放射性核素⁹⁹锝^m标记嗜酸乳杆菌的制备方法

专利名称：放射性核素⁹⁹锝^m标记嗜酸乳杆菌的制备方法
技术领域：
本发明是釆用放射性核素"锝m("Tcm)标记嗜酸乳杆菌(Lactobacillus
Acidophilus)的一种放射性核素"锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法。涉及医学的
配制品和配制药品技术领域。
背景技术：
在医学领域，广泛应用放射性药物示踪技术诊断、治疗、研究疾病。目前应
用的放射性核素99锝"X"Tcm)标记的药物从制备角度可分为三类
1.'"锝，"TO络合物 2 "锝m("T。标记蛋白 3.99锝，"Tc，标记
胶体[实验核医学与核药学(第五章放射性药物、第二节放射性锝标记药物)第
100页]。放射性药物基本都是通过静脉给药，也有釆用直接口服法的，而直接口
服法又有被胃黏膜部分吸收的缺点，并且所有细菌的检查和研究均在体外进行。 因此，研究和检测的效果欠佳。

发明内容
本发明的目的是发明一种适合人和动物在生理状态下、无创、体内研究和检
测胃肠道放射性药物的放射性核素"锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法。
本发明的技术方案是
在超净台内，用MRS培养基，在37t厌氧条件下，将真空冷冻干燥嗜酸乳杆 菌种复苏，经两次传代后，再用LbS选择性培养基37。C厌氧培养多天；收集嗜酸 乳杆菌；取盐水，注入PYP瓶内，摇匀，将瓶内液体取出，再注入第二瓶PYP中， 根据需要可一直注入到第五瓶，甚至更多瓶中；
将最终的液体取出，注入到盛细菌的瓶内，摇匀；
将盛细菌瓶放置于培养箱或温箱中孵育；
将瓶取出，用盐水冲洗，离心机离心；再冲洗，再离心多次；
弃上清液，加入新鲜至多天内淋洗的"T,0-4液0.1~1000mci或更大的放射 性活度到盛沉淀的乳杆菌瓶内；放置于培养箱或温箱中孵育；
重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后，即 可使用。具体是:在超净台内，用MRS培养基，在37t厌氧条件下，将真空冷冻干燥 嗜酸乳杆菌种复苏，经两次传代后，再用LbS选择性培养基37"C厌氧培养多天; 收集嗜酸乳杆菌，取pH0.1~6.0盐水0.5~5.0ml，注入PYP瓶内，摇匀，将瓶内液 体取出，再注入第二瓶PYP中，根据需要可一直注入到第五瓶，甚至更多瓶中；
将最终的液体取出，注入到盛细菌的瓶内，摇匀；
将盛细菌瓶放置于rC 65'C的培养箱或温箱中孵育lmin 60min;
将瓶取出，用pH0.1 6.0盐水0.5 5.0ml冲洗，离心机以100~4500转/min离 心0.1min 20min;再冲洗，再离心多次；
弃上清液，加入新鲜至多天内淋洗的99Tcm04液0.1~1 OOOmci或更大的放射性 活度到盛沉淀的乳杆菌瓶内，总体积1 10ml或更大;放置于1C^65CG的培养箱或 温箱中孵育lmin 60min;
重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后，即 可使用。
其中所釆用的真空冷冻干燥嗜酸乳杆菌种，其菌种编号为1.1845，保藏编号 为ADGA-A,由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)提供。
所采用的MRS培养基按CGMCC提供的具有以下组成在总重量为100中，蛋白 胨占O. 93%，牛肉提取物占O. 93%，酵母提取物占0.465%,葡萄糖占0.465%,乙 酸钠占0. 465%,杼檬酸二胺占0. 186°/。， Tween 80占0. 093%, K2HP04占0.186%, MgS04 '7H20占0. 186%，MnS04 'H20占0. 00465°/。， CaC03占1. 86°/。，琼脂占1. 395%， 蒸馏水占92.57%, pH6. 8。
乳杆菌选择性培养基(LbS)按下述配置方法(蛋白胨0. 93%,肉膏0. 93%， 酵母浸膏0. 463%,葡萄糖1. 86%，吐温80 0. 093%， K2HP04 0. 186%,醋酸钠0. 463%， 枸橼酸三氨0. 186%, MgS04 . 7H20 0. 0186%, MnS04 H20 0. 00463%，琼脂2. 31%， 精制水92.57%;加热溶解后，调pH6.0-6.5, 115°C 20分钟灭菌)配置。 亚锡焦磷酸钠(PYP)由北京师宏药物研究中心提供。 其中PYP瓶内有Na4P207 2H20 lOmg和SnC12 2H20 1. Omg。 其中收集嗜酸乳杆菌的方法是银饵采集；从培养基中收集细菌数为1O1 1020个。
