专利名称：一种高温酸性木聚糖酶xyn10j88及其基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种高温酸性木聚糖酶XYN10J88 及其基因、包含该基因的重组载体和应用。
背景技术：
半纤维素是由D-木糖、D-甘露糖、L-阿拉伯糖或D-乳糖以直链或支链聚合而 成的多糖，分子主链可由一种或几种糖基组成，链短且存在侧链，并且具有多样的侧链取代 基，如乙酰基、半乳糖、阿拉伯糖或葡萄糖醛酸残基。与纤维素主链相比，半纤维素的结构 与组成十分复杂。木聚糖主要存在于蕨类、裸子植物和被子植物中，甘露聚糖主要存在于 针叶树中，阿拉伯聚糖、阿拉伯半乳聚糖主要存在于落叶松中，木葡聚糖则主要存在于双子 叶植物中。半纤维素酶是分解半纤维素的一类酶的总称，包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉 伯聚糖酶、阿拉伯半乳糖酶和木葡聚糖酶等。自然界中，木聚糖是许多生物材料半纤维素 的主要组成成分，是半纤维素中最丰富的一种，其主链由吡喃木糖以0_1，4糖苷键连接而 成，聚合度150-200，侧链上具有阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、乙醚、香豆酸、肉桂酸等(Collins et al.FEMS MicrobiologyReviews. 2005，29 :3_23.)。对木聚糖酶的研究已有半个世纪， 主要研究集中在适合于饲料工业、食品工业、制浆造纸工业、能源工业等方面的木聚糖酶， 已经从不同来源的微生物中分离到大量的不同类型不同功能的木聚糖酶。并分离出多种木 聚糖酶基因，已工业化生产多种木聚糖酶产品。其中，大多数木聚糖酶的最适作用PH值在 6. 0 7. 0。酸性木聚糖酶已经引起研究人员的广泛关注，酸性木聚糖酶在饲料行业中的应 用，可以有效破坏木聚糖分子中的共价交联，显著降低阿拉伯木聚糖分子大小，从而降低食 糜的粘度，改善饲料性能，降低因粘度增加而引起的抗营养作用(刘强和冯学琴，动物营养 学报.1999，11 6-11.)在啤酒酿造行业具有潜在的应用前景，在啤酒酿造过程中，不被降 解的阿拉伯木聚糖造成啤酒过滤困难、堵塞过滤膜，增加了啤酒的生产成本和品质，采用酸 性木聚糖酶与葡聚糖酶协同作用，可以解决以上问题。因此，酸性木聚糖酶的产生、纯化、性 质、酸性特征的结构基础及其在饲料加工、酿酒工业、果汁加工、以及能源等领域的应用正 在不断深入。由于不同工业对木聚糖酶性质需求不同，因此，获得新型具有优良特性木聚糖酶 的研究仍具有重大意义。克隆和分离具有高温酸性的木聚糖酶可以更好的应用于饲料、酿 酒，食品工业。
发明内容
本发明的目的是提供一种能高效应用的高温酸性木聚糖酶木聚糖酶。本发明的再一目的是提供编码上述高温酸性木聚糖酶的基因。本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。本发明的另一目的是提供一种制备上述高温酸性木聚糖酶的基因工程方法。
本发明的另一目的提供上述高温酸性木聚糖酶的应用。本发明从瓶霉(Phialophorasp. J88CGMCC 3873)(保藏日期2010 年 5 月 25 号， 保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，中国科学院微生物研究所100101)，其保藏号为CGMCC No. 3873。)中分离得到一种新 的高温酸性木聚糖酶XYN10J88。本发明提供了一种高温酸性木聚糖酶XYN10J88，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所不。SEQ ID NO. 1 MRGLKASLFAYLGTASIVSADGLNVRAQAAGKKYFGTAISTTVLNDATADAIAKNYQDFGQYTCENEMKFDATEPSRNSFSYGSADMIVAQAQADGQIMRCHNLVWHNQVPSWVTDGNFDNATLISIMKNHIANVVGHYKGKCYAWDVGNEALNEDGSYMTSGSVWGSTIGPAYIPIAFAAAAEADPAAKLyYNDYNCEKAGAKSTGAQNLIKMVKSYGAPIHGIQGHFTTGQVGGSSALVS匪QAFTALGVEVAYTELDMATPSSDPDLTQQATDYATVVTSCKQVPDCVGITIWEFSDRYTWLTNSAPLPWDVNFQKKPAYTSILDAWGGSATGSATSTPTTMATSTTTAGPAPSGGGGGCTAAHWAQCGGTGYTGCTTCASPYTCQVSNPYYSQCL其中，该酶基因编码399个氨基酸，N端20个氨基酸为其预测的信号肽序列 "mrglkaslfaylgtasivsa" (SEQ ID NO. 3)。