专利名称：一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统及遗传分析方法
技术领域：
本发明涉及水产遗传育种领域，具体说是一种中华绒螯蟹多元高通量 遗传标记系统及遗传分析方法。
技术背景随着生物技术的发展，分子标记也在不断更新，目前广泛应用在海洋动物遗传学分析中的标记是线粒体序列和微卫星标记。线粒体序列(mtDNA) 作为核外遗传物质，具有进化速度快、非重组变异和母系遗传等特点，完 全相同的序列信息表明样品来源于同一母本。常用作种内遗传分析的mtDNA 片段有Cytb， C0I和CR。微卫星(SSRs)是在真核和原核生物基因组中存在 的由2-6个碱基构成的串联重复序列，具有高度多态性和共显性特点。微 卫星标记能够提供双亲的遗传信息，尤其应用在揭示个体间和群体间的基 因交流、推测亲权关系和杂交现象的分析中，能更全面的反映群体间的遗 传关系。基因组微卫星标记常被用于濒危珍贵保护动物以及海洋经济物种 的遗传多样性评估及系谱认证。虽然已积累了大量的中华绒螯蟹序列信息 (国际共享数据库GenBank中公布7000余个)，但是，这些信息还没有被系统的开发并真正应用于到遗传育种所需的系谱认定和遗传关系分析中。 发明内容本发明的目的在于提供一种快速、有效的中华绒螯蟹多元高通量遗传 标记及遗传分析方法。为实现上述目的，本发明釆用的技术方案为一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统所述多元高通量遗传标记 系统为线粒体序列信息系统和微卫星分子标记系统，其中微卫星分子标记 系统为由7个EST-SSR标记的系统1和6个EST-SSR标记的系统2组成；系统1由7个EST-SSR标记组成，扩增7个EST-SSR标记的7对引物 分别是NE5 (F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12(F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46(F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT); NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系统2由6个EST-SSR标记组成，扩增6个EST-SSR标记的6对引物 分别是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA);NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA;R: CACGACAGACTTACCAGCAC);NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC);NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA;R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗传分析方法首先，运用线 粒体的三对引物扩增COI, Cytb和CR的序列的信息作为分子标记，将混养 家系中同一母本和不同母本所产的后代根据遗传结构和遗传多样性分开， 然后再运用EST-SSR微卫星分子标记，将已区分母本的后代根据遗传距离 和遗传多样性进行父本的区分，从而完成中华绒螯蟹遗传育种过程中的系 谱认证并确认近交系数。所述扩增COI, Cytb和CR序列的三对引物分别是 LC01490 (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198 (TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)、Fl (CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和 Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT) 、所述EST-SSR微卫星分子标记由系统1和系统2组成； 扩增7个EST-SSR标记的7对引物分别是 NE5 (F:CGTGAATGCTGTAGTGTAAT;R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC);NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA);NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA);NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系统2由6个EST-SSR标记组成，扩增6个EST-SSR标记的6对引物 分别是NE1(F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18 (F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA;R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA;R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36(F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。 所有引物方向为5'—3'方向。所述中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统 遗传分析的方法可同时检测成百上千个样品。 本发明所具有的优点1. 育种的遗传背景清晰，避免了传统育种的盲目性。本发明利用线粒 体序列和微卫星作为分子标记，解析了我国累代养殖的中华绒螯蟹群体的 遗传多样性，明确了育种基础群、育种选择群个体间的遗传关系，使育种 材料的选择具有更强的目的性。2. 本发明线粒体序列和微卫星分子标记的结合，既避免了仅用线粒体序列无法明确父系信息的缺点，也减少了仅用微卫星标记的繁瑣，有利于 快速确认所研究个体的系谱发生。3.本发明应用多元高通量遗传标记系统对育种群体遗传多样性的实时监测，可以有效避免遗传育种过程中的近交衰退，保障育种的科学性和可持续性。
