专利名称：：一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用。
背景技术：
：花粉萌发、花粉管生长是种子植物有性生殖的重要环节。种子植物必须依赖花粉管传递精子与卵细胞融合，完成受精作用。花粉管中的代谢活动十分活跃，有很高的蛋白质、脂类和碳水化合物合成速率，这些物质均参与花粉管的顶端扩张和新细胞壁的合成等。花粉管是典型的顶端生长细胞，其生长具有方向性，因而花粉管为实验研究提供了一种特殊的模式系统。有关花粉与花粉管中细胞骨架的研究结果多以被子植物为实验材料观察所得，裸子植物由于与被子植物的进化存在差别，花粉发育和精子产生过程更复杂，涉及几次另外的有丝分裂，因此，裸子植物内细胞骨架的分布也有所不同。微管由a和p两种类型的微管蛋白亚基组成，两种类型的微管蛋白亚基形成微管蛋白二聚体，微管蛋白二聚体是微管装配的基本单位，微管是由微管蛋白二聚体组成的长管状细胞器结构。微管蛋白在植物花粉的萌发和极性生长中具有重要的作用，目前对于微管在花粉萌发和花粉管生长中的作用的研究仅限于蛋白水平，而没有从基因转录调控水平进行研究。
发明内容本发明的目的是提供一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因。本发明所提供的与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白，名称为/V71^/，来源于松科、云杉属的青杆(尸/ceaw7soh/MaW.-尸'maWe^s")，是如下1)或2)的蛋白质1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与花粉萌发和/或花粉管生长相关的由l)衍生的蛋白质。序列表中的序列2由45l个氨基酸残基组成，为了使1)中的PwTUAl便于纯化，3可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表l所示的标签。表l.标签的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述2)中的PwTUAl可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述2)中的PwTUAl的编码基因可通过将序列表中序列1的自5'末端第4-1356位碱基所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5'端和/或3'端连上表1所示的标签的编码序列得到。上述与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白的cDNA基因也属于本发明的保护范围。与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白的cDNA基因具体可为如下l)-4)中任一所述的基因1)其编码序列是序列表中序列i的自5'末端第4-1356位脱氧核糖核苷酸；2)其核苷酸序列是序列表中的序列l;3)在严格条件下可与序列表中序列1限定的DNA序列杂交且编码上述与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白的DNA分子；4)与l)的基因具有90%以上的同源性，且编码上述与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白的DNA分子。所述步骤4)中的基因，与l)的基因最好有95%以上的同源性。序列表中的序列1由1356个碱基组成，其开放阅读框架(0RF)为自5'末端第4-1356位碱基，编码氨基酸序列是序列表中序列2的PwTUAl。上述严格条件可为在6xSSC，0.5。/。SDS的溶液中，在65。C下杂交，然后用2xSSC，0.1%SDS和lxSSC，0.1%SDS各洗膜一次。扩增上述尸w7IM/基因全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。含有上述与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白编码基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系和重组菌也属于本发明的保护范围。可用现有的植物表达载体构建含有尸W7IZ4/基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等，如pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pBI121、pBinl9、pC腦IA2301、pCAMBIA1301-UbiN或其它衍生植物表达载体。