因此，成熟的高温酸性木聚糖酶XYN10J88的理论分子量为40. OkDa,其氨基酸序 列如SEQ ID NO. 2所示DGLNVRAQAAGKKYFGTAISTTVLNDATADAIAKNYQDFGQYTCENEMKFDATEPSRNSFSYGSADMIVAQAQADGQIMRCHNLVWHNQVPSWVTDGNFDNATLISIMKNHIANVVGHYKGKCYAWDVGNEALNEDGSYMTSGSVWGSTIGPAYIPIAFAAAAEADPAAKLyYNDYNCEKAGAKSTGAQNLIKMVKSYGAPIHGIQGHFTTGQVGGSSALVS 匪 QAFTALGVEVAYTELDMATPSSDPDLTQQATDYATWTSCKQVPDCVGITIWEFSDRYTWLTNSAPLPWDVNFQKKPAYTSILDAWGGSATGSATSTPTTMATSTTTAGPAPSGGGGGCTAAHWAQCGGTGYTGCTTCASPYTCQVSNPYYSQCL本发明的木聚糖酶XYN10J88具有好的热稳定性，同时在常温下、酸性和中性的范 围内均具有高活性、抗蛋白酶降解等特性。本发明筛选到Phialophora sp. J88CGMCC 3873 所产生的木聚糖酶，其最适PH值为4. 0，在pH4. 0 7. 0的范围内维持50%以上的酶活性； 最适温度为70°C，在40°C仍具有50%左右的酶活力；用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理120分 钟，酶活性维持在50%以上。本发明提供了编码上述高温酸性木聚糖酶XynlOJ88。具体地，该基因的基因组序 列如SEQ ID NO. 4所示atgcgtggtctcaaagccagcttgttcgcctaccttggcacggcgagcatcgtctcggccgatggcctc aatgttcgcgcgcaggccgcgggaaagaagtactttggcaccgccatcagcaccaccgtcctcaacgacgcgactgcggacgcga tagccaagaactaccaggacttcggacagtacacctgtgagaacgagatgaagttcgacgccaccgagccatccaggaatagc
4ttcagctatggcagcgccgacatgatcgtagcgcaggcgcaagccgacggccagatcatgaggtgccacaaccttgtctggcat aaccaggtgccctcgtgggttaccgacggcaacttcgacaacgcgaccctgatcagcatcatgaagaaccacatcgccaacgt ggtcgggcactacaagggcaagtgctatgcgtgggatgtgggaaacgaggccctgaacgaggacggctcgtacatgacgtctgg ttccgtgtgggggtcgaccatcgggccggcctacatccccatagccttcgcggcggcagcggaggcagacccggcggccaagc tgtactacaacgactacaactgtgagaaggcgggggcaaaatccacgggcgcgcagaacctgatcaagatggtcaagtcgta cggagccccgatccatggcatccaggggcatttcacgaccggccaggtcgggggctcttccgcgctggtgagcaacatgcag gccttcactgccctgggcgtcgaggtggcctataccgagctcgacatggcgacgccgtcatccgacccggatctcacccaacag gctaccgactatgccaccgtggtgacgtcgtgcaagcaggtgccggactgcgtgggcatcacgatctgggaattctcggaccg gtatacgtggctcaccaactcggcgccgctgccgtgggacgtcaatttccagaagaaaccggcgtacaccagcatcctggatgc ttgggggggctcggccacaggcagtgcgacaagcacgccgaccaccatggctaccagcaccaccacggcaggtccggctccct cgggcggagggggcggctgcacggcggcccactgggcgcagtgcggcgggactggatacacgggatgcaccacctgtgcg tccccgtatacctgtcaagtctctaatccctactacagtcagtgtctgtaa本发明通过PCR的方法分离克隆了木聚糖酶基因xynlOJ88，DNA全序列分析结果 表明，木聚糖酶XYN10J88结构基因xynlOJ88全长1200bp。