的液体菌，即胶体菌种，产品具有液体菌的优点，使用方便，发菌快，少污染，出菇集中，进而极大提高接种成活率，且易于包装运输和贮藏。
3.制备过程中，将所用的固体菌种主要成分做成20～60目细小碎末，便于胶体状态下流动，易于接种，同时通过混合均质，可以份服原有固体菌种瓶上下菌龄不一致的技术难题。
4.在胶体菌种营养液中添加了多种营养生物质和生物相容性载体，有利于减弱菌丝在液体状态下的代谢，并促进接种后菌种在培养料中萌发。
具体实施例方式
以下通过实施例进一步说明本发明。
实施例11)制备固体培养基取棉籽壳和阔叶树碎木榍混合物60份，干燥后粉碎过40目筛，取麸皮25份，干燥后粉碎过40目筛；取葡萄糖2份，磷酸二氢钾1份，硫酸镁0.5份，石膏粉1份，将以上成分混合后加70份水；2)固体培养基接种将上述培养基料装于广口瓶中，料面压实，用棉花塞封口，双层报纸与橡胶筋扎口后，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.5kg，温度T＝120℃，保持时间t＝30分钟；冷却后接入食用菌平菇P5.39(黑龙江省微生物研究所有售)斜面菌种若干小块，于18℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种。
3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯和新鲜南瓜泥混合物20份，麸皮5份，加水200份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾1份，葡萄糖2份，吸水倍数＞300倍的交联型聚丙烯酰胺吸水材料0.3份，液体增稠剂羧甲基纤维素3.0份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.5kg，温度T＝120℃下灭菌，保持时间t＝30分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶20份，在无菌条件下，混合成均质状，为平菇P5.39食用菌胶体菌种，存放在灭菌的牙膏筒内，于0℃下保存。
食用菌胶体菌种的应用例取棉籽壳69kg，玉米粉5kg，麸皮10kg，豆粕3kg，硫酸镁0.25kg，磷酸二氢钾0.6kg，石膏粉1kg，生石灰1kg，加水110kg，充分混均匀，装入170×380mm耐高温塑料培养袋中，每袋装料重1.2kg，折口后用橡胶筋扎口，灭菌冷却后用本实例制得的平菇P5.39食用菌胶体菌种接种，每支120ml牙膏筒可以连续接种10～20个培养袋。本实验接种2100袋，并用常规固体菌种作对照，成功率达98％，污染全部是袋底意外扎破所至。菌袋发满平均28天，比对照提前5～8天。生产管理与对照相同，产品质量与产量均好于对照。
实施例21)制备固体培养基取棉籽壳、玉米秸杆和玉米芯混合物75份，干燥后粉碎过30目筛，取麸皮和豆粕15份，干燥后粉碎过40目筛；取蔗糖1份，磷酸二氢钾0.5份，硫酸镁0.01份，石膏粉1.5份，将以上成分混合后加95份水；2)固体培养基接种将上述培养基料装于广口瓶中，料面压实，用棉花塞封口，双层报纸与橡胶筋扎口后，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.2kg，温度T＝110℃，保持时间t＝60分钟；冷却后接入食用菌江山白菇F21(江山农科所食用菌种场提供)斜面菌种若干小块，于22℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种。
3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯20份，麸皮3份，加水100份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.1份，磷酸二氢钾0.5份，葡萄糖2份，吸水倍数＞300倍的交联型聚乙烯醇吸水材料0.15份，液体增稠剂羧甲基纤维素和海藻酸盐混匀后的混合物5.0份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.2kg，温度T＝110℃下灭菌，保持时间t＝50分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶50份，在无菌条件下，混合成均质状，为江山白菇F21食用菌胶体菌种，存放在除菌过滤容器内，于4℃下保存。
食用菌胶体菌种的应用例取棉籽壳69kg，玉米粉5kg，麸皮10kg，豆粕3kg，硫酸镁0.25kg，磷酸二氢钾0.6kg，石膏粉1kg，生石灰1kg，加水110kg，充分混均匀，装入170×380mm耐高温塑料培养袋中，每袋装料重1.2kg，折口后用橡胶筋扎口，灭菌冷却后用本实例制得的江山白菇F21食用菌胶体菌种接种，每袋接种15ml；共接种1860袋，平均每分钟可接种20袋，用常规固体菌种作对照，提高效率近6倍，成功率达99％，不成功仅为橡胶筋断裂使袋口污染。生产管理与对照相同，产品质量与产量均好于对照。
实施例31)制备固体培养基取杂草85份，干燥后粉碎过60目筛，取麸皮10份，干燥后粉碎过40目筛；取葡萄糖5份，磷酸二氢钾3份，硫酸镁1份，石膏粉3份，将以上成分混合后加150份水；2)固体培养基接种将上述培养基料装于广口瓶中，料面压实，用棉花塞封口，双层报纸与橡胶筋扎口后，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.5kg，温度T＝120℃，保持时间t＝90分钟；冷却后接入食用菌草菇(黑龙江省微生物研究所有售)斜面菌种若干小块，于28℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种。