携带有本发明与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白编码基因Av71^7的植物表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、基因枪法或农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。被转化的植物宿主既可以是拟南芥等被子植物，也可以是青杆等裸子植物。使用尸w77X4/基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛生素基因Ubiquitin启动子(pUbi)等，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。本发明的另一个目的是提供一种培育花粉萌发和/或花粉管生长速度提高的转基因植物的方法。本发明所提供的培育花粉萌发和/或花粉管生长速度提高的转基因植物的方法，是将上述与花粉萌发和/或花粉管生长相关蛋白的编码基因导入植物中，得到花粉萌发和/或花粉管生长速度提高的转基因植物。所述植物可为拟南芥等被子植物，也可为青杆等裸子植物。本发明从青杆中克隆出Av7I^7基因并将其连接到表达载体上，分别利用基因枪法和农杆菌侵染法将该基因导入青杆花粉和拟南芥花粉中。实验结果表明，所获得的转基因青杆花粉的萌发率可达92.4±12%，所获得的转基因拟南芥花粉的萌发率可达88士6%;转基因青杆花粉管的生长速度可达13.7土1.38um/h，转基因拟南芥花粉管的生长速度可达63.3土8.7um/h。在硼离子和钙离子胁迫环境下，转基因拟南芥花粉管生长速度比野生型或转入空载体的拟南芥花粉管表现出优势。当培养基中含有0.1g/L硼酸时，转入空载体的转基因拟南芥花粉管生长速度为20.0土2.9um/h，转入重组表达载体PBI121-1-ZV7IM7的转基因拟南芥花粉管生长速度为42.7±3.7ym/h;当培养基中含有20mM转离子时，转入空载体的转基因拟南芥花粉管生长速度为16.7土2.3ym/h，转入重组表达载体？81121-1-尸>^71^/的转基因拟南芥花粉管生长速度为35.6士3.1iim/h。将本发明的蛋白在GenBank中进行比对，结果表明，该蛋白与已公布的拟南芥、水稻、棉花和杨树的基因组中的微管蛋白的同源性都比较高，并且该蛋白具有花粉中专一表达的特性。本发明的与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因可用于植物的遗传转化研究，提高植物的花粉萌发率和/或花粉管生长速度、提早开花、提高植物的生殖效率、縮短育种进程，对于生长发育缓慢的木本类植物进行生殖发育调控、基因工程育种、加速木本类植物的遗传改良具有重要的理论及实际意义。图1为Av71^7基因在青杆各组织中的表达情况图2为转入空载体和转入iV7IZ4/基因的青杆花粉萌发率的测定结果图3为转入空载体和转入/VnZ47基因的青杆花粉管生长速度的测定结果图4为转入空载体和转入/V7T^/基因的拟南芥花粉萌发率的测定结果图5为转入空载体和转入iV7IM7基因的拟南芥花粉管增长长度的测定结果具体实施例方式下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例l、与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因/V7I^/的获得1、基因尸w77X47的中间序列的获得于青杆(ZhangLY,LinJX，etal.PlantScience,2007，172:1210-1217.)花序开放的晴天上午，用消毒过的镊子，取下黄色的花粉块，放在白色洁净的纸上，然后放入消毒过的干燥玻璃瓶内，置于室内阴干，再分装于干燥的玻璃瓶内，密封，置于-2(TC冰箱里贮藏备用。提取青杆花粉的总RNA，反转录获得cDNA，以该cDNA为6模板，根据GenBank中已公布的拟南芥、水稻、棉花和杨树的微管蛋白编码基因的高度保守区设计简并引物5，-GATGCHTTCWACACHTTYTTYAG-3，和5'-AGGGCRGCVAGRTCCTCACG-3'，进行PCR扩增。所设计的引物中，H表示A、T或C，W表示A或T，Y表示C或T，R表示A或G，V表示G、A或C。PCR反应条件先94。C预变性5min;然后94""C30sec，56°C30sec，72°Clmin，共35个循环；再72"C延伸5min。回收上述PCR反应产物，进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，结果获得约879bp的条带，即基因iV7IZ47的中间序列。2、3'RACE的获得根据上述步骤1获得的基因/V7T^7的中间序列设计3'RACE引物5，-CTGGAACACACCGATGTGGC-3，，利用3，PCR引物5，-GTATCGATGCCCACCCTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACA陽3，禾口上述3，RACE引物进行PC財广增。