到目前为止，还未有"Tc^标记乳杆菌的方法，检查和研究细菌均在体外进 行。本发明与已有技术相比所具有的有益效果是本发明能在体内的原有(生理或 病理)状态下进行，能从形态、功能和免疫等多方面观察胃肠道的影像；且可直接口服，具有牢固、不宜脱落的优点，避免了以往锝液直接口服法被胃黏膜部分 吸收的缺点，并且示踪清晰，诊断准确。
具体实施例方式
实施例.以本例来说明本发明的具体实施方式
并对本发明作进一步的说明。本 例是在体内的原有(生理或病理)状态下进行，并从形态、功能和免疫等多方面 观察胃肠道影像的放射性核素"锝"X"Tc，标记嗜酸乳杆菌的制备方法。
具体是
所采用的真空冷冻干燥嗜酸乳杆菌种，其菌种编号为1.1845，保藏编号为 ADGA-A，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)提供；
所釆用的MRS培养基按CGMCC提供的具有以下组成在总重量为100中，蛋白 胨占O. 93%,牛肉提取物占O. 93%,酵母提取物占0.465%，葡萄糖占0.465%,乙 酸钠占0. 465°/。，梓檬酸二胺占0. 186%, Tween 80占0. 093%, K2HP04占0.画， MgS04 -7H20占0. 186°/。，MnS04 'H20占0. 00465%， CaC03占1. 86%,琼脂占1. 395%, 蒸馏水占92. 57%, pH6. 8;
乳杆菌选择性培养基(LbS)按下述配置方法(蛋白胨0. 93%，肉膏0. 93%， 酵母浸膏0. 463%,葡萄糖1. 86%,吐温80 0. 093%, K2HP04 0.画,醋酸钠0. 463%， 枸橼酸三氨0. 186%, MgS04 . 7H20 0. 0劇，MnS04 H20 0. 00463%,琼脂2. 31%, 精制水92.57%;加热溶解后，调pH6.0 6.5, 115°C 20分钟灭菌)配置；亚锡焦 磷酸钠(PYP)由北京师宏药物研究中心提供；
PYP瓶内有Na4P207 2H20 lOmg和SnC12 2H20 1. Omg;
在无菌情况下，用乳酸菌选择性培养基厌氧培养多天； 收集细菌，取PH l盐水2.5ml，注入PYP瓶内，摇匀，将瓶内液体取出，再 注入第二瓶PYP中，根据需要可一直注入到第多瓶； 将最终的液体取出，注入到盛细菌的瓶内，摇匀； 将盛细菌瓶放置于26'C的培养箱或温箱中孵育60min; 将瓶取出，用pHl 10盐水2. 5ml冲洗，离心机以4500转/min离心10min;
再冲洗，再离心多次；
弃上清液，加入新鲜至多天内淋洗的"Tc"^4液1000mci的放射性活度到盛 沉淀的乳杆菌瓶内，总体积10ml左右；放置于培养箱或温箱中孵育60min;
重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后，即 可使用。由本方法制备的放射性核素"锝m("Tc，标记嗜酸乳杆菌经多次临床试验，可 直接口服，具有牢固、不宜脱落的优点，避免了以往锝液直接口服法被胃黏膜部 分吸收的缺点，且示踪清晰，诊断准确。
权利要求
1.一种采用放射性核素99锝m标记嗜酸乳杆菌的放射性核素99锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征是在超净台内，用MRS培养基，在37℃厌氧条件下，将真空冷冻干燥嗜酸乳杆菌种复苏，经两次传代后，再用LbS选择性培养基37℃厌氧培养；收集嗜酸乳杆菌；取盐水，注入PYP瓶内，摇匀，将瓶内液体取出，再注入第二瓶PYP中，根据需要可一直注入到第五瓶，甚至更多瓶中；将最终的液体取出，注入到盛细菌的瓶内，摇匀；将盛细菌瓶放置于培养箱或温箱中孵育；将瓶取出，用盐水冲洗，离心机离心；再冲洗，再离心多次；弃上清液，加入新鲜至多天内淋洗的99TcmO4液1mci或更大的放射性活度到盛沉淀的乳杆菌瓶内；放置于培养箱或温箱中孵育；重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后，即成。