图1为本发明遗传分析中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统(其中数 字代表每个标记的等位基因数，横轴所示标记名称，纵轴所示等位基因的 大小。)。图2a和图2b为运用本发明方法模拟检测图(其中在双亲信息未知的 情况下，运用软件Cervus Version2. Q的Simulation功能，区分400个家 系的准确率为100%;由线粒体信息确定母本后、在一个亲本信息已知的情 况下，区分1000个家系的准确率为100%。)。图3为运用本发明家系鉴定图(其四个家系，每个家系10个个体，分 别为l-10, 11-20, 21-30， 31-40。运用本专利技术检测，运用软件 populationsl. 2. 30,采用DAS法计算遗传距离，UPGMA图显示，正确率为 画。)。
具体实施方式
实施例1)中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统为线粒体序列信息系统和微卫 星分子标记系统，其中微卫星分子标记为由7个EST-SSR标记的系统1和6 个EST-SSR标记的系统2组成(参见图l);系统1由7个EST-SSR标记组成，扩增7个EST-SSR标记的7对引物 分别是NE5 (F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48(F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT); NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系统2由6个EST-SSR标记组成，扩增6个EST-SSR标记的6对引物 分别是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36(F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。 以上引物参见序列表。2)中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统遗传分析的方法首先，运用 线粒体的三对引物扩增COI, Cytb和CR的序列的信息作为分子标记，将混养家系中同一母本和不同母本所产的后代根据遗传结构和遗传多样性分 开，然后再运用EST-SSR微卫星分子标记，将已区分母本的后代根据遗传 距离和遗传多样性进行父本的区分，从而完成中华绒螯蟹遗传育种过程中 的系谱认证并确认近交系数。(1) 运用线粒体的三对引物扩增COI， Cytb和CR的序列的信息a. 提取中华绒螯蟹样品的DNA;b. 以步骤 a 的 DNA 为模板，用引物 LCO14 9 Q (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198(TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)扩增 COI 片段，用引物 Fl ( CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT)扩增Cytb片段， 用 引 物 F2 (GACCGTTGAGACTACTACTATAATA) 和 R2 (TCCGTTGCATGTAAGTATATAGTAG)扩增CR片段。上述PCR扩增产物回收、 纯化并测序。PCR扩增条件为95C变性2分钟，32-35个循环包括95。C变 性30秒、54-56。C退火45秒、72。C延伸60秒，最后72。C延伸5分钟.(2) 运用EST-SSR微卫星分子标记c. 以步骤 a 的 DNA 为模板，分另'J用引物 NE5(F: CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT); NE12 (F ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC); NE16 (F TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA); NE27 (F ACGGGAAATGGAACAGAT;R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE46(F ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA); NE48 (F AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG)扩增系统1的 全部微卫星标记共计7个。分别用引物NE1(F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; RCAGAGCCACAACACTAACG); GACGAGCGAAGAACTGGA); CACGACAGACTTACCAGCAC) TTTCCTTCCATCCTGAGTC); TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT;RNE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; RNE25 (F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; RNE26 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; RNE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA; RGTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)扩增系统2的全部微卫星标记共计6个。