其中，信号肽的碱基序列为ATGCGTGGTCTCAAAGCCAGCTTGTTCGCCTACCTTGGCACGGCGAGCATCGTCTCGGCC(SEQ ID NO. 6) 0成熟的木聚糖酶XYN10J88的基因序列如SEQ ID NO. 5所示。SEQ ID NO. 5gatggcctcaatgttcgcgcgcaggccgcgggaaagaagtactttggcaccgccatcagcaccaccgtc ctcaacgacgcgactgcggacgcgatagccaagaactaccaggacttcggacagtacacctgtgagaacgagatgaagttcga cgccaccgagccatccaggaatagcttcagctatggcagcgccgacatgatcgtagcgcaggcgcaagccgacggccagatca tgaggtgccacaaccttgtctggcataaccaggtgccctcgtgggttaccgacggcaacttcgacaacgcgaccctgatcag catcatgaagaaccacatcgccaacgtggtcgggcactacaagggcaagtgctatgcgtgggatgtgggaaacgaggccctgaac
5gaggacggctcgtacatgacgtctggttccgtgtgggggtcgaccatcgggccggcctacatccccatagccttcgcggcgg cagcggaggcagacccggcggccaagctgtactacaacgactacaactgtgagaaggcgggggcaaaatccacgggcgcgcag aacctgatcaagatggtcaagtcgtacggagccccgatccatggcatccaggggcatttcacgaccggccaggtcgggggct cttccgcgctggtgagcaacatgcaggccttcactgccctgggcgtcgaggtggcctataccgagctcgacatggcgacgccgt catccgacccggatctcacccaacaggctaccgactatgccaccgtggtgacgtcgtgcaagcaggtgccggactgcgtgggca tcacgatctgggaattctcggaccggtatacgtggctcaccaactcggcgccgctgccgtgggacgtcaatttccagaagaaac cggcgtacaccagcatcctggatgcttgggggggctcggccacaggcagtgcgacaagcacgccgaccaccatggctaccagca ccaccacggcaggtccggctccctcgggcggagggggcggctgcacggcggcccactgggcgcagtgcggcgggactggat acacgggatgcaccacctgtgcgtccccgtatacctgtcaagtctctaatccctactacagtcagtgtctgtaa成熟蛋白理论分子量为40. OkDa，将木聚糖酶基因xynlOJ88序列及推导出的氨基 酸序列在GenBank中进行BLAST比对，该基因与来源于Penicillium funiculosum的木聚 糖酶氨基酸序列一致性为49. 5%。说明XYN10J88是一种新的木聚糖酶。本发明还提供了包含上述高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88的重组载体，优选 为pPIC-xynlOJ88。将本发明的木聚糖酶基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之 间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方 案，优选为将本发明的木聚糖酶基因插入到质粒PPIC9上的EcoR I和Not I限制性酶切 位点之间，使该核苷酸序列位于AOXl启动子的下游并受其调控，得到重组酵母表达质粒 pPIC9-xynl0J88o本发明还提供了包含上述高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88的重组菌株，优选所 述菌株为大肠杆菌、酵母菌、芽孢杆菌或乳酸杆菌，优选为重组菌株GS115/XynlOJ88。本发明还提供了一种制备高温酸性木聚糖酶XYN10J88的方法，包括以下步骤1)用上述的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；2)培养重组菌株，诱导重组木聚糖酶表达；以及3)回收并纯化所表达的木聚糖酶XYN10J88。其中，优选所述宿主细胞为毕赤酵母细胞、啤酒酵母细胞或多型汉逊酵母细胞，优 选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞(Pichia ￡1计01^8)63115，得到重组菌株63115/ xynlOJ88。