PCR反应条件:先94。C预变性5min;然后94。C30sec，62°C30sec，72°Clmin，共35个循环；再72。C延伸5min。回收上述PCR反应产物，进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检湖〖，结果获得约774bp的条带，即基因iV7IM7的3'端序列。3、5'RACE的获得根据上述步骤l获得的基因iV7I^/的中间序列设计5'RACE引物5，國GAACCGAGACCAGAACCAGTTCC-3，，5，PCR弓|物5，-TTCCACCCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGG-3，和上述5，RACE弓I物进行PCR扩增。PCR反应条件:先94。C预变性5min;然后94。C30sec，62°C30sec，72°Clmin，共35个循环；再72"C延伸5min。回收上述PCR反应产物，进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，结果获得约452bp的条带，即基因/V7I/^的5'端序列。4、全长7Vr047基因cDNA序列的获得为获得全长尸w7I^/基因的cDNA序列，分别在步骤3和步骤2扩增出的5'RACE和3'RACE序列两端设计引物5'-ATGAGAGAGTGCATCTCGATCCAC-3'禾口5'-TCAGTACTCGCCTCCCTCATCACC-3'，以青杆花粉cDNA为模板进行PC財广增。7PCR反应条件:先94。C预变性5min;然后94。C30sec，56°C30sec，72°C卯sec，共35个循环；再72'C延伸5min。回收上述PCR反应产物，进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，结果获得1356bp的条带，回收该条带连入pMD18-T克隆载体中并进行序列测定。测序结果表明，获得的全长iV7IZ47基因的核苷酸序列如序列表中序列l所示，其编码的氨基酸序列如序列表中序列2所示。利用BLAST软件对上述获得的全长/V7I/力基因与GenBank中己公布的拟南芥、水稻、棉花和杨树的微管蛋白的编码基因进行同源性比较，结果表明，其同源性为分别为88.47%、96.9%、97.78%和99.78%。。实施例2、通过半定量RT-PCR分析iV77X47基因的组织表达特异性分别提取青杆花粉、针叶、树皮和根组织的RNA，反转录合成cDNA;然后分别以上述各组织的cDNA为模板，以5'-TGCATGATCTCCAATTCGAC-3'禾口5'-GCACTGTTCTCAACATGAAG-3，为引物进行PCR扩增，检测尸wra4/基因在青杆不同组织中的表达情况。同时以EFl-a基因作为内参，扩增EFl-a基因的5'引物为5，-AACTGGAGAAGGAACCCAAG-3，，3'引物为5，-AACGACCCAATGGAGGATAC陽3'。PCR反应条件先94。C预变性5min;然后94。C10sec，56°C10sec，72°C20sec，共28个循环；再72"C延伸5min。iV7I^/基因在各组织中的表达情况如图l所示。结果表明，只有花粉中有iVr"47基因的表达，而其他组织中没有该基因。实施例3、培育花粉萌发率和花粉管生长速度高的转基因青杆花粉和拟南芥1、表达载体的构建将质粒PBI121(购自Clontech公司)和含有Lat52启动子的质粒pLat52-7(DavidTwell,RodWing，JudyYamaguchietal.Isolationandexpresstionofananther-specificgenefromtomato,MolGenGenet,1989,217:240245;DavidTwell,TheodoreMKlein,MichaelEFrommetal.Transientexpressionofchimericgenesdeliveredintopollenbymicroprojectilebombardment.PlantPhysiol,1989,91:12701274.)分别用限制性内切酶州'^////和5"附7//进行双酶切，然后将酶切产物相连接获得重组载体PBI121-1;取2nl上述实施例l获得的7V7I^/基因与pMD18-T载体相连接，操作步骤按照Promega公司产品pMD18-TVectorsystem的说明书进行；将获得的连接产物用限制性内切酶^al和SamM进行双酶切，酶切产物与经相同酶切的质粒PBI121-1相连接；连接产物转化大肠杆菌DH5oc感受态细胞，并涂布在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-卩-D-半乳糖苷、X-gal和100ug/ml氨苄青霉素的LB平板上培养过夜。