专利名称：一种具有降血脂活性的贻贝多糖ma及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种从海洋生物紫贻贝中分离到的多糖MA及其制备方法。
背景技术：
紫贝台贝(Mj"/m g"//c^rov/""'W& Lamarck)为贻贝科(Mytilidae)贻贝属(A/>>"/w5) 的海洋生物，广泛分布于中国沿海。紫贻贝呈楔形，壳质较轻薄，但较坚韧，壳长一般 70 90mm，呈黑褐色或紫褐色，表面光滑。紫贻贝资源丰富，产量高，肉味鲜美，营养丰 富，是高级蛋白的重要来源。除可鲜食外，又可制成罐头、贻贝油和干制品等美味食品。 在药用方面除用做滋补品和药剂外，它又是提取维生素D的重要原料(王祯瑞.中国动物 志.软体动物门.双壳纲贻贝目.第1版.北京北京科学出版社.1997 : 50-55)。现代药理 学研究认为贻贝有多种药理活性，包括抗动脉粥样硬化，降血脂，抑制血小板的凝聚从而 抑制血栓的形成，改善心肌氧和营养物质的供应及保护实验性心肌缺血，改善微循环和降 血压等(邵伯芹等.贻贝多活素对大鼠肠系膜微循环的影响.中国药理学通报，1997， i3(3):260'262)。但至今未见从海洋生物紫贻贝中分离到具有降血脂活性的贻贝多糖MA的 相关报道。
发明内容
本发明提供一种具有降血脂活性的贻贝多糖MA及其制备方法。
本发明从生长于中国浙江海域的紫贻贝中提取分离到的贻贝多糖MA的制备方法如
下
1. 多糖的提取
将紫贻贝贝肉鲜品用搅碎机制备成匀浆，用水煮沸提取2次，第一次加3倍体积水， 提取2小时，第二次加2倍体积水，提取l小时，离心过滤，合并滤液，将滤液浓缩后加 4倍体积95°/。乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出，倾去上清液，沉淀中加入等体 积95%乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗涤3次离心抽千，再按常规经 2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖粗品。
2. 分离纯化
将粗品溶于0.05 mo!DL-1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，按常规上DEAE-cellulose
柱，用0.05 mol口I/'的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30mL口h—、用硫酸—苯酚法跟踪
检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓縮，得到均一的贻 贝多糖MA。
贻贝多糖MA为白色絮状物，较易溶于水和二甲基亚砜，不溶于乙醇、丙酮等有机溶 剂，硫酸-苯酚反应呈阳性，HPGFC检测为单一对称峰，MA的相对分子量为112,700左右。 IR (KBr) cm": 3423 (羟基)，1636 (乙酰氨基),1154、 1080、 1021 (糖环醚键)，847 (a -糖苷键)。硫酸咔唑法测定MA的糖醛酸含量为6.759%。 (HNMR谱确定MA的端基 质子为a -吡喃己糖(S 5. 248)。用GC-MS法对MA的酸水解产物进行组分分析，结果表 明MA由阿拉伯糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺和半乳糖组成，摩尔数 比例依次为0.381、 0.081、 0.080、 97.272、 0.587、 0.968和0.631。 Sm池降解后做GC-MS 分析，检出物有大量的葡萄糖，少量的氨基糖、甘油及微量的岩藻糖、甘露糖、半乳糖， 没有赤藓醇检出。由此证明多糖MA存在的连接方式有l口3， l口6， l口2且比例约为
80.3卯13.434:6.176，其主链为1D3连接，还有少量的W6连接，支链为1D2连接。
经动物试验表明，贻贝多糖MA具有明显的降血脂活性，因此，可用于制备降血脂的 药物或食品。
具体实施方式
-
现结合实施例，对本发明作详细描述。
实施例1.贻贝多糖MA的制备
取生长于中国浙江嵊泗海域的紫贻贝鲜品16千克，用搅碎机制备成匀桨，水煮沸提 取2次，第一次加3倍体积水，提取2小时，第二次加2倍体积水，提取l小时，离心过 滤，合并滤液，将滤液浓縮后加4倍体积95%乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出， 倾去上清液，沉淀中加入等体积95%乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗 涤3次离心抽干，再经2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖
粗品约960g。取该粗品约6g溶于10ml 0.05 moEI/1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，
上DEAE-celluIose柱，用0.05 moDL'1的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30 11111]11-1，用
硫酸一苯酚法跟踪检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓 縮，得到均一多糖MA约486mg。
动物降血脂试验
取70只SD大鼠(购自复旦大学实验动物科学部)，体重180土10g，随机分组，每组 10只，雌雄各半，共分7组正常对照组、模型对照组、阳性药普伐他汀组、阳性药血脂 康组以及贻贝多糖MA低、中、高剂量组。各组以基础饲料喂养一周，分别眼眶取血少量， 检测血清总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)。 然后，除正常对照组仍喂食基础词料外，其余各组喂食高脂饲料4周，使其成为高脂动物 模型。将药物分别用蒸馏水配成相应浓度的溶液，除正常对照组每鼠灌胃1毫升蒸馏水外， 其佘各组每鼠灌胃1毫升相应药液，按体重给药剂量为普伐他汀2mg/kg、血脂康1 mg/kg、 贻贝多糖MA低、中、高剂量组分别为25mg/kg、 50mg/kg禾n 100mg/kg，每天一次，连续 4周，每周称重一次。最后一次给药后大鼠隔夜禁食，腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg眼眶 取血，分离血清，测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。结果见表
