专利名称：检测口腔内细菌的检测器及口腔内细菌的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种能简易测定被检者口腔内细菌数量的检测器及口腔内细菌的检测方法。本申请要求以2009年2月2日在日本提出的特愿2009-021902号专利申请为优
先权，并引用其内容。
背景技术：
众所周知，口腔内细菌会引发牙周病、龋齿、口臭等多种疾病。另外，近年来其作为肺炎的诱因受到关注。诱发肺炎等疾病的病原细菌常存在于口腔内。因此，期望通过口腔护理来保持口腔的清洁，以减少被吸入到肺部的口腔内细菌的数量。一般通过培养法来测定口腔内细菌的数量。即，以消毒棉签等擦拭口腔内部，将其在培养基中扩散、稀释，然后接种培养，统计增殖的菌落数。但是，这种培养方法需要较多的培养基和培养天数，操作复杂，并且需要能够处理细菌的特定设备和技术。因此，作为不需要特定设备或技术的细菌的分析方法，例如专利文献1公开了一种试纸，其含有针对口腔内微生物特有的酶活性的显色酶基质，并公开了将其与可能含有口腔内微生物的试样直接接触，然后滴入显色液，以肉眼观察试纸的显色程度来测定口腔内微生物数量的方法。现有技术文献专利文献1日本特开2005-73650号公报
发明内容
本发明要解决的技术问题但是，由于专利文献1中所记载的方法是通过显色程度的强弱来判断口腔内微生物的数量，因此容易受到测定者的主观影响，易产生判断偏差。另外，众所周知口腔内细菌数量为1 X106f/mL以上时发生肺炎的概率较高，但是难以瞬间判断口腔内细菌的数量是否在1 X IO6个/mL以上。为了既能准确判断，又能瞬间判断，因此需另行准备一个能表示显色酶基质的显色程度与口腔内细菌数量间关系的比色表等来进行对比。但是，例如被测者本人进行判断的情况下，测定时手头必须要有比色表，因此每人均需准备一份比色表，不实用。本发明是鉴于上述问题而完成的，其目的是提供一种不需要与另行准备的比色表进行对比，并且不受测定者主观影响，能够简易测定口腔内细菌数量的检测器及口腔内细菌数量的检测方法。解决技术问题的技术手段为实现上述目的，本发明采用下述技术方案。
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(1)本发明提供一种检测口腔内细菌的检测器，所述检测器具有检测主体，所述检测主体由板体及插入到该板体内的吸水性载体构成；所述吸水性载体可储存因口腔内细菌特有的酶活性而显色的显色酶基质以及口腔内细菌特有的酶；所述板体染有规定颜色，所述规定颜色为所述显色酶基质根据口腔内细菌数量所显现的颜色。(2)在上述(1)中所述的检测器中，优选在所述检测主体的一个面上层叠有透明基材。(3)在上述(1)中所述的检测器中，优选在所述检测主体的一侧面上依次层叠有粘结层和剥离纸。(4)在上述(1) (3)所述的检测器中，所述显色酶基质优选L-亮氨酸-β -萘酰胺盐酸盐和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺盐酸盐。(5)上述(1) (4)所述检测器中所具有的所述板体优选染成以麦克佩斯浓度计测定的品红浓度为0. 35 0. 43的颜色。此时，能够测定公认的发生肺炎的概率较高时的口腔内细菌的数量。(6)上述(1) ( 所述检测器中所具有的所述吸水性载体，也可以含有所述显色酶基质或使该显色酶基质显色的显色液。(7)另外，本发明提供一种口腔内细菌的检测方法，所述方法为将待测试样、显色酶基质及使该显色酶基质显色的显色液滴至所述检测口腔内细菌的检测器的吸水性载体上，使显色酶基质显色，与板体颜色相比较，测定口腔内细菌的数量。(8)本发明还提供一种口腔内细菌的检测方法，所述方法为将待测试样，以及显色酶基质与使该显色酶基质显色的显色液两者中不被所述吸水性载体所含有的一个滴至所述检测口腔内细菌的检测器的吸水性载体上，使显色酶基质显色，与板体颜色相比较，测定口腔内细菌的数量。发明效果通过本发明的检测口腔内细菌的检测器及口腔内细菌的检测方法，不需要另行准备比色表等进行对比，并且不受测定者的主观影响，能够简易测定口腔内细菌的数量。