挑取白色单菌落，在LB液体培养基中培养过夜并进行菌落PCR鉴定；同时碱法提取质粒DNA进行序列测定。测序结果表明，尸w7I^7基因已正确连接到质粒PBI121-l上，将得到的重组表达载体命名为PBI121-l-尸w77X^。2、基因枪法瞬时转化/V7I^/基因于青杆花粉中以及转基因花粉萌发率和花粉管生长速度的测定将青杆花粉用培养基(含有15%质量百分含量蔗糖、0.03%质量百分含量硝酸钙、0.01X质量百分含量硼酸和5mM柠檬酸-磷酸缓冲液，pH5.8)悬浮培养于培养皿中部，形成直径2cm的圆斑。分别将lug、2.5ug和5ug的上述步骤l构建的重组表达载体PBI121-l-Av7I^/用钨粉包裹后，利用PDS-1000/He基因枪(购自美国Bio-Rad公司)轰击上述培养的青杆花粉。同时以未转入任何质粒的青杆花粉和转入质粒PBI121-1的青杆花粉作为对照。将上述基因枪轰击过的青杆花粉在室温(25±1°C)下萌发。荧光显微镜下观察转基因青杆花粉的萌发和生长情况，转入质粒12h和24h时，转基因花粉的萌发率和花粉管生长速度的测定结果如图2和图3所示。其中CK表示未转入任何质粒的青杆花粉，0表示转入质粒PBI121-1的青杆花粉。实验设三次重复。结果表明，转入重组表达载体81121-1-/^71^7的转基因花粉的萌发率提高，萌发率可达92.4±12%;且转基因花粉的花粉管生长速度也明显加快，转基因花粉管的生长速度可达13.7士1.38um/h。3、转基因拟南芥的培育用上述步骤1构建的重组表达载体PBI121-1-PwTUA1转化农杆菌GV3101的感受态细胞，挑取转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的农杆菌的单克隆接种于含50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中，28。C振荡培养两天。将发酵液3000rpm/min离心5分钟，所得农杆菌沉淀用含5。/。蔗糖和0.03。/。SilwetL-77的侵染液悬浮。采用沾花浸染法转化哥伦比亚生态型野生型拟南芥(Col-0)，收获该当代转基因拟南芥植株所接的种子(T!代)，在含有50mg/LGM的MS培养基筛选萌发的种子。将在上述培养基上萌发的Ti代幼苗移到培养土中，收获种子(T2代)，然后经相同的筛选过程得到纯合的T3代转基因拟南芥种子。最后将T3代转基因拟南芥种子直接播种到培养土中，长出的丁3代转基因拟南芥植株在长日照条件下生长两周左右开花。同时以未转入任何质粒的野生型拟南芥和转入质粒PBI121-1的T3代转基因拟南芥作为对照。取上述转入质粒PBI121-1的T3代转基因拟南芥和上述T3代转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥的即将开放的花的花药，进行花粉的萌发和培养。将花药在室温下放置2小时，使其失水；然后将花药置于花粉萌发培养基上(花粉萌发培养基的组成为18g/L蔗糖，0.01g/L硼酸，lmM硫酸镁，lmM氯化钙，lmM硝酸钙和0.5g/L琼脂)。6小时后，通过显微镜观察花粉的萌发情况和花粉管的生长情况，测量花粉管的长度。转基因花粉的萌发率和花粉管生长速度的测定结果如图4和图5所示。图4中，WT表示转入质粒PBI121-1的拟南芥，Lat52:PwTUAl表示转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥。图5中，2表示转入质粒PBI121-1的拟南芥，l表示转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥。实验设三次重复。结果表明，转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥花粉的萌发率可达88±6%，花粉管的生长速度可达63.3士8.7tim/h。当培养基中硼酸的浓度为0.1g/L时，即为硼离子胁迫；当培养基中含有lOmM氯化钙和lOmM硝酸钙时，即为钙离子胁迫。硼离子胁迫时，转入质粒PBI121-1的T3代转基因拟南芥花粉管生长速度为20.0土2.9um/h，而转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥花粉管生长速度为42.7士3.7ym/h;钙离子胁迫时，转入质f立PBI121-l的T3代转基因拟南芥花粉管生长速度为16.7土2.3um/h，而转入重组表达载体PBI121-l-PwTUAl的转基因拟南芥花粉管生长速度为35.6士3.1wm/h。序列表〈110〉北京林业大学山东农业大学〈120〉一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用<130〉CGGNARZ92147<160>2〈210〉1〈211〉1356〈212〉DNA<213〉青杆(尸/ceavW&on7Mxyr-T5-wasfe7Ma>r.)