专利名称：激酶法生产培养用动物血清的方法
技术领域：
本发明属于生物技术与生物制品领域，具体涉及通过给供血动物注射 激酶的关键途径生产出培养用动物血清的方法。
背景技术：
培养用动物血清是生物技术研究及生物制品生产行业必不可少的原辅 材料之一。目前，人们对培养物(尤其是体外培养的动物细胞、组织等) 所需要的营养成分还研究的很不透彻，尤其是对这些培养物生长发育以及 发挥生物学功能所必需的具有生物活性的微量营养成分(如激素、细胞因 子、短链肽类等)更是知之甚少，且单一获取这些物质的成本还极其高昂， 而动物血清一尤其是生长发育早期的动物血清中则大量含有这类物质，因 此在目前情况下，体外培养物质量的好坏与操作者在培养基中所使用的血 清质量的好坏有着极其密切的关系。
培养用动物血清的质量取决于血清中所含有的能刺激细胞生长的微量 细胞因子有效含量、血清营养成分的含量以及其可被细胞利用的程度，而 这些性状一方面与提供血清的动物本身生理机能有着一定的关系，而更主 要的是与血清的获取和加工过程有着极其密切的关系。现行的培养用动物
血清的生产工艺流程如下供血动物(如胎牛、新生牛、兔等)一 无菌 条件下采血一~ 分离血清—作为原料血清暂时冻存—在成品加工厂解;条^
多重粗滤—除菌过滤—灭活或不灭活—检观'"作为成品冻存—解冻使 用。在这样的加工程序中，凝血是必然会出现的过程，在凝血过程中，纤 维蛋白原被分解成纤维蛋白，大量的纤维蛋白相互交联，网络血清中其他
营养成分形成凝血块。凝血块的形成不仅使血清产出量减少约10%，而且
使血清的营养含量一尤其是决定血清营养价值的微量细胞因子的含量大大 降低，但如若采取抗凝方法阻止凝血块形成，则血清中又会保留大量的纤 维蛋白原的大分子物质，这些物质对动物细胞、组织类的体外培养物不仅 没有营养价值，而且会影响培养物的生长、发育与生物学功能的发挥。因 此，采用恰当的技术尽量减少血清中的营养物质参与凝血块形成，尽量使 血清中的大分子蛋白质降解为短链蛋白质将会极大的提高血清对培养物的 营养品质
发明内容
产培养用动物血清的方法，本发明是利用某些激酶激活供血动物体内降解 纤维蛋白的酶体系，以达到尽量减少血清成分参与血凝块的形成，提高血 清营养物质含量，同时降低血清平均分子量、降低血清粘滞度等。
本发明技术方案为A、本发明的技术路线供血动物—静脉推注或肌 肉注射由尿激酶或虫引激酶与肝素或肝素钠组成的混合制剂~^等待一定时 间《血一卡分离血清-—原料血清冻存~^竿冻—多级粗滤"> 除菌过滤 检测—成品血清。
B、 技术路线说明
激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采 血的供血动物运输到采血场地后，称出供血动物的体重并记录其体重；(2 )、 按每公斤体重250-500单位尿激酶或500-1000单位的封l激酶和100单位肝 素或肝素钠的剂量，用无菌注射用水将尿激酶或蚓激酶和肝素或肝素钠配 制成混合注射液，混合注射液体积量根据动物大小按每100公斤体重为30 毫升，将该混合注射液通过静脉推注或肌肉注射方式注射入供血动物体内， 3分钟内注射完成，等待O. 5-l小时，将动物保定在采血架上，按无菌操 作进行颈动脉采血；(3)、将采出的血液分装于离心机的经消毒处理后的离 心杯中，无菌条件下离心分离血清，将分离出的血清分装于容器中，如 玻璃瓶、塑料袋等，作为原料血清放于-2(TC条件下冻存；(4)、当需要精 加工时，将原料血清放置在室温下让其自然解冻，送入血清精加工生产线 上，在无菌条件下，依次通过孔径为1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微 米的滤膜逐级过滤，终端滤出的血清分装于灭菌容器中，如玻璃瓶、塑 料袋等，制得成品血清，成品血清经检测合格后直接使用或冻存备用。
C、 本发明的创新点在供血动物采血之前，先给动物注射用尿激酶或 封l激酶和肝素或者肝素钠配制而成的混合注射液，该注射液能够激活血液 中降解纤维蛋白的酶体系。
本发明的有益效果1、使血清产出率提高10%以上。2、使血清的平 均分子量降低5-10%。 3、使血清的粘滞度降低10%,平均每个滤芯过滤原 料血清的极限量提高30%以上。
具体实施例方式