PCR扩增 条件为95。C变性2分钟，28-32个循环包括95。C变性30秒、54-58。C退 火45秒、72'C延伸60秒，最后72。C延伸5分钟。将上述PCR扩增产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，并应用Cervus Version2. 0软件进行数据处理。 应用例1运行Cervus的模拟分析功能得到使用本发明专利技术，区分混养家系的数目与家系鉴别成功率之间的关系，见图2。从图2a中红线所示，完全使用本发明专利，由线粒体信息确定母本后、在一个亲本信息已知的情况下， 再运用EST-SSR标记系统1和系统2可成功区分1000个家系(准确率100%); 从图2a中黑线所示，若不先使用线粒体信息确定母本、在双亲信息未知情 况下，应用EST-SSR标记系统1和系统2仅能区分400个家系(准确率100%); 从图2b中红线所示，由线粒体信息确定母本后、在一个亲本信息已知的情 况下，单独应用EST-SSR标记系统1或系统2可成功区分100个家系(准确率 100%);从图中黑线所示，若不先使用线粒体信息确定母本、在双亲信息未 知情况下，单独应用EST-SSR标记系统1或系统2可成功区分10个家系(准确 率簡)。应用例2四个家系的样品于2008年10月10日取自江苏省射阳县昌盛水产有限责 任公司，每个家系都为一雌、 一雄所产的全同胞家系。从每个家系中随机 取10只幼蟹个体，分别编号明确其亲缘关系组成样本I 。从另一个养殖群体 中随机选4只雌蟹和4只雄蟹分别编号后与真正的4对亲本一起共同作为候 选亲本组成样本II。进行混养家系的分析时假定样本I 、 II之间的亲缘关 系未知，将样本I与样本II 一起应用本专利技术进行遗传分析，具体为先测 定所有样本的线粒体信息，明确母本信息并将不同母亲的个体分开；再应 用EST-SSR系统1和系统2检测所有样本的基因型，明确父本信息，并根据样 本I中40个个体基因型的数据，用Populations软件计算出个体之间的遗 传距离，用UPGMA的方法根据个体间遗传距离将四个家系的40个个体分别 聚成四类，同一家系的个体均被单独聚成一类，分析的结果与记录编号比对, 正确率100°/。(图3)。序列表.txtSEQUENCE LISTING <110>中国科学院海洋研究所.〈120〉 一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统及遗传分析方法〈130〉 <160> 32<170〉 Patentln version 3.1<210> 1<211> 20<212> 腿<213> 人工设计<220〉<221> satellite <222〉 (l).. (20) <223>〈400〉 1cgtgaatgct gtagtgtaat 20<210> 2〈211> 20<212> DNA〈213> 人工设计<220><221> satellite <222〉 (1). . (20) <223><400> 2caccagaaat aatgaggttt 20<210> 3<211> 19<212〉 DNA<213> 人工设计〈220〉〈221〉 satellite〈222〉 (1). . (19) 〈223><400> 3atgacattga tgcctgacg 19<210> 4〈211〉 19〈212> 腿 〈213>人工设计<220><221〉 satellite<222> (1)..(19) <223><400〉 4tgcctttatt gaccgagac 19〈210〉 5〈211〉 20〈212〉 DNA 〈213〉人工设计〈220〉<221〉 satellite<222〉 (1). . (20)序列表.txt<223>〈400〉5tttcacatcc tccacagaca〈210>6<211〉20<212>DNA<213〉人工设计<220〉<221>satellite<222〉(l).. (20)<223><400>6gccacaagta cacccaatca<210〉 7<211〉 18<212> DNA<213〉 人工设计<220〉<221〉 satellite<222> (1).. (18) <223〉<400> 7acgggaaatg gaacagat 18<210〉 8<211> 18<212〉 腿<213〉 人工设计〈220〉<221〉 satellite<222> (1)..(18) 〈223〉<400〉 8acgggaaatg gaacagat 18〈210> 9<211> 18<212> DNA<213〉 人工设计<220〉<221> satellite<222> (1)..(18) <223>〈400〉 9tccttccatc ctgagtcc 18<210〉 10<211> 19<212> 腿<213〉 人工设计<220>《221〉 satellite <222〉 (1). . (19) 〈223>〈400〉 10actgct,gttg tt.ggt.ggtc 19<210>11<211>22<212〉廳<213>人工设计<220〉<221>satellite<222〉(l).. (22)<223><400>11aaaggtcagt taatttcttg<210〉12<211〉22<212〉腿<213>人工设计〈220〉<221〉satellite<222>(l).. (22)<223><400〉12tcta.gtgaaa tga.catatt.g<210>13<211〉19<212〉醒<213〉人工设计<220〉<221〉satellite<222> 〈223〉(l).. (19)<400>13agaccgctgt tatgctcct<210〉 14<211> '22<212> DNA<213〉 人工设计<220〉<221〉 satellite 〈222〉 (l)..