专利名称：一种快速提取小鼠组织dna的方法
技术领域：
本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种模板DNA的制备方法，更 具体的说是一种新型的用于快速简易地提取小鼠组织DNA的方法。
背景技术：
分子生物学技术已经渗透到生物学、医学、植物学、遗传学和动物学 等各个方面。由于生命科学的研究领域越来越认可和依赖动物体内实验结 果，因而到目前为止，研究人员构建了各种转基因和敲基因小鼠，并在此 基础上开展了系列人类疾病的动物模型的研究，这是生命科学研究领域不 可或缺的重要部分。对转基因和敲基因小鼠基因型的鉴定是这一领域的关 键技术之一，而其中小鼠组织DNA的提取是该关键技术的关键步骤。DNA提取的质量和产量是直接影响PCR扩增的关键步骤，自1985年 PCR技术问世以来，这一技术己被应用到生命科学的各信息领域，因其敏 感性高、特异性强、操作简便、所需时间短等优点己被广泛用于多种检测 领域。PCR检测技术的第一步就是模板DNA的制备，即样品中DNA的提 取，这直接影响着PCR反应的结果。长期以来，样品中DNA的提取和纯 化一直是耗时、繁琐的过程，严重减慢了检测速度。因此，许多学者一直 在探索各种样品DNA的快速提取方法。目前，提取DNA的方法主要有传统法、赘合树脂法、玻璃粉法、磁 珠法、免疫亲和法等。市场所售试剂盒及各实验室所用小鼠组织DNA提 取的方法通常使用蛋白酶K (PK)消化小鼠组织，利用氯仿等有机溶剂萃 取，而后用酒精沉淀和洗涤DNA。这些方法存在缺点是由于使用蛋白酶 K而费用高，使用氯仿而毒性大，并且整个实验流程耗时长，需要数小时或过夜；另外流程繁琐，同时样品需要用4 5个Eppendorf管，容易造成 混淆和污染；操作复杂，方法不易掌握及推广，而且操作过程中使用了大 量有机溶剂，有损实验人员健康。发明内容本发明的目的在于提供一种可大规模、快速提取小鼠组织DNA的方 法，用于PCR技术来鉴定小鼠基因型。本实用新型的目的通过以下技术方案来实现 一种快速提取小鼠组织DNA的方法，包括以下步骤(1) 剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入Eppendorf管内；(2) 向Eppendorf管管内加入50微升~200微升、20mM-200 mM的 氢氧化钠溶液，并将Eppendorf管置入PCR仪器内，加热至90。C 10(TC并 持续加热0.5 1.5小时；(3) 取出Eppendorf管，加入10微升、酸性的1M三羟甲基氨基甲 烷溶液；(4) 剧烈震荡Eppendorf管，至小鼠尾巴末端或足趾组织完全溶解；(5) 再将Eppendorf管置入PCR仪器内，离心分离5分钟，转速范 围为5000rpm 15000rpm;(6) 收集上清液，取1微升的上清液加入基因型的鉴定PCR反应体系。进一步地，所述三羟甲基氨基甲垸溶液的PH值为4.5。 本发明的有益效果主要体现在该方法简易、快速、经济和高效，规 模化从小鼠尾巴中提取基因组DNA。1) 该方法制备的小鼠组织DNA用于PCR鉴定基因型与市售试剂盒 制备DNA后的鉴定结果比较，同样稳定和质量佳，但是本发明价格极为 便宜，性价比极高；该方法使用试剂极为简易和经济；2) 操作步骤简单，实验耗时极短，约1.5小时，且制备的每一个样品作为PCR模板可用于50-100个PCR反应；3)可同时制备大量小鼠组织DNA，适用于大规模的小鼠基因型筛查。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步详细说明在优选实施例中， 一种快速提取小鼠组织DNA的方法，包括以下步骤(1) 剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入Eppendorf管内；(2) 向Eppendorf管管内加入100微升、100 mM的NaOH溶液，并 将Eppendorf管置入PCR仪器内，加热至95。C并持续加热1小时；(3) 取出Eppendorf管，加入10微升、PH值为4.5的lMTrometamol (三羟甲基氨基甲烷)；(4) 剧烈震荡Eppendorf管，至小鼠尾巴末端或小鼠足趾组织完全溶解；(5) 再将Eppendorf管置入PCR仪器内，离心分离5分钟，速度为 画00rpm;(6) 收集上清液，取1微升左右的上清液加入基因型的鉴定PCR反 应体系即可。由于本法所用试剂最佳为100 mM的NaOH和1M的Trometamol (调 节pH至4.5),而PH值的调节只需加入酸性溶液即可，极为简易和经济， 因此易于推广。采用本法和常规蛋白酶K (PK)法，分别从7个小鼠尾巴提取组织 DNA，而后采用相同的PCR方法，均可获得理想的目的DNA产物条 带。
权利要求
1.一种快速提取小鼠组织DNA的方法，其特征在于包括以下步骤(1)剪取小鼠尾巴末端或小鼠足趾置入试管内；(2)向试管管内加入50微升～200微升、20mM-200mM的氢氧化钠溶液，并将试管置入PCR仪器内，加热至90℃～100℃并持续加热0.5～1.5小时；(3)取出试管，加入10微升、酸性的1M三羟甲基氨基甲烷溶液；(4)剧烈震荡试管，至小鼠尾巴末端或小鼠足趾组织完全溶解；(5)再将试管置入PCR仪器内，离心分离5分钟，转速范围为5000rpm～15000rpm；(6)收集上清液，取1微升的上清液加入基因型的鉴定PCR反应体系。
2. 根据权利要求1所述的快速提取小鼠组织DNA的方法，其特征在 于所述试管为Eppendorf管。
3. 根据权利要求1所述的快速提取小鼠组织DNA的方法，其特征在 于所述三羟甲基氨基甲烷溶液的PH值为4.5。
4. 根据权利要求1所述的快速提取小鼠组织DNA的方法，其特征在 于所述步骤(2)中向试管管内加入100微升、lOOmM的氢氧化钠溶液， 并将试管置入PCR仪器内，加热至95'C并持续加热1小时。
5. 根据权利要求1所述的快速提取小鼠组织DNA的方法，其特征在 于所述步骤(5)中将试管置入PCR仪器内，离心分离5分钟，转速为 10000rpm。
全文摘要
本发明涉及一种小鼠组织DNA的快速提取方法，仅采用氢氧化钠溶液和三羟甲基氨基甲烷溶液作为试剂，极为简易和经济。本发明采用的DNA提取方法，1.5小时就可以完成样品DNA提取的全过程，所提取的DNA质量标准满足了后续PCR扩增的要求，更适合于生产、科研过程中快速提取样品DNA的目的。
文档编号C12N15/10GK101407808SQ20081023430
公开日2009年4月15日 申请日期2008年11月11日 优先权日2008年11月11日
发明者居颂光, 钱鸣宇, 勤 顾 申请人:苏州工业园区普天生物科技有限公司