3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯和新鲜南瓜泥混合物50份，麸皮2份，加水250份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾1份，葡萄糖2份，吸水倍数＞500倍的交联型聚丙烯酰胺和聚乙烯醇的混合物吸水材料0.3份，液体增稠剂300目的滑石粉3.0份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.5kg，温度T＝120℃下灭菌，保持时间t＝40分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶20份，在无菌条件下，混合成均质状，为草菇食用菌胶体菌种，存放在除菌过滤容器内，于22℃下保存。
食用菌胶体菌种的应用例取稻草70kg，玉米粉4kg，麸皮20kg，豆粕5kg，硫酸镁0.5kg，磷酸二氢钾1kg，石膏粉1.1kg，生石灰1.1kg，加水130kg，充分混均匀，装入180×420mm耐高温塑料培养袋中，每袋装料重2kg，折口后用橡胶筋扎口，灭菌冷却后用本实例制得的草菇食用菌胶体菌种接种，每袋接种20ml；共接种1600袋，平均每分钟可接种20袋，用常规固体菌种作对照，提高效率近6倍，成功率达98％，不成功仅为橡胶筋断裂使袋口污染。生产管理与对照相同，产品质量与产量均好于对照。
实施例41)制备固体培养基取棉籽壳和阔叶树碎木榍混合物75份，干燥后粉碎过30目筛，取麸皮10份，豆粕5份，玉米粉5份，干燥后粉碎过30目筛；取葡萄糖2份，磷酸二氢钾2份，硫酸镁0.2份，石膏粉1份，将以上成分混合后加120份水；2)固体培养基接种将上述培养基料装于广口瓶中，料面压实，用棉花塞封口，双层报纸与橡胶筋扎口后，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.5kg，温度T＝120℃，保持时间t＝45分钟；冷却后接入食用菌灰树花(江山农业科学研究所有售)斜面菌种若干小块，于23℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种。
3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯和新鲜南瓜泥混合物30份，麸皮5份，加水150份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾1份，蔗糖2份，吸水倍数＞200倍的聚乙烯醇的混合物吸水材料0.5份，液体增稠剂用海藻酸盐1.5份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.2kg，温度T＝110℃下灭菌，保持时间t＝60分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶30份，在无菌条件下，混合成均质状，为灰树花食用菌胶体菌种，存放在除菌过滤容器内，于22℃下保存。
食用菌胶体菌种的应用例取棉籽壳60kg，碎木榍15kg，玉米粉13kg，麸皮5kg，豆粕3kg，硫酸镁0.5kg，磷酸二氢钾1kg，石膏粉1.5kg，生石灰1.kg，加水130kg，充分混均匀，装入180×420mm耐高温塑料培养袋中，每袋装料重2kg，折口后用橡胶筋扎口，灭菌冷却后用本实例制得的灰树花食用菌胶体菌种接种，每袋接种15ml；共接种2000袋，平均每分钟可接种20袋，用常规固体菌种作对照，提高效率近6倍，成功率达98.6％。生产管理与对照相同，产品质量与产量均好于对照。
权利要求
1.一种制备食用菌胶体菌种的方法，其特征是包括以下步骤1)制备固体培养基将阔叶树碎木榍、棉籽壳、玉米秸杆、稻草、玉米芯和杂草中的一种或几种混合，干燥后粉碎至20～60目，取60～85份；将麸皮、豆粕和玉米粉中的一种或几种混合，干燥后粉碎至20～60目，取10～30份；葡萄糖或蔗糖1～5份；磷酸二氢钾0.5～3份；硫酸镁0.01～1.0份；石膏粉1～3份；将以上成分混合后加水，混合物总量与水的份数比为1∶1～1.5；2)固体培养基接种将上述培养基料装于容器中，料面压实后用棉花塞封口，进行灭菌处理，灭菌条件为蒸汽压力Pa＝1.2～1.5kg，温度T＝110～120℃，保持时间t＝30～90分钟；冷却后接入少许食用菌的斜面菌种，于15～28℃条件下培养至菌丝发白至容器底部，为固体菌种；3)制备胶体营养液取去皮切块马铃薯和新鲜南瓜泥中的一种或其混合物10～50份，麸皮2～10份，加水100～250份，煮沸后过滤取液体，加入硫酸镁0.01～0.1份，磷酸二氢钾0.5～3份，葡萄糖或蔗糖2～3份，吸水倍数＞200～1000倍的交联型吸水材料0.1～2.0份，液体增稠剂1.0～5.0份，混合后装于容器中封口，在蒸汽压力Pa＝1.2～1.5kg，温度T＝110～120℃下灭菌，保持时间t＝30～90分钟；冷却后备用；4)制备胶体菌种取固体菌种∶胶体营养液＝1∶1～50份，在无菌条件下，混合成均质状，存放在除菌过滤容器内，于0～22℃下保存。
2.根据权利要求1所述的制备食用菌胶体菌种的方法，其特征是吸水倍数＞200～1000倍的交联型吸水材料为聚丙烯酰胺和聚乙烯醇中的一种或其混合物。
3.根据权利要求1所述的制备食用菌胶体菌种的方法，其特征是所说的液体增稠剂为羧甲基纤维素、海藻酸盐、200～300目的滑石粉、膨润土和热电厂粉煤灰中的一种或几种混匀后的混合物。
4.根据权利要求1所述的制备食用菌胶体菌种的方法，其特征是所说的食用菌的斜面菌种为金针菇、灵芝、猴头菇、草菇、平菇、滑菇、灰树花、杏鲍菇或黑木耳。
全文摘要
本发明公开了制备食用菌胶体菌种的方法。利用食用菌固体发酵成熟后，经过添加具有生物相容性的菌体营养保护剂和液体增稠剂均质混合成一种胶体化的半流动液体菌。本发明方法制种速度快，操作简便，成本低。制得的胶体菌种具有液体菌的优点，使用方便，发菌快，少污染，出菇集中，接种成活率高，且易于包装运输和贮藏。从根本上解决了长期以来食用菌液体种不易贮藏、不便运输和不利于推广应用技术难题，对实现食用菌工厂自动化、标准化返季节种植和连接分散种植户为集约化、高效率优质生产及管理均带来重大突破。
文档编号C12N1/14GK101066029SQ20071006917
公开日2007年11月7日 申请日期2007年6月5日 优先权日2007年6月5日
发明者刘志强, 藏蕾, 刘晓晔 申请人:浙江大学