专利名称：一种鱼骨生物活性多肽钙粉及制备方法
技术领域：
本发明属于功能食品或食品添加剂领域，具体涉及一种鱼骨生物活性多肽钙粉及
制备方法。
背景技术：
鱼骨含有各种营养成分，主要为蛋白质和矿物盐等，其中80%蛋白质为胶原及软
骨素，有加强皮层细胞代谢和防止衰老的作用。鱼骨中含有构成人体蛋白质的所有氨基 酸，鱼骨中矿物质含量显著高于其他食品，还含有大量的钙盐、生物活性物质和各种维生
素等，骨骼中钙磷比值近似2 : l是人体吸收钙磷的最佳比例。鱼骨为鱼体重量的5 15%，但是目前大多数鱼骨没有得到很好的利用，其价值没有得到体现.因此，将对鱼骨 进行综合利用，不仅可以挖掘鱼骨这一食品资源的巨大潜力，创造一个新的经济增长点， 从而带动水产品精深加工的发展，增加农民收益，推动水产品加工产业的发展，还可以减 少鱼骨对环境污染。关于对动物骨类产品的研究开发已有一定的研究报道，如淡水鳗鱼 脊骨开发的高营养产品(CN 200710004109. 2)，一种速溶骨钙粉组合物的生产方法及其 产品(CN 01142106. l)，动物骨头与骨髓的加工方法(CN01107310. l)，一种高钙蛋白食 品制品的制备方法(CN 2010050699. 7)，一种利用斑点叉尾鮰鱼骨制备骨泥的方法(CN 200810235213. 7)，鲅鱼骨生物钙保健食品及其制作工艺(CN 02107276. 0)，利用罗非鱼骨 生产活性钙的加工工艺(CN 200410015161.4)。尽管目前对鱼骨的加工利用和产品开发已 有一定的研究报道，但是对大宗淡水鱼，尤其是黑鳢、草鱼、鲤鱼鱼骨方面的研究还很小报 道。还没有发现通过生物酶解结合离子化技术生产的鱼骨生物活性多肽钙粉之类物质的报 道。
发明内容
为了提高鱼骨资源的利用价值，本发明的目的在于提供一种鱼骨生物活性多肽钙 粉，该活性钙的生物吸收率高达70%以上。 本发明另一 目的是提供上述鱼骨生物活性多肽钙粉的制备方法。
实现本发明的技术方案如下 —种鱼骨生物活性多肽钙粉，按照如下方法制备 (1)将干净的鱼骨冷冻至_20°C ，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥； (2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1 2 : 1的比例加入水，搅拌3 6分钟，然
后按照复合蛋白酶与鱼骨泥之间1 : 150 300的质量比向鱼骨泥中加入复合蛋白酶，在
35 50°C 、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应2 7h，再在90 95。C下保温3 5min ;
接着在室温、4000 6000g条件下离心6 10min，分别收集上清液和沉淀物； (3)将步骤(2)所得的上清液经过分子量为3 5ku的过滤膜超滤2 3次，收集
过滤液；将过滤液经过浓縮、冷冻干燥10 18h，得到鱼骨蛋白多肽粉； (4)将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；加入1. 2 2倍沉淀物重量的柠檬酸进行活化处理3 6h，烘干，得可溶性钙； (5)将步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均匀，得到鱼骨生物活性多肽钙粉。 上述鱼骨生物活性多肽钙粉步骤(2)中所述的复合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为1 : 1。所述的酶皆可于市场上购买，如木瓜蛋白酶可于广西南宁杰沃利生物制品有限公司购买，中性蛋白酶可于北京东华强盛生物技术有限公司购买。 上述鱼骨生物活性多肽*丐粉步骤(1)中所述的鱼骨是指黑鳢、草鱼、鲤鱼等鱼骨之一种或几种，优选1 3种。其中所述的干净的鱼骨是指鱼骨表面没有残留的鱼肉，可通过去除表面残留的鱼肉、清洗、沥干而得。 上述鱼骨生物活性多肽钙粉步骤(4)中所述的清洗是用水或蒸馏水进行。 上述鱼骨生物活性多肽钙粉的制备方法，包括如下步骤(1)将干净的鱼骨冷冻至-201:，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥； (2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1 2 : 1的比例加入水，搅拌3 6分钟，然
后按照复合蛋白酶与鱼骨泥之间1 : 150 300的质量比向鱼骨泥中加入复合蛋白酶，在
35 50°C 、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应2 7h，再在90 95。C下保温3 5min ;
接着在室温、4000 6000g条件下离心6 10min，分别收集上清液和沉淀物； (3)将步骤(2)所得的上清液经过分子量为3 5ku的过滤膜超滤2 3次，收集
过滤液；将过滤液经过浓縮、冷冻干燥10 18h，得到鱼骨蛋白多肽粉； (4)将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；加入1. 2 2倍沉淀物重量
的柠檬酸进行活化处理3 6h，烘干，得可溶性钙； (5)将步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均匀，得到鱼骨生物活性多肽钙粉。 上述制备方法步骤(2)中所述的复合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它