本发明还提供了上述高温酸性木聚糖酶XYN10J88的应用。本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种性质优良的、 适合于在饲料、酿酒、食品工业中应用新的木聚糖酶。本发明的木聚糖酶最适PH为4. 0，在PH4. 0 7. 0都有较高的酶活性；pH稳定性好；具有良好的抗蛋白酶的能力。其耐高温特 性，可使其在需求高温环境的工业生产上应用。本木聚糖酶可应用于饲料工业，有效降低粘 度，消除或降低因粘度增加而引起的抗营养作用。在酿酒工业中，可有效降解可溶性何不可 溶性的阿拉伯木聚糖，有效降低麦芽汁的粘度提高过滤效率澄清啤酒。另外，在白酒、清酒 的酿造中有助于提高发酵效率，提高淀粉利用率，增加酒精的产率。还可以将造纸工业废料 及农业废弃物中的木聚糖可被转化为D-木糖单体，而D-木糖又可被细菌、酵母及真菌转化 成有价值的燃料。因此，本木聚糖酶在能源工业中的应用也显示出其巨大的潜力。
图1重组木聚糖酶的最适pH。图2重组木聚糖酶的pH稳定性。图3重组木聚糖酶的最适温度。图4重组木聚糖酶的热稳定性。
具体实施例方式试验材料和试剂1、菌株及载体本发明从瓶霉(Phialophora sp. J88CGMCC 3873)(保藏日期 2010年5月25号，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，其保藏号为CGMCC No. 3873。) 中分离得到一种新的高温酸性木聚糖酶XYN10J88。毕赤酵母表达载体pPIC9及菌株GS115 购自于Invitrogen公司。2、酶类及其它生化试剂内切酶购自TaKaRa公司，连接酶购自Invitrogen公司。 燕麦木聚糖购自Sigma公司，其它都为国产试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。3、培养基(1)Phialophora sp. J88CGMCC 3873培养基为马铃薯汁培养基1000mL马铃薯 汁，10g葡萄糖，25g琼脂，pH2. 5。(2)大肠杆菌培养基LB(1%蛋白胨、0. 5%酵母提取物、NaCl，pH7.0)。(3) BMGY 培养基1 % 酵母提取物，2 % 蛋白胨，1. 34 % YNB，0. 00004 % Biotin, 1 % 甘油(V/V)。(4)BMMY培养基除以0. 5%甲醇代替甘油，其余成份均与BMGY相同，pH4. 0。说明以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验 指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书 进行。实施例1 瓶霉 Phialophora sp. J88CGMCC 3873 产酶特性将来源于云南铀矿废水样品经富集培养后(富集培养基(NH4)2S04 5g/L，KH2P04 lg/L, MgS04 7H20 0. 5g/L, FeS04 7H20 0. Olg/L, CaCl2 0. 2g/L,玉米芯粉 0. 5 %，麸皮 0.5%，pH2. 5)，按常规稀释后涂布于产酶培养基((NH4) 2S04 5g/L，KH2P04 lg/L, MgS04 7H20 0. 5g/L，FeS04.7H20 0. Olg/L, CaCl2 0. 2g/L，木聚糖 1 %，1. 5%琼脂糖，pH 2.5)平板上， 30°C培养5 6d，挑取产生透明圈菌落在产酶培养基平板划线分离，重复划线分离过程3轮，使菌株纯化。通过此方法筛选到该分泌木聚糖酶的菌株。产透明圈最大的菌株经划线 分离纯化后定名为J88，经18SrDNA鉴定该菌株为瓶霉，命名为Phialophora sp. J88。实施例2瓶霉Phialophora sp. J88CGMCC 3873木聚糖酶编码基因xynlOJ88的克 隆提取瓶霉Phialophora sp. J88CGMCC 3873 基因组 DNA 将液体培养3天的菌丝体用无菌滤纸过滤放入研钵中，加入2mL提取液，研磨 5min，然后将研磨液置于50mL离心管中，65°C水浴锅裂解20min，每隔IOmin混勻一次，在 4°C下IOOOOrpm离心5min。取上清于酚/氯仿中抽提除去杂蛋白，再取上清加入等体积异 丙醇，于室温静置5min后，4°C下IOOOOrpm离心lOmin。弃上清，沉淀用70%的乙醇洗涤两 次，真空干燥，加入适量TE溶解，置于-20°C备用。根据第十家族木聚糖酶基因的保守(WDVVNE和I (L)TELDI)序列设计合成了简并 引物P1，P2Pl 5' -TGGGACGTSGTSAACGAG-3‘；P2 5' -GGATGTCSAGYTCSGTGA-3‘)。以 Phialophora sp. J88CGMCC 3873 总 DNA 为模板进行 PCR 扩增。