1:
表l.各组大鼠血清中血脂水平测定结果比较(3f土5D, n=10)(单位咖。1/L)
组别 实验前 实验后
血淸总 t+油三fi旨 高密度 低密度脂血浩总胆 妇-油三酯高'密度脂低密度脂
胆固醇脂蛋白蛋白固醇蛋白蛋白
(TCH)(TG)(HDL)(LDL)(TCH)(TG)(HDL)(LDL)
正常对照1.414±0. 556±1.203±0. 481 ±1.431±0. 539±1. 202 ±0. 488 ±
0. 1300.1440. 1810. 0960. 2130. 1170. 2060. 111
模型对照1. 544 ±0. 570±1. 045±0. 473 ±6.152±1. 009 ±1. 178±2. 501±
0. 1570. 1580. 1000. 0671. 225tW0. 1柳#0. 1840. 650tt#
普伐他汀1.559±0. 543 ±1. 125±0. 493 ±3, 451 ±0. 671±1. 174±1. 381±
0. 1480.1150. 1040. 0421.183**0. 128*承0. 1290. 286**
血脂康1. 544±0. 579±1. 114±0. 471 ±3. 702 ±0. 701±1. 198 ±1.878±
0.1220.1440. 1370. 0511. 259**0. 134科0. 1880. 520*
MA低剂量1.414±0. 596 ±L 282士0. 469 ±3. 799±0. 708 ±1. 316±1.918±
0. 3130.0850. 1640. 1130. 877**0. 097+承0. 2450. 688
MA中剂量1.5i0±0. 543 ±1.269±0. 474 ±3. 606 ±0, 635 ±1. 256土1. 617±
0. 2590.0940. 1730. 1320. 850林0. 155承+0. 2800. 620承承
MA高剂量1.475±0. 565士1. 290 ±0. 470 ±3. 503 士0. 615±1.264±1.342±
0. 2320. 1090. 1510. 1151. 095林0. 091*承0, 3010. 427求承
'P〈0. 01与正常对照组比较；*P〈0. 05 **P〈0. 01与模型对照组比较。
由表1可见，大鼠喂饲高脂饲料4周后，模型对照组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂 蛋白较喂饲基础词料的正常对照组有非常显著的升高(PO.Ol)。各药物治疗组与模型对照 组比较，能降低大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，差异显著或非常显著(P〈0.05 或P〈0.01)。贻贝多糖MA低、中、高三个剂量组(25mg/kg、 50mg/kg、 100mg/kg)与阳 性对照药普伐他汀、血脂康组相比，降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平相当， 表明贻贝多糖MA具有良好的降血脂作用，因此可用于制备降血脂的药物或食品。本发明 对开发利用海洋药用生物资源具有重要意义。
权利要求
1.贻贝多糖MA的制备方法，具体步骤如下1)多糖的提取将紫贻贝贝肉鲜品用搅碎机制备成匀浆，用水煮沸提取2次，第一次加3倍体积水，提取2小时，第二次加2倍体积水，提取1小时，离心过滤，合并滤液，将滤液浓缩后加4倍体积95％乙醇，搅匀，放置5小时，待沉淀完全析出，倾去上清液，沉淀中加入等体积95％乙醇，搅匀，离心过滤，沉淀物用等体积无水乙醇洗涤3次离心抽干，再经2次Savager法除蛋白，蒸馏水溶解后，冷冻干燥即得到贻贝多糖粗品；2)分离纯化将贻贝多糖粗品溶于0.05mol口L-1的NaCl溶液中，离心去除不溶物后，上DEAE-cellulose柱，用0.05mol□L-1的NaCl洗至无糖检出时为止，流速30mL□h-1，用硫酸-苯酚法跟踪检测，收集洗脱部分，用截流分子量为3000的滤膜超滤杯加压脱盐浓缩，得到均一的贻贝多糖MA。
2. 权利要求i所述方法制备的贻贝多糖MA，其特征在于由阿拉伯糖、岩藻糖、甘露 糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺、半乳糖胺组成，摩尔比依次为0.381、 0.081、 0.080、 97.272、 0.587、 0.968和0.631。
3. 权利要求2所述贻贝多糖MA在制备降血脂药物或食品中的应用。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，是一种从紫贻贝中分离到的贻贝多糖MA及其制备方法。经动物体内降血脂试验表明，贻贝多糖MA对高脂饲料诱导的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，可降低大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，作用与阳性药普伐他汀或血脂康相当。因此，贻贝多糖MA可用于制备降血脂的药物或食品。本发明对充分利用海洋生物资源具有重要意义。
文档编号A23L1/33GK101357952SQ20081020002
公开日2009年2月4日 申请日期2008年9月18日 优先权日2008年9月18日
发明者储智勇, 文 张, 易杨华, 玲 李, 李树林, 马明华 申请人:中国人民解放军第二军医大学