咖 〈223〉〈400> 14atgggaatga aggttatgta tg<210〉15<211>19〈212〉DNA<213>人工设计<220〉<221>satellite<222〉(l).. (19)〈223〉<柳>15cattccaagt cttgacccc<210>16<211〉19<212>DNA〈213>人工设计序列表.txt22221922序列表.txt<220〉<221> satellite 〈222〉 (1)..(19) <223>〈400〉 16cagagccaca acactaacg 19<210〉17〈211〉22<212>腿<213〉人工设计<220〉〈221〉satellite<222>(l)..咖<223><400>17tattcaacat ttcaacaacg〈210〉18〈211〉18<212〉DNA〈213〉人工设计〈220〉<221>satellite〈222>(l).. (18)〈223〉<400〉18gacgagcgaa g咖tgga<210〉19<211>20<212〉醒〈213〉人工设计<220〉<221〉satellite<222>(l)..咖〈223〉<400〉19<210> 20<211> 20<212> DNA <213>人工设计<220>〈221> satellite<222〉 (1).. (20) <223><柳〉20cacgacagac ttaccagcac 20<210〉 21<211〉 19<212〉 腿〈213〉 人工设计<220〉<221> satellite〈222〉 (1). . (19) 〈223〉序列表.txt〈400〉 21agg鄉tgcg ta卿gtga 19<210〉22〈211〉19<212〉DNA<213〉人工设计<220〉<221〉satellite<222>(l).. (19)〈223><400〉22tttccttcca tcctgagtc〈210〉23<211〉18〈212〉DNA〈213〉人工设计<220〉<221〉satellite<222>(l).. (18)<223〉<400〉23acgggaaatg gaacsga.t<210〉24〈211>18<212〉腿〈213〉人工设计<220〉〈221〉satellite<222〉(18)<223〉<400>24tccttccatc ctgagtcc〈210>25〈211>17<212>腿<213〉人工设计<220〉〈221>satellite<222〉(l).. (17)<223><400>25atgtggactg cgggaga<210〉 26〈211〉 20〈212〉 陽 〈213〉人工设计<220><221〉 satellite<222〉 (l)..咖 <223〉〈400〉 26gtggt,ggtag gUcgtctgt, 20<210〉27〈211〉25<212〉DNA<213〉'avertebrate<220〉〈221〉<222〉(l).. (25)〈223〉<咖>27ggtcaac3幼tcatasagat<210>28<211>26<212〉DNA〈213〉avertebrate〈220〉〈221>gOT6〈222〉(l).. (26)〈223〉<400>28taaacttcag ggtgaccaaa aaatca 26<210> 29〈211> 20<212> 腿〈213〉 人工设计〈220〉<221> gene<222〉 (1).. (20) <223><400〉 29catgcctgaa tagtaggagt 20〈210〉 30<211〉 20<212> 廳<213〉 人工设计〈220〉<221>gene〈222〉(l).. (20)〈223〉<400>30gtgctccaat t,caggt,caat<210〉31<211>25<212〉DNA<213>人工设计<220〉<221>D—loop〈222〉(l).. (25)<223><400>31gaccgtt.gag actactacta<210〉 32<211〉 25〈212〉 DNA<213> 人工设计14序列表.txt〈220><221〉 D-loop <222〉 (1). (25) 〈223〉〈400〉 32tccgttgcat gtaagtatat agtag 2权利要求
1.一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统，其特征在于所述多元高通量遗传标记系统为线粒体序列信息系统和微卫星分子标记系统，其中微卫星分子标记系统为由7个EST-SSR标记的系统1和6个EST-SSR标记的系统2组成；系统1由7个EST-SSR标记组成，扩增7个EST-SSR标记的7对引物分别是NE5(FCGTGAATGCTGTAGTGTAAT；RCACCAGAAATAATGAGGTTT)；NE12(FATGACATTGATGCCTGACG；RTGCCTTTATTGACCGAGAC)；NE16(FTTTCACATCCTCCACAGACA；RGCCACAAGTACACCCAATCA)；NE27(FACGGGAAATGGAACAGAT；RTCCTTCCATCCTGAGTCC)；NE46(FACTGCTGTTGTTGGTGGTC；RCCTTAATCCGTTGCGTCA)；NE48(FAAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT；RTCTAGTGAAATGACATATTGGT)；NE49(FAGACCGCTGTTATGCTCCT；RATGGGAATGAAGGTTATGTATG)；系统2由6个EST-SSR标记组成，扩增6个EST-SSR标记的6对引物分别是NE1(FCATTCCAAGTCTTGACCCC；RCAGAGCCACAACACTAACG)；NE18(FTATTCAACATTTCAACAACGAT；RGACGAGCGAAGAACTGGA)；NE23(FAGAGGCAAATGCGATAAAGA；RCACGACAGACTTACCAGCAC)；NE25(FAGGAGGTGCGTAAGAGTGA；RTTTCCTTCCATCCTGAGTC)；NE26(FACGGGAAATGGAACAGAT；RTCCTTCCATCCTGAGTCC)；NE36(FATGTGGACTGCGGGAGA；RGTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。