PCR 反应参数 为94°C变性5min ；然后94°C变性30sec，45°C退火30sec，72°C延伸lmin，30个循环后72°C 保温lOmin。得到一约348bp片段，将该片段回收后与pEASY_T3载体相连送三博生物技术 有限公司测序。根据测序得到的核苷酸序列，设计上游和下游各三条TAIL-PCR特异性引物设计 方向为需要扩增的未知区域方向，sp2的位置设计在spl的内侧，sp3位于sp2的内侧。每 两个引物之间的距离没有严格规定，引物长度一般22 30nt，退火温度在60 65°C。并 将它们分别命名为uspl，卿2，usp3(上游特异性引物)，dspl, dsp2, dsp3(下游特异性引 物)见表1。表1.木聚糖酶XYN10J88TAIL-PCR特异性引物
引物名称引物序列(5’---3’；)引物长度(bp)usplGTCCACGTCGAATGTAAACTCTTGGCTGAG30usp2CTCGGAATCCATGAGATAGGTGCGCGAG28usp3GATGTGC AAGTTGTAGCATCTGGGCAGATG30dsplCGAAGTACGGAACCGGTTATTGTGATGCTC30dsp2CATGAAGTTTGTCAATGGAACTGTAAGTGAAGTACC36dsp3CAACTCTGGCAAAGGAAACTTGGGCAGC28 通过反向TAIL-PCR得到已知基因序列的侧翼序列，扩增得到产物回收后送三博 生物技术有限公司测序。拼接后XYN10J88木聚糖酶基因全长1200bp，编码399个氨基酸和 一个终止密码子。用 SignalP(http://www. cbs. dtu. dk/services/SignalP)进行分析表明
8N端20个氨基酸为预测的信号肽。预测该基因所编码的成熟蛋白的理论分子量为40. OkDa0实施例3重组木聚糖酶的制备将表达载体pPIC9进行双酶切(EcoR I+Not I)，同时将编码木聚糖酶的基因 xynlOJ88双酶切(EcoR I+Not I)，切出编码成熟木聚糖酶的基因片段与表达载体pPIC9 连接，获得含有Phialophora sp. J88CGMCC 3873木聚糖酶基因xynlOJ88的重组质粒 pPIC-xynlOJ88并转化毕赤酵母GS115，获得重组毕赤酵母菌株GS115/xynlOJ88。取含有重组质粒的GSl 15菌株，接种于300mL BMGY培养液中，30°C 250rpm振荡培 养48h后，离心收集菌体。然后于150mLBMMY培养基重悬，30°C 250rpm振荡培养。诱导72h 后，离心收集上清。测定木聚糖酶的活力。重组木聚糖酶的表达量为43. 6U/mL。SDS-PAGE 结果表明，重组木聚糖酶在毕赤酵母中得到了表达。重组木聚糖的比活为350.6U/mg。实施例4重组木聚糖酶的活性分析DNS法具体方法如下在pH4. 0，70°C条件下，ImL的反应体系包括100 μ L适当的 稀释酶液，900 μ L底物，反应lOmin，加入1. 5mL DNS终止反应，沸水煮5min。冷却后540nm 测定OD值。1个酶活单位(U)定义为在给定的条件下每分钟释放出Iymol还原糖的酶量。实施例5重组木聚糖酶XYN10J88的性质测定1、重组木聚糖酶XYN10J88的最适pH和pH稳定性的测定方法如下将实施例4纯化的重组木聚糖酶在不同的pH下进行酶促反应以测定其最适pH。 底物木聚糖用不同PH的0. lmol/L柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中70°C下进行木聚糖酶活力 测定。结果(图1)表明，重组酶乂￥附町88的最适？!1为4.0，在？!14.0 7.0有50%以上的 相对酶活性。木聚糖酶于上述各种不同PH的缓冲液中37°C处理60min，再在pH4. O缓冲液 体系中70°C下测定酶活性，以研究酶的pH耐性。结果(图2)表明木聚糖酶在pH 3.0-9.0 之间均很稳定，在此PH范围内处理60min后剩余酶活性在70%以上，这说明此酶在酸性和 中性范围内具有较好的PH稳定性。2、木聚糖酶的最适温度及热稳定性测定方法如下木聚糖酶的最适温度的测定为在柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(PH4.0)缓冲液体 系及不同温度下进行酶促反应。耐温性测定为木聚糖酶在不同温度下处理不同时间，再在 70°C下进行酶活性测定。酶反应最适温度测定结果(图3)表明其最适温度为70°C。酶的 热稳定性性试验表明(图4)，XYN10J88有良好的热稳定性，在70°C下温育lh，能保持90% 以上的酶活。3、木聚糖酶的Km值测定方法如下用不同浓度的木聚糖为底物，在柠檬酸_磷酸氢二钠缓冲液(pH4. 