们之间的质量比为l : 1。所述的酶皆可于市场上购买，如木瓜蛋白酶可于广西南宁杰沃利
生物制品有限公司购买，中性蛋白酶可于北京东华强盛生物技术有限公司购买。 上述制备方法步骤(1)中所述的鱼骨是指黑鳢、草鱼、鲤鱼等鱼骨之一种或几种。
所述的干净的鱼骨是指鱼骨表面没有残留的鱼肉，可通过去除表面残留的鱼肉、清洗、沥干而得。 本发明鱼骨生物活性多肽钙粉可作为食品添加剂或营养食品直接食用。 本发明具有的优点(1)、本发明对鱼骨进行低温粗磨、细磨，较好地保持了鱼骨中
各类物质的功能特性。(2)、本发明先对鱼骨中蛋白采用复合酶解技术制备生物活性多肽，
将多肽分离后，再对鱼骨中的钙通过柠檬酸酸活化制备可溶性钙，使钙的生物吸收率高达
65%以上，同时保持多肽的功能特性。(3)、本发明采用食品级蛋白酶经在温和条件下酶解
获得的骨蛋白多肽粉，其安全性高，无副作用。(4)、本发明所具有抗氧化、免疫调节等作用；
(5)本发明制备方法简便易行，成本低，适于实际操作。
具体实施例方式
实施例1黑鳢和草鱼鱼骨生物活性多肽钙粉的制备
按照如下方法进行 (1)、取冷冻的黑鳢和草鱼鱼骨各500克，共1000克，经解冻、去表面残留的鱼肉、清洗、沥干、共得到950克干净的鱼骨，再冻结至_20°C。 (2)、将950克冻结的黑鳢和草鱼鱼骨进行粗磨、细磨得到鱼骨泥900克，向鱼骨泥中加入水1000克，搅拌3分钟，然后加入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司生产)和中性蛋白酶(北京东华强盛生物技术有限公司生产)以质量比1 : 1混合)5克，在45°C 、 pH为7. 0条件下进行酶解反应5h，再在9(TC下保温4min，在室温、4000g条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物。 (3)、将步骤(2)所得的上清液经过分子量为5ku的过滤膜超滤2次，收集过滤液，再将过滤液进行浓縮、冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限公司)12小时，得到鱼骨蛋白多肽粉72克。 (4)、将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、热风烘干(DHG-9070A，上海一恒科技有限公司)、粉碎处理得到产品165克，经过柠檬酸酸活化处理5小时，再烘干(DHG-9070A，上海一恒科技有限公司)得到可溶性钙106克。 (5)、对步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均
匀，得到鱼骨生物活性多肽*丐粉178克。 鱼骨生物活性多肽钙粉的钙生物吸收率的测定 按照如下方法进行取体重为60 70克的大白鼠20只，在代谢笼内进行，收集每一代谢期的大鼠粪样，用原子吸收分光光度计测定饲料、粪便中的钙含量。计算钙摄入量、粪便排出量，求出钙的吸收率。 钙吸收率=(钙摄入量-粪钙排出量)/钙摄入量X 100%
结果测得上述鱼骨生物活性多肽钙粉的钙的生物吸收率为70% 。
实施例2黑鳢和鲤鱼鱼骨生物活性多肽钙粉的制备 (1)、取冷冻的黑鳢和鲤鱼鱼骨各1000克，共2000克，经解冻、去表面残留的鱼肉、清洗、沥干，共得到1920克鱼骨，再冻结至-2(TC ; (2)、将冻结的黑鳢和草鱼鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥1850克，向鱼骨泥中加入水2500克，搅拌3分钟，再加入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司生产)和中性蛋白酶(北京东华强盛生物技术有限公司生产)以质量比l:l混合)11克，在46°C 、pH为7. 5条件下进行酶解反应5h，再在9(TC下保温4min，在室温、5000g条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物。 (3)、将步骤(2)所得的上清液用分子量为5ku的过滤膜超滤2次，收集过滤液，过滤液经过浓縮、冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限公司)12小时，得到鱼骨蛋白多肽粉150克。 (4)、将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、热风烘干(DHG-9070A，上海一恒科技有限公司)、粉碎处理得到产物335克，经过柠檬酸酸活化处理7小时，再烘干(DHG-9070A，上海一恒科技有限公司)得到可溶性钙216克。 (5)、将步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得到的可溶性钙混合，搅拌均匀，得到鱼骨生物活性多肽*丐粉366克。 按照实施例1所述的方法，测定所得鱼骨生物活性多肽钙粉的钙的生物吸收率为72%。 实施例3黑鳢和草鱼鱼骨生物活性多肽钙粉的制备