结合实施例对本发明作进一步的描述。 实施例1
激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采 血的初生奶公牛运输到采血场地后，称出其体重为40公斤；(2)、用注射 器吸取总含量为10000单位的尿激酶浓缩液和总含量为4000单位的肝素钠 浓缩液(此前已将尿激酶和肝素钠按工作浓度配置成10倍的浓缩液)，两者混合于新的试剂瓶中，再补加无菌注射用水至12毫升成为混合注射液， 将该混合注射液通过静脉推注的方式注射入牛体内，3分钟内注射完成，
等待l小时，将牛保定在采血架上，按无菌操作进行颈动脉采血2000ml; (3)、采血管直接将采出的血液分装于离心机的离心杯中，无菌条件下离 心分离得1170 ml原料血清，将分离出的原料血清分装于500ml规格的玻 璃瓶中，放于-20。C条件下冻存；(4)、当需要精加工时，将原料血清从冻 存条件下取出，放置在室温下让其自然解冻，送入血清精加工生产线上， 在无菌条件下，依次通过孔径为1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的 滤膜逐级过滤，终端滤出的血清分装于灭菌血清瓶中，制得1160 ml成品 血清，成品血清直接使用或冻存备用。整个加工过程，成品血清产出率为 58% (相对于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量为61KD。精加工 后的血清的粘滞度为1. 31mpa. s。生产线无换芯极限加工量32万毫升。 实施例2
激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采 血的初生奶公牛运输到采血场地后，称出其体重为40公斤；(2)、用注射 器吸取总含量为20000单位的封l激酶浓缩液和总含量为4000单位的肝素钠 浓缩液(此前已将封l激酶和肝素钠按工作浓度配置成10倍的浓缩液)，两 者混合于新的试剂瓶中，再补加无菌注射用水至12毫升成为混合注射液， 将该混合注射液通过静脉推注的方式注射入牛体内，3分钟内注射完成， 等待1小时，将牛保定在采血架上，按无菌操作进行颈动脉采血2200ml;
(3)、采血管直接将采出的血液分装于离心机的离心杯中，无菌条件下离 心分离得1247ml原料血清，将分离出的原料血清分装于500ml规格的玻璃 瓶中，放于-20。C条件下冻存；(4)、当需要精加工时，将原料血清从冻存 条件下取出，放置在室温下让其自然解冻，送入血清精加工生产线上，在 无菌条件下，依次通过孔径为1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的滤 膜逐级过滤，终端滤出的血清分装于灭菌血清并瓦中，制得1232 ml成品血 清，成品血清直接使用或冻存备用。整个加工过程，成品血清产出率为56%
(相对于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量为64KD。精加工后 的血清的粘滞度为1. 36mpa. s。生产线无换芯极限加工量26万毫升。 实施例3
激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采 血的初生奶公牛运输到采血场地后，称出其体重为40公斤；(2)、用注射 器吸取总含量为40000单位的賴激酶浓缩液和总含量为4000单位的肝素浓 缩液(此前已将圳激酶和肝素按工作浓度配置成10倍的浓缩液)，两者混 合于新的试剂瓶中，再补加无菌注射用水至12毫升成为混合注射液，将该
5混合注射液通过静脉推注的方式注射入牛体内，3分钟内注射完成，等待
0. 5小时，将牛保定在采血架上，按无菌操作进行颈动脉采血得2400ml; (3)、采血管直接将釆出的血液分装于离心机的离心杯中，无菌条件下离 心分离得1355ml原料血清，将分离出的原料血清分装于500ml规格的玻璃 瓶中，放于-20。C条件下冻存；(4)、当需要精加工时，将原料血清从冻存 条件下取出，放置在室温下让其自然解冻，送入血清精加工生产线上，在 无菌条件下，依次通过孔径为1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的滤 膜逐级过滤，终端滤出的血清分装于灭菌血清瓶中，制得1344ml成品血清， 成品血清直接使用或冻存备用。整个加工过程，成品血清产出率为56% (相 对于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量为64KD。精加工后的血 清的粘滞度为1. 36mpa. s。生产线无换芯极限加工量26万毫升 实施例4
