专利名称：利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备Y-氨基丁酸的方法，尤其涉及一种利用短乳杆菌制 备？氨基丁酸的方法。
背景技术：
y-氨基丁酸是一种非蛋白质组成的天然氨基酸，是哺乳动物体内一种重 要的抑制性神经递质，具有许多重要的生理功能，如降血压、利尿、安定、 促进脑部血流、营养神经细胞、健肝利肾等，并对妇女更年期的自身失调 有良好的改善作用，可以作为药物或保健品使用。乳酸菌是一类普遍认为安全的细菌，广泛用于食品加工。乳酸菌有多 种生理活性，如调节肠道菌群，抑菌抗氧化，增强免疫力，降低血压等。 日本已经将Y-氨基丁酸广泛用于饮料、果酱、糕点、饼干和调味料等。产？ 氨基丁酸的乳酸菌不仅产生Y-氨基丁酸，而且能保持发挥自身有益的生理 活性，应用前景广阔，有明显的经济效益和社会效益。发明内容本发明的目的在于提供一种利用短乳杆菌制备Y-氨基丁酸的方法，该制 备方法安全、成本低，反应条件温和，产物易于分离纯化。本发明是这样来实现的，其工艺方法步骤是1. 利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5%的接种量接种亍 MRSG发酵培养基，34 。C培养40-60h， 4t离心收集菌体；2. 利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10-100 mM谷氨酸钠的PH值是 5.2的醋酸缓冲液中，34。C反应l 8h，离心后即为含Y-氨基丁酸的溶液。本发明所用的短乳杆菌，保藏编号为ZactoZ^c/〃M Z^eWs CCTCCM 208054。本发明中的MRS培养基是蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/'L，酵母 提取物5g/L，葡萄糖20g/L， K2HP042g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸二胺2 g/L， MnS04.4H20 0.25 g/L, MgS04.7H20 0.58 g/L，吐温80 1 mL，蒸馏水1000 mL，经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下灭菌。本发明中的MRSG培养基是蛋白胨10g/L，牛肉提取物10&/L，酵 母提取物5g/L，葡萄糖20g/L， K2HP042g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸二 胺2 g/L， MnSCV4H20 0.25 g/L, MgS04'7H20 0.58 g/L， L-谷氨酸钠30 g/L， 吐温80 1mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下灭菌。本发明的优点是该方法安全、成本低，反应条件温和，不污染环境，无副产物，产物易于分离纯化。
具体实施方式
实施例1:保藏于MRS琼脂斜面的;^晃/^^;转接于MRS液体培养基，经两次活 化后，以5。/。的接种量接种于MRSG液体培养基，于34。C培养48h， 5000 rpm 离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬 于含10mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH5.2)， 34。C反应lh，离心后即为含 Y-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的r-氨基丁酸达到约10mM。实施例2:保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活 化后，以5。/。的接种量接种于MRSG液体培养基，于34。C培养48h， 5000 rpm 离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬 于含40mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH5.2)， 34。C反应2h，离心后即为含 Y-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的r-氨基丁酸达到约30mM。实施例3:保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆菌，转接于MRS液体培养基，经两次活 化后，以5。/o的接种量接种于MRSG液体培养基，于34"C培养48h， 5000 rpm 离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬 于含80mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH5.2)， 34t反应4h，离心后即为含 Y-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的Y-氨基丁酸达到约60mM。实施例4:保藏于MRS琼脂斜面的短乳杆齒，转接于MRS液体培养基，经两次活 化后，以5。/。的接种量接种于MRSG液体培养基，丁34。C培养48h， 5000 rpm 离心10min，收集沉淀，利用无菌的生理盐水洗涤沉淀2次，最后将沉淀悬 于含100mM谷氨酸钠的醋酸缓冲液(pH5.2)， 34'C反应8h，离心后即为 含Y-氨基丁酸的溶液。经测定，发酵液中的Y-氨基丁酸达到约80mM。上述实施例中的MRS培养基是蛋白胨10g/L，牛肉提取物1()g/L， 酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L， K2HP042g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸 二胺2 g/L， MnS04'4H20 0.25 g/L, MgS04'7H20 0.58 g/L，吐温80 1 mL,蒸 馏水1000mL，经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下灭菌。上述实施例中的MRSG培养基是蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L， 酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L， K2HP042g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸 二胺2 g/L， MnS04'4H20 0.25 g/L, MgSOr7H20 0.58 g/L， L-谷氨酸钠30 g/L，吐温80 1mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下 灭菌。上述实施例中的短乳杆菌的保藏编号是Lflctok "7/s^ />wv& CCTCCM 208054。
权利要求
1.一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，其特征是工艺方法步骤为(1)利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5％的接种量接种于MRSG发酵培养基，34℃培养40-60h，4℃离心收集菌体；(2)利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10-100mM谷氨酸钠、pH 5.2的醋酸缓冲液中，34℃反应1～8h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。
2. 根据权利要求l所述的一种利用短乳杆菌制备Y-氨基丁酸的方法，本 发明中的短乳杆菌的保藏编号是丄actok/c/〃ws 6reWs CCTCCM 208054。
3. 根据权利要求l所述的一种利用短乳杆菌制备Y-氨基丁酸的方法，其 特征是MRS培养基为蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5 g/L，葡萄糖20 g/L， K2HP04 2 g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸二胺2 g/L， MnS04.4H20 0.25 g/L, MgS04'7H20 0.58 g/L，吐温80 1 mL，蒸馏水1000 mL， 经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下灭菌。
4. 根据权利要求l所述的一种利用短乳杆菌制备Y-氨基丁酸的方法，其 特征是MRSGi咅养基为蛋白胨10g/L，牛肉提取物10g/L，酵母提取物5 g/L，葡萄糖20 g/L， K2HP04 2 g/L，乙酸钠5 g/L，柠檬酸二胺2 g/L， MnS04.4H20 0.25 g/L,MgS04'7H20 0.58 g/L， L-谷氨酸钠30g/L，吐温80 1 mL，蒸馏水1000mL，经调节pH6.2 6.4，在高温高压条件下灭菌。
全文摘要
一种利用短乳杆菌制备γ-氨基丁酸的方法，其工艺方法步骤为1.利用MRS液体培养基将短乳杆菌活化后，以5％的接种量接种于MRSG发酵培养基，34℃培养40-60h，4℃离心收集菌体；2.利用无菌生理盐水洗涤2次后悬于含10-100mM谷氨酸钠、pH 5.2的醋酸缓冲液中，34℃反应1～8h，离心后即为含γ-氨基丁酸的溶液。本发明的优点是该制备方法安全、成本低，反应条件温和，不污染环境，无副产物，产物易于分离纯化。
文档编号C12P13/00GK101333548SQ200810106949
公开日2008年12月31日 申请日期2008年6月26日 优先权日2008年6月26日
发明者曹郁生, 李海星 申请人:南昌大学