按照如下方法进行 (1)、取冷冻的黑鳢和草鱼鱼骨各1000克，共2000克，经解冻、去表面残留的鱼肉、清洗、沥干，共得到鱼骨1910克，再冻结至-2(TC ; (2)、将冻结的黑鳢和草鱼鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥1830克，向鱼骨泥中加入水3500克，搅拌4分钟；再加入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司生产)和中性蛋白酶(北京东华强盛生物技术有限公司生产)以质量比l:l混合)11克，在43°C 、pH为6. 5条件下进行酶解反应5h，再在9(TC下保温3min，在室温、4500g条件下离心5min，分别收集上清液和沉淀物。 (3)、将步骤(2)所得的上清液经过分子量为5ku的过滤膜超滤2次，收集过滤液，过滤液经过浓縮、冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限公司)13小时，得到鱼骨蛋白多肽粉152克。 (4)、将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、热风烘干(DHG-9070A，上海 一 恒科技有限公司)、粉碎处理得到产品320克，经过柠檬酸酸活化处理4小时间后，再烘干(DHG-9070A，上海一恒科技有限公司)得到可溶性f丐210克。 (5)、对步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均匀，得到鱼骨生物活性多肽*丐粉362克。 按照实施例1所述的方法，测定所得的鱼骨生物活性多肽钙粉的钙的生物吸收率为71%。
权利要求
一种鱼骨生物活性多肽钙粉，其特征在于按照如下方法制备(1)将干净的鱼骨冷冻至-20℃，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥；(2)按照水与鱼骨泥之间质量比为1～2∶1的比例加入水，搅拌3～6分钟，然后按照复合蛋白酶与鱼骨泥之间1∶150～300的质量比向鱼骨泥中加入复合蛋白酶，在35～50℃、pH为6.5～7.5条件下进行酶解反应2～7h，再在90～95℃下保温3～5min；接着在室温、4000～6000g条件下离心6～10min，分别收集上清液和沉淀物；(3)将步骤(2)所得的上清液经过分子量为3～5ku的过滤膜超滤2～3次，收集过滤液；将过滤液经过浓缩、冷冻干燥10～18h，得到鱼骨蛋白多肽粉；(4)将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；加入1.2～2倍沉淀物重量的柠檬酸进行活化处理3～6h，烘干，得可溶性钙；(5)将步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均匀，得到鱼骨生物活性多肽钙粉。
2. 按照权利要求l所述的鱼骨生物活性多肽钙粉，其特征在于其步骤(2)中所述的复 合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为1 : 1。
3. 按照权利要求1或2所述的鱼骨生物活性多肽钙粉，其特征在于其步骤(1)中所述 的鱼骨是指黑鳢、草鱼、鲤鱼鱼骨之1 3种。
4. 权利要求1所述的鱼骨生物活性多肽钙粉的制备方法，包括如下步骤(1) 将干净的鱼骨冷冻至-2(TC，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，得到鱼骨泥；(2) 按照水与鱼骨泥之间质量比为1 2 : 1的比例加入水，搅拌3 6分钟，然后按 照复合蛋白酶与鱼骨泥之间1 : 150 300的质量比向鱼骨泥中加入复合蛋白酶，在35 5(TC、pH为6. 5 7. 5条件下进行酶解反应2 7h，再在90 95"下保温3 5min ;接着 在室温、4000 6000g条件下离心6 10min，分别收集上清液和沉淀物；(3) 将步骤(2)所得的上清液经过分子量为3 5ku的过滤膜超滤2 3次，收集过滤 液；将过滤液经过浓縮、冷冻干燥10 18h，得到鱼骨蛋白多肽粉；(4) 将步骤(2)所得的沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；加入1. 2 2倍沉淀物重量的柠 檬酸进行活化处理3 6h，烘干，得可溶性钙；(5) 将步骤(3)所得的鱼骨蛋白多肽粉和步骤(4)所得的可溶性钙混合，搅拌均匀，得 到鱼骨生物活性多肽钙粉。
5. 按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于其步骤(2)中所述的复合蛋白酶由木 瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它们之间的质量比为1 : 1。
6. 按照权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于其步骤(1)中所述的鱼骨是指黑 鳢、草鱼、鲤鱼鱼骨之1 3种。
全文摘要
本发明公开了一种鱼骨生物活性多肽钙粉及其制备方法，属于功能食品或食品添加剂领域。本发明首先将鱼骨冷冻，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，再加入水搅拌，接着加入复合蛋白酶进行水解，离心，分别收集上清液和沉淀物；将上清液经过过滤膜超滤，再将滤液浓缩、冷冻干燥，得鱼骨蛋白多肽粉；另将沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；及用柠檬酸进行活化处理，烘干，得可溶性钙；将鱼骨蛋白多肽粉和可溶性钙混合，即得到鱼骨生物活性多肽钙粉。本发明使钙的生物吸收率高达65％以上，同时保持多肽的功能特性；其次，本发明采用食品级蛋白酶水解，安全性高，无副作用；本发明方法简便易行，成本低。本发明可作为食品添加剂或营养食品直接食用。
文档编号A23L1/305GK101731666SQ20101010803
公开日2010年6月16日 申请日期2010年2月10日 优先权日2010年2月10日
发明者李敏镇, 罗永康 申请人:鞍山嘉鲜农业发展有限公司