激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采 血的初生奶公牛运输到采血场地后，称出其体重为40公斤；(2)、用注射 器吸取总含量为20000单位的尿激酶浓缩液和总含量为4000单位的肝素浓 縮液(此前已将尿激酶和肝素按工作浓度配置成10倍的浓缩液)，两者混 合于新的试剂瓶中，再补加无菌注射用水至12毫升成为混合注射液，将该 混合注射液通过静脉推注的方式注射入牛体内，3分钟内注射完成，等待1 小时，将牛保定在采血架上，按无菌操作进行颈动脉采血2200ml, (3)、 采血管直接将采出的血液分装于离心机的离心杯中，无菌条件下离心分离 得1186ml原料血清，将分离出的原料血清分装于500ml规格的玻璃瓶中， 放于-2(TC条件下冻存；(4)、当需要精加工时，将原料血清从冻存条件下 取出，放置在室温下让其自然解冻，送入血清精加工生产线上，在无菌条 件下，依次通过孔径为1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1樣i米的滤膜逐级 过滤，终端滤出的血清分装于灭菌血清瓶中，制得1276ml成品血清，成品 血清直接使用或冻存备用。整个加工过程，成品血清产出率为58%(相对 于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量为61KD。精加工后的血清 的粘滞度为1. 31mpa. s。生产线无换芯极限加工量32万毫升。
权利要求
1、激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行(1)、当用于采血的供血动物运输到采血场地后，称出供血动物的体重并记录其体重；(2)、按每公斤体重250-500单位尿激酶或500-1000单位的蚓激酶和100单位肝素或肝素钠的剂量，用无菌注射用水将尿激酶或蚓激酶和肝素或肝素钠配制成混合注射液，混合注射液体积量根据动物大小按每100公斤体重为30毫升，将该混合注射液通过静脉推注或肌肉注射方式注射入供血动物体内，3分钟内注射完成，等待0.5-1小时，将动物保定在采血架上，按无菌操作进行颈动脉采血；(3)、将采出的血液分装于离心机的经消毒处理后的离心杯中，无菌条件下离心分离血清，将分离出的血清分装于容器中，作为原料血清放于-20℃条件下冻存；(4)、当需要精加工时，将原料血清放置在室温下自然解冻，送入血清精加工生产线上，在无菌条件下，依次通过孔径为1.2、0.8、0.65、0.45、0.2、0.1微米的滤膜逐级过滤，终端滤出的血清分装于灭菌容器中，制得成品血清。
全文摘要
本发明涉及激酶法生产培养用动物血清的方法，按以下步骤进行称出供血动物的体重，按每公斤250-500单位尿激酶或500-1000单位的蚓激酶和100单位肝素或肝素钠的剂量，用无菌注射用水配制成混合注射液，将混合注射液通过静脉推注或肌肉注射入供血动物体内，等0.5-1小时，按无菌操作进行颈动脉采血；将采出的血液装于离心机的离心杯中，无菌条件下离心分离血清，将分离出的血清分装于容器中作为原料血清放于-20℃条件下冻存；当需要精加工时，将原料血清放置在室温自然解冻，在无菌条件下进行血清精加工，依次通过孔径为1.2、0.8、0.65、0.45、0.2、0.1微米的滤膜逐级过滤，制得成品血清。本发明制得的血清产出率提高10％以上，血清的平均分子量降低5-10％，血清的粘滞度降低10％。
文档编号C12N5/06GK101525591SQ20091006167
公开日2009年9月9日 申请日期2009年4月21日 优先权日2009年4月21日
发明者艳 刘, 敏 向, 钱运国, 陶弼菲, 韦文英, 高其双, 黄海军 申请人:武汉双博亚农业生物科技有限公司