0)缓冲液体系 中，70°C下测定酶活性，计算出其在70°C下的Km值。经测定，以可溶性小麦阿拉伯木聚糖和 燕麦木聚糖为底物时的Km值分别为2. 05和2. 31mg/mL,最大反应速度Vmax分别为443. 26和 361. 04 μ mol/min · mg。4、不同金属离子化学试剂对XYN10J88酶活的影响测定如下在酶促反应体系中加入不同浓度的不同的金属离子及化学试剂，研究其对酶活性 的影响，各种物质终浓度为1和5mmol/L。在70°C、pH4. 0条件下测定酶活性。结果表明，大 多数离子和化学试剂在浓度为Immol时重组木聚糖酶的活力没有明显变化。但是Ag+、Hg2+ 几乎可以完全抑制其活力，而SDS也强烈抑制其活力。当Cu2+，Cr3+，Zn2+，Pb2+，和β -巯基
9乙醇浓度为5mmol时可以部分抑制XYN10J88酶活力。5、木聚糖酶抗胃蛋白酶及胰蛋白酶能力测定如下用pH2. 0KC1-HC1缓冲液配制0. lmg/mL胃蛋白酶，pH7. OTris-HCl缓冲液配制 0. lmg/mL胰蛋白酶。取pH2. 0KC1-HC1缓冲液稀释后的0. 5mL纯化的酶液加入0. 5mL胃蛋 白酶，pH7. OTris-HCl缓冲液稀释后的0. 5mL纯化的酶液加入0. 5mL胰蛋白酶混合，蛋白酶 /木聚糖酶(w/w) ^0. 1，37°C保温60和120min取样，在pH4.0及70°C条件下测定酶活性。 实验结果表明木聚糖酶XYN10J88用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理120min后，胰蛋白酶处理后 的XYN10J88的酶活比处理前提高了 27%，胃蛋白酶处理后的XYN10J88的木聚糖酶活性比 处理前降低了 49%。6、重组木聚糖酶的底物特异性该酶除可作用于木聚糖外，对于大麦Avicel、葡聚糖、CMC、Insoluble wheatarabinoxylan也有一定的降解作用(表2)。其对可溶性的小麦阿拉伯木聚糖的降解 能力相对于燕麦木聚糖可以达到169. 2%以上。表2.木聚糖酶XYN10J88底物特异性分析
权利要求
一种高温酸性木聚糖酶XYN10J88，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的高温酸性木聚糖酶XYN10J88，其特征在于，序列SEQIDN0.1在 N端包含信号肽，所述信号肽的序列如SEQ IDN0. 3所示。
3.—种高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88，其特征在于，所述基因编码权利要求1所述 的高温酸性木聚糖酶XYN10J88。
4.如权利要求3所述的高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88，其特征在于，其碱基序列如 SEQ ID NO. 4 或 SEQ ID NO. 5 所示。
5.如权利要求3所述的高温酸性木聚糖酶基因XynlOJ88，其特征在于，所述高温酸性 木聚糖酶基因xynlOJ88包括信号肽基因序列，所述序列如SEQ ID NO. 6所示。
6.包含权利要求3所述高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88的重组载体。
7.包含权利要求3所述高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88的重组载体pPIC-xynlOJ88。
8.包含权利要求3所述高温酸性木聚糖酶基因xynlOJ88的重组菌株。
9.权利要求1所述高温酸性木聚糖酶XYN10J88的应用。
10.瓶霉(Phialophorasp. J88)，其保藏编号为 CGMCC No. 3873。
全文摘要
本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种高温酸性木聚糖酶XYN10J88及其基因和应用。本发明提供了一种来源于瓶霉属Phialophora sp.J88CGMCC No.3873的木聚糖酶XYN10J88，其氨基酸序列如SEQ ID No.1或2所示，且本发明提供了编码上述木聚糖酶的编码基因xyn10J88。本发明的木聚糖酶的具有以下性质最适pH4.0，最适温度70℃，比活为350.6U/mg；良好的蛋白酶抗性，有效的降解小麦阿拉伯木聚糖以及易于工业化发酵生产。做为一种新型的酶制剂，可广泛用于饲料，酿酒、食品、能源工业等。
文档编号C12N1/21GK101892208SQ201010194840
公开日2010年11月24日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者姜小伟, 杨海龙, 林格, 郝名慧 申请人:温州海螺挑战生物工程有限公司