2. 根据权利要求1所述的放射性核素"锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法，其特征是在超净台内，用MRS培养基，在37t厌氧条件下，将真空冷冻千燥嗜酸乳 杆菌种复苏，经两次传代后，再用LbS选择性培养基37t厌氧培养多天；收集嗜酸乳杆菌，取pH0.1 6.0盐水0.5 5.0ml，注入PYP瓶内，摇匀，将瓶 内液体取出，再注入第二瓶PYP中，根据需要可一直注入到第五瓶，甚至更多瓶 中；将最终的液体取出，注入到盛细菌的瓶内，摇匀；将盛细菌瓶放置于rC 65'C的培养箱或温箱中孵育lmin 60min;将瓶取出，用pHO. 1-6.0盐水0.5 5.0ml冲洗，离心机以100 4500转/ min离 心0.1min 20min;再冲洗，再离心多次；弃上清液，加入新鲜至多天内淋洗的"TcmO4液0.1 1000mci或更大的放射性 活度到盛沉淀的乳杆菌瓶内，总体积1 10ml或更大;放置于1CL65CG的培养箱或 温箱中孵育lmin 60min;重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后，即成。
3. 根据权利要求1或2所述的放射性核素"锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法,其特征是所述收集嗜酸乳杆菌的方法是银饵釆集，从培养基中收集细菌数为10匚10加个。
4. 根据权利要求1或2所述的放射性核素"锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法,其特征是所述真空冷冻干燥嗜酸乳杆菌种，其菌种编号为1.1845，保藏编号为 ADGA-A，由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)提供。
5. 根据权利要求1或2所述的放射性核素99锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法, 其特征是所釆用的MRS培养基按CGMCC提供的具有以下组成:在总重量为100中， 蛋白胨占0.93%,牛肉提取物占0.93%,酵母提取物占0.465%,葡萄糖占0.465%， 乙酸钠占0. 465%，杼檬酸二胺占0. 186%, Tween 80占0. 093%, K2HP04占0. 186%, MgS04 .7H20占0. 186%, MnS04 -H20占0. 00465%, CaC03占1. 86%，琼脂占1. 395%, 蒸馏水占92.57%, pH6. 8。
6. 根据权利要求1或2所述的放射性核素99锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法， 其特征是所述乳杆菌选择性培养基(LbS)按下述配置方法配置:蛋白胨0.93%, 肉膏O. 93%,酵母浸膏0.463%,葡萄糖l, 86%,吐温80 0.093°/。， K2HP04 0.186%, 醋酸钠0. 463%，枸橼酸三氨0, 186%, MgS04 ■ 7H20 0. 0186%， MnS04 H20 0. 00463%, 琼脂2.31°/。，精制水92.57%;加热溶解后，调pH6.0 6.5， 115°C 20分钟灭菌。
7. 根据权利要求1或2所述的放射性核素99锝m标记嗜酸乳杆菌的制备方法， 其特征是在PYP瓶内有Na4P207 2H20 10mg和SnC12 2H20 1. Omg。
全文摘要
本发明是采用放射性核素⁹⁹锝^m(⁹⁹Tc^m)标记嗜酸乳杆菌的一种放射性核素⁹⁹锝^m标记嗜酸乳杆菌的制备方法。它是在超净台内，用MRS培养基，在37℃厌氧条件下，将真空冷冻干燥嗜酸乳杆菌种复苏，经两次传代后，再用LbS选择性培养基37℃厌氧培养；收集嗜酸乳杆菌；盐水注入PYP瓶内摇匀，将瓶内液体取出，再注入第二瓶PYP中，并可一直注入到多瓶中；将最终的液体取出注入到盛细菌的瓶内摇匀；将盛细菌瓶放置于培养箱中孵育；将瓶取出，用盐水冲洗，离心；再冲洗、离心多次；弃上清液，加入⁹⁹Tc^mO₄液或更大的放射性活度到盛乳杆菌瓶内；置于培养箱中孵育；重复上述冲洗、离心多次；弃上清液，沉淀部分用放射性活度计测量后即成。
文档编号C12R1/23GK101314778SQ200710099698
公开日2008年12月3日 申请日期2007年5月29日 优先权日2007年5月29日
发明者王东出, 王国军, 陈庆利 申请人:中国石油天然气管道局;中国石油天然气管道局总医院