图1为表示本发明的检测口腔内细菌的检测器的一个实例的立体图。图2为图1的A-A’截面图。图3为表示本发明的检测口腔内细菌的检测器的另一实例的截面图。图4为表示本发明的检测口腔内细菌的检测器的另一实例的立体图。
具体实施例方式以下，对本发明的检测口腔内细菌的检测器进行详细说明。图1、2表示本发明的检测口腔内细菌的检测器(以下只称作“检测器”)的一个实例。该实例所示的检测器1具有检测主体10，所述检测主体10包含板体11及插入到该板体11内的吸水性载体12。另外，图1为检测器1的立体图，图2为图1的A-A’截面图。另外，在图2 4中，与图1相同的结构要素使用相同的附图标记，省略对其的说明。吸水性载体12储存因口腔内细菌特有的酶活性而发生显色的显色酶基质及口腔内细菌特有的酶。吸水性载体12具有吸水性，是能够吸收并包含后述显色酶基质及显色液的载体。 作为这样的载体，可以举例如纸、滤纸、吸水性聚合物、纤维、无纺布、棉等。吸水性载体12的形状不限于图1所示。另外，吸水性载体12的厚度可以与后述板体11的厚度相同。在图1、2所示的板体11的大概中心位置上设有贯通孔，为了固定吸水性载体12 而将其嵌入该贯通孔。对贯通孔的大小或形状无特殊限定，但是当其为圆形时，圆的直径优选5 20mm左右。作为板体11的材质，可以举例如发泡聚苯乙烯、发泡聚乙烯、发泡聚丙烯、发泡聚氨酯树脂、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚氨酯树脂、ABS树脂、丙烯酸树脂、聚碳酸酯等塑料， 纸，木材，金属等。作为板体11的厚度无特殊限定，但优选0. 5 5. 0mm。板体11染有规定颜色，所述规定颜色为根据口腔内细菌数量，所述显色酶基质所显现的颜色。可以至少在板体11的表面染有规定颜色，但是理想情况是在其背面也染有同样的颜色。如果板体11的两面均被染色，就能从检测器1的两面目测检测结果。另外，本发明中所述的“规定颜色”，是指以口腔内细菌诱发的例如肺炎、牙周病、 龋齿、口臭等疾病的发生率较高时的口腔内细菌的数量为基准值，根据该基准值显色酶基质所显现的颜色(基准色)。显色酶基质因酶量(浓度)的不同显色的程度有所不同。通常来说，酶量越大越强，即有显色浓的倾向。另外，口腔内细菌的数量与酶量成正比，因此有显色酶基质显色越强口腔内细菌数量越多的倾向。因此，将板体11染成规定颜色时，可以改变酶浓度来寻找显色酶基质发生显色时的显色程度(色浓度)与酶浓度(或口腔内细菌数量)之间的关系，然后染成与显色酶基质显色程度相匹配的色调。例如，如上所述口腔内细菌数量为IXlO6个/mL以上时发生肺炎的概率较高。因此，以酶浓度相当于口腔内细菌数量为1 X IO6个/mL时显色酶基质所显现的颜色为基准色，将板体11染成该基准色。具体为染成以麦克佩斯浓度计测得的品红浓度为0. 35 0. 43 的颜色。据此，详细说明如后述，但当使用本发明的检测器1检测口腔内细菌数量时，将显色酶基质的显色程度与板体11的颜色相比较，较淡时说明口腔内细菌的数量不足IXlO6 个/mL，显色程度与板体11相同、或者较浓时说明口腔内细菌的数量大于IX IO6个/mL。因此，通过口腔内细菌数量能够瞬间判断是否在肺炎发生率较高的基准值以上。例如板体11可以选定肺炎情况下呈基准色的颜色，并染成该基准色，但是本发明并不局限于此。例如还可以将显色酶基质因各个酶浓度显现的各种颜色呈渐变性地对一个板体进行染色。