2. —种按权利要求1所述的中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗 传分析方法，其特征在于首先，运用线粒体的三对引物扩增COI, Cytb 和CR的序列的信息作为分子标记，将混养家系中同一母本和不同母本所产 的后代根据遗传结构和遗传多样性分开，然后再运用EST-SSR微卫星分子 标记，将已区分母本的后代根据遗传距离和遗传多样性进行父本的区分， 从而完成中华绒螯蟹遗传育种过程中的系谱认证并确认近交系数。
3. 按权利要求2所述的中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗传分 析方法，其特征在于所述扩增COI, Cytb和CR序列的三对引物分别是 LC014 9 0 (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG) 和 HC02198 (TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA)、Fl (CATGCCTGAATAGTAGGAGT)和 Rl (GTGCTCCAATTCAGGTCAAT) 、
4. 按权利要求2所述的中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗。传分 析方法，其特征在于所述EST-SSR微卫星分子标记由系统1和系统2组扩增 7 个 EST-SSR 标记的 7 对引物分别是 NE5 (F:CGTGAATGCTGTAGTGTAAT; R: CACCAGAAATAATGAGGTTT);NE12 (F: ATGACATTGATGCCTGACG; R: TGCCTTTATTGACCGAGAC);NE16 (F: TTTCACATCCTCCACAGACA; R: GCCACAAGTACACCCAATCA);NE27 (F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC);NE46 (F: ACTGCTGTTGTTGGTGGTC; R: CCTTAATCCGTTGCGTCA);NE48 (F: AAAGGTCAGTTAATTTCTTGAT; R: TCTAGTGAAATGACATATTGGT);NE49 (F: AGACCGCTGTTATGCTCCT; R: ATGGGAATGAAGGTTATGTATG); 系统2由6个EST-SSR标记组成，扩增6个EST-SSR标记的6对引物 分别是NE1 (F: CATTCCAAGTCTTGACCCC; R: CAGAGCCACAACACTAACG); NE18(F: TATTCAACATTTCAACAACGAT; R: GACGAGCGAAGAACTGGA); NE23(F: AGAGGCAAATGCGATAAAGA; R: CACGACAGACTTACCAGCAC); NE25(F: AGGAGGTGCGTAAGAGTGA; R: TTTCCTTCCATCCTGAGTC); NE26(F: ACGGGAAATGGAACAGAT; R: TCCTTCCATCCTGAGTCC); NE36 (F: ATGTGGACTGCGGGAGA; R: GTGGTGGTAGGTTCGTCTGT)。
5. 按权利要求2所述的中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗传分 析方法，其特征在于所有引物方向为5'—3'方向。
6. 按权利要求2所述的中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统的遗传分 析方法，其特征在于所述中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统遗传分析 的方法可同时检测成百上千个样品。
全文摘要
本发明涉及水产遗传育种领域，具体说是一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统及遗传分析方法。多元高通量遗传标记系统为线粒体序列信息系统和微卫星分子标记系统，其中微卫星分子标记系统为由7个EST-SSR标记的系统1和6个EST-SSR标记的系统2组成；方法运用线粒体的三对引物扩增COI，Cytb和CR的序列的信息作为分子标记，将混养家系中同一母本和不同母本所产的后代根据遗传结构和遗传多样性分开，再运用EST-SSR微卫星分子标记，将已区分母本的后代根据遗传距离和遗传多样性进行父本的区分，从而完成中华绒螯蟹遗传育种过程中的系谱认证并确认近交系数。本发明在有效利用物种遗传信息的基础上，使用多元高通量遗传标记系统区分子代之间的亲缘关系，同时有效避免近交衰退。
文档编号C12Q1/68GK101613742SQ20091002075
公开日2009年12月30日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者媛 刘, 吴丹华, 崔朝霞, 李倩倩, 王鸿霞 申请人:中国科学院海洋研究所