<400>1atgagagagtgcatctcgatccacattggtcaggccggtatccaggtcggaaacgcttgc60tgggagctctactgcctcgagcacggcattcagcctgatggccagatgcctagcgataag120accgtcggtggcggagacgatgccttcaacactttcttcagcgaaactggagccggaaag180catgttccccgcgctgtatttgtagatctggagccgacggtcattgacgaggtgcggact240ggtacttaccgtcagcttttccatcctgagcagcttatcagcggcaaggaagatgcggcc300aacaactttgctcgtggtcattacaccattggcaaagaaattgtggacctctgcctcgac360cgtatccggaagctggccgacaactgcacgggtcttcagggattcctcgtcttcaacgca42011gtcggtggaggaactggttc"tggtxtcggttxcctcttactggaacgtctttcagtggat480tacggcaaaaaatccaaacttggattcactgtgtatccatcaccacaggtctcaacttcg540gtcgttgagccgtataacagcgttctttctacgcattctcttctggaacacaccgatgtg600gccgttctcctcgataatgaagcgatttacgacatttgccgtcgttctttggacattgaa660cgtcccacatacacaaatctgaaccgacttgtctcacaggtcatttcttcattgaccgcg了20tccctccgatttgacggtgccttgaatgtcgatgtaacggagttxcaaacaaacttggt:c780ccgtatccccgaatccactttatgctttcgtcttatgcccctgtgatctctgcagaaaag840gcctaccatgagcagctttctgtggcagaaattacaaacagcgcattcgagccgtcctcc900atgatggccaagtgcgatcct:cgccacggcaaatacatggcctgctgtctgatgtaccgc960ggagatgtcgtgcccaaggatgtcaatgccgccgtagcaaccattaagacgaagagaacc1020attcagtttgttgattggtgccccacaggattcaagtgcggaatxaattatcagcctccc1080accgttgttcccggSLggcgatctcgccaaggttcagagagccgtgtgcatgatctxcaat1140tcgaccagtgttgcagaggtgttctcgagaatcgatcataagttcgatctcatgtatgcc1200aaacgagcattcgttcattggtatgtgggcgagggtatggaagagggtgagttttctgag1260gcgcgtgaggatctggctgcccttg卿aggattatgaggaggttggcgccgagtctgca1320gaaggagaggaaggtgatgagggaggcgagtactga1356<210〉2<211〉451<212>PRT〈213〉青杆(尸/ceaw〃son',M"W'-尸'wa他ri7'/Ma,.)<400>1MetArgGluCyslieSerlieHislieGlyGinAlaGlylieGinVal151015GlyAsnAlaCysTrpGluLeuTyrCysLeuGluHisGlylieGinPro202530AspGlyGinMetProSerAspLysThrValGlyGlyGlyAspAspAla354045PheAsnThrPhePheSerGluThrGlyAlaGlyLysHisValProArg505560AlaValPheValAspLeuGluProThrVallieAspGluValArgThr6570758013GlyThrTyrArgGinLeuPheHisProGluGinLeulieSerGlyLys859095GluAspAlaAlaAsnAsnPheAlaArgGlyHisTyrThrlieGlyLys100105110GlulieValAspLeuCysLeuAspArglieArgLysLeuAlaAspAsn115120125CysThrGlyLeuGinGlyPheLeuValPheAsnAlaValGlyGlyGly130135140ThrGlySerGlyLeuGlySerLeuLeuLeuGluArgLeuSerValAsp145150155160TyrGlyLysLysSerLysLeuGlyPheThrValTyrProSerProGin165170175ValSerThrSerValValGluProTyrAsnSerValLeuSerThrHis180185190SerLeuLeuGluHisThrAspValAlaValLeuLeuAspAsnGluAla19520020514lieTyrAsplieCysArgArgSerLeuAsplieGluArgProThrTyr210215220ThrAsnLeuAsnArgLeuValSerGinVallieSerSerLeuThrAla225230235240SerLeuArgPheAspGlyAlaLeuAsnValAspValThrGluPheGin245250255ThrAsnLeuValProTyrProArglieHisPheMetLeuSerSerTyr260265270AlaProVallieSerAlaGluLysAlaTyrHisGluGinLeuSerVal275280285AlaGlulieThrAsnSerAlaPheGluProSerSerMetMetAlaLys290295300CysAspProArgHisGlyLysTyrMetAlaCysCysLeuMetTyrArg305310315320GlyAspValValProLysAspValAsnAlaAlaValAlaThrlieLys325330335ThrLysArgThrlieGinPheValAspTrpCysProThrGlyPheLys340345350CysGlylieAsnTyrGinProProThrValValProGlyGlyAspLeu355360365AlaLysValGinArgAlaValCysMetlieSerAsnSerThrSerVal370375380AlaGluValPheSerArglieAspHisLysPheAspLeuMetTyrAla385390395400LysArgAlaPheValHisTrpTyrValGlyGluGlyMetGluGluGly405410415GluPheSerGluAlaArgGluAspLeuAlaAlaLeuGluLysAspTyr420425430GluGluValGlyAlaGluSerAlaGluGlyGluGluGlyAspGluGly435440445GlyGluTyr450权利要求1、一种蛋白，是如下1)或2)的蛋白质1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与花粉萌发和/或花粉管生长相关的由1)衍生的蛋白质。2、权利要求l所述蛋白的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述蛋白的cDNA基因为如下l)-4)中任一所述的基因1)其编码序列是序列表中序列i的自5'末端第4-1356位脱氧核糖核苷酸；2)其核苷酸序列是序列表中的序列l;3)在严格条件下可与序列表中序列1限定的DNA序列杂交且编码权利要求1所述蛋白的DNA分子；4)与l)的基因具有90X以上的同源性且编码权利要求1所述蛋白的DNA分子。4、含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体。5、含有权利要求2或3所述基因的表达盒。6、含有权利要求2或3所述基因的转基因细胞系。7、含有权利要求2或3所述基因的重组菌。8、扩增权利要求2或3所述基因的全长或任一片段的引物对。9、一种培育花粉萌发和/或花粉管生长速度提高的转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述的编码基因转入植物中，得到花粉萌发和/或花粉管生长速度提高的转基因植物。10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述植物为拟南芥或青杆。全文摘要本发明公开了一种与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因与应用。该蛋白，是如下1)或2)的蛋白质1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与花粉萌发和/或花粉管生长相关的由1)衍生的蛋白质。本发明的与花粉萌发和/或花粉管生长相关的蛋白及其编码基因可用于植物的遗传转化研究，提高植物的花粉萌发率和/或花粉管生长速度、提高植物的生殖效率、缩短育种进程，对于生长发育缓慢的木本类植物进行生殖发育调控、基因工程育种、加速木本类植物的遗传改良具有重要的理论及实际意义。文档编号C12N1/00GK101503468SQ20091007989公开日2009年8月12日申请日期2009年3月13日优先权日2009年3月13日发明者于彦丽,张凌云,李彦泽,郑成超申请人:北京林业大学;山东农业大学