这样染色的话能够更详细测定口腔内细菌的数量。作为对板体11染色的方法，无特殊限定，可以在形成板体11后在板体11的表面或背面涂布涂料对其进行染色使其呈现规定色调。另外，也可以在板体11的原料中添加颜料使其呈现规定色调，然后形成板体11。图1、2所示的检测器1，在其检测主体10的一个面上，直接或通过粘结层(图中略)层叠有透明基材20。但是，当检测主体10的一个面上层叠有透明基材20时，板体11 的两面都染成规定颜色。作为透明基材20的厚度，无特殊限定，但是优选50 200 μ m。另外，本发明中“透明”是指没有染色，并且能够以目视确认显色酶基质显色时的显色程度的状态。透明基材20直接层叠于检测主体10上时，作为透明基材20的材质，可以例举如丙烯酸树脂、聚氨酯树脂、环氧树脂、缩丁醛树脂、纤维素类树脂等热固性树脂，或聚氨酯丙烯酸酯、环氧丙烯酸酯、聚酯丙烯酸酯、聚醚丙烯酸酯等光固性寡聚物等。另一方面，当透明基材20通过粘结层层叠于检测主体10上时，作为透明基材20 的材质，可以例举如玻璃、塑料薄膜(如玻璃纸、聚烯烃、氯乙烯树脂等)等。另外，作为构成粘结层的粘结剂，除了透明外无其他限定，可以例举如环氧树脂类、聚丙烯树脂类、聚氨酯树脂类等粘结剂。粘结层的厚度优选50 200 μ m。检测口腔内细菌时，以消毒棉签等擦拭口腔内，将待测试样(唾液等)附着于吸水性载体上。通过吸水性载体使待测试样的细菌中所特有的酶与显色酶基质相接触，并且通过显色液使其显色，将其显色程度与板体11的颜色相比较。但是，有时口腔内会残留食品的残渣(即食物残渣)，因此有时食物残渣与唾液等同时被采集包含在待测试样中。将含有食物残渣的待测试样附着于吸水性载体上，使其与显色酶基质相接触发生显色时，与食物残渣相接触的部分易显色较深，因此有时难以判定口腔内实际细菌的数量所引起的显色程度。但是，如图1、2所示，如果检测主体10的另一面层叠有透明基材20，即使待测试样中含有食物残渣也能从透明基材20 —侧以目视确认均一的显色状态，因此更容易进行判断。这是因为，食物残渣难以渗透到吸水性载体12中，因此即使待测试样中含有食物残渣，食物残渣也会残留在吸水性载体12的表面，待测试样中除食物残渣以外的成分则渗透入吸水性载体12中，到达吸水性载体12的背面。吸水性载体12含有显色酶基质或显色液， 即能够使其渗透，因此显色酶基质或显色液也能渗透入吸水性载体12中并能到达其背面。 因此，不仅能够确认显色酶基质在吸水性载体12的表面发生显色的状态，也可以确认在其背面也发生显色的状态，但特别地，食物残渣不能渗透到其背面，因此能够确认均一的显色状态。检测主体10的另一面，相当于吸水性载体12的背面，因此能够从透明基材20 —侧目视检测器1，从而确认显色酶基质均一的显色状态。另外，如果检测主体10的另一面层叠有透明基材20，吸水性载体12可以被更牢固地固定于板体11的贯通孔内。另外，如图3所示，可以在检测主体10的一面上依次层叠粘结层30和剥离纸40 来代替透明基材20。但是，当在检测主体10的一面上依次层叠粘结层30和剥离纸40时， 需将板体11的两面均染成规定颜色。作为构成粘结层30的粘结剂，可以例举如丙烯酸树脂类、橡胶类、聚氨酯树脂类、 聚酯类、硅氧树脂类等粘结剂。作为粘结层30的厚度，无特殊限定，但优选50 200 μ m。
作为剥离纸40，可以使用各种纸(日本纸、牛皮纸等)、织布、无纺布、或塑料薄膜 (如玻璃纸、聚烯烃、氯乙烯树脂等)等。另外，剥离纸40相对于粘结层30的剥离力比检测主体10相对于粘结层30的剥离力小。作为剥离纸40的厚度，无特殊限定，但是优选50 200 μ m。另外，也可以使用市售的双面胶带代替粘结层30与剥离纸40。当检测主体10的一面上层叠有粘结层30和剥离纸40时，在检测时当通过吸水性载体使待测试样中的细菌所特有的酶与显色酶基质相接触后，可以剥离掉剥离纸40露出粘结层30，将检测器1贴附于腕、手、胸、腋下、足等身体的某一部位，将其温热到37°C左右的体温下。其目的是促进酶反应。另外，如果检测主体10的一面上层叠有粘结层30，吸水性载体12会更牢固地固定于板体11的贯通孔中。并且，如果使用透明的粘结剂或透明的剥离纸，能够从粘结层30或剥离纸40 —侧以目视确认均一的显色状态，因此即使待测试样中含有食物残渣也能很容易地进行测定。下面，具体地说明口腔内细菌及显色酶基质。通过革兰氏鉴别，细菌可大体分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。在革兰氏阳性菌中作为口腔内的常驻菌存在最多的细菌是溶血性链球菌。革兰氏阴性菌中包括属于下列属的各种微生物，所述属为拟杆菌属(但除去拟杆菌普通拟杆菌、脆弱拟杆菌)、普氏菌属、韦荣氏球菌属(但除去小韦荣氏球菌)、梭杆菌属、奈瑟菌属、布兰汉球菌属、不动杆菌属、金氏菌属、莫拉克氏菌属、布鲁氏菌属、博德特氏菌属、产碱杆菌属、希瓦氏菌属、假单胞菌属、土壤杆菌属、黄杆菌属、放线杆菌属、巴氏杆菌属、气单胞菌属、心杆菌属、邻单胞菌属、弧菌属、嗜血杆菌属、加德纳菌属、布丘氏菌属 (Buttiauxella)、西地西菌属、枸杞酸杆菌属、爱德华菌属、肠杆菌属、欧文氏菌属、大肠杆菌属、哈夫尼菌属、克雷伯氏杆菌属、克吕沃尔氏菌属、摩根氏菌属、变形杆菌属、普罗威登斯菌属、沙门氏菌属、沙雷氏杆菌属、志贺杆菌属、塔特姆氏菌属或耶尔森氏菌属。在分析这些革兰氏阴性菌时，作为全部革兰氏阴性菌所特有的酶可以使用如丙氨酸氨基肽酶。另一方面，溶血性链球菌包括如化脓链球菌、无乳链球菌、马疫链球菌、无乳链球菌、兽疫链球菌、类马链球菌(Strescoccus equisimilis)、咽峡炎链球菌、豕链球菌、乳房链球菌、猪链球菌、肺炎链球菌、血链球菌、口腔链球菌、麻疹链球菌、牛链球菌、马肠链球菌、变异链球菌或唾液链球菌。在分析这些溶血性链球菌时，作为所有溶血性链球菌所特有的酶可以使用亮氨酸
氨基肽酶。另外，分析革兰氏阳性菌时，作为所有革兰氏阳性菌所特有的酶，可以使用如磷酸酶。磷酸酶是一种存在于大多数的革兰氏阳性菌或一部分革兰氏阴性菌中的酶。显色酶基质是一种与上述酶反应之前不显色、根据酶活性开始显色的化合物。另外，显色时需要有显色液存在。作为这样的显色酶基质，无特殊限定，可以直接使用公知的显色物质，或者使用以酶基质与显色物质相合成形成的合成酶基质。作为显色物质，可以例举如对硝基苯酚、邻硝基苯酚、对硝基苯胺、β -萘胺或他们的衍生物。
作为与显色物质相结合的酶基质，可以例举如L-亮氨酸、L-丙氨酸等。这些酶基质与显色物质相结合时，可以使用公知的技术，例如通过共价键(如肽键、酯键、糖甙键等)结合。另外，也可以使用市售的合成酶基质。在这些显色酶基质中，作为通过革兰氏阴性菌特有的酶(丙氨酸氨基肽酶)活性进行显色的显色酶基质，可以使用如L-丙氨酸β -萘酰胺、L-丙氨酸对硝基苯胺、L-丙氨酸-2-酰胺基吖啶酮、L-丙氨酸4-三氟甲基-7香豆素酰胺醋酸盐、DL-丙氨酸-β -萘酰胺盐酸盐。作为通过溶血性链球菌特有的酶(亮氨酸氨基肽酶)活性进行显色的显色酶基质，可以使用如L-亮氨酸β -萘酰胺、L-亮氨酸对硝基苯胺、L-亮氨酸-2-酰胺基吖啶酮、 L-亮氨酸-7-酰胺基-4-甲基香豆素盐酸盐、L-亮氨酸-β -萘酰胺盐酸盐。作为通过革兰氏阳性菌特有的酶(磷酸酶)活性进行显色的显色酶基质，可以使用如4-甲基伞形酮磷酸酯、4-三氟甲基伞形酮磷酸酯、7-(3-苯基香豆素)磷酸酯、 5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸酯、4-硝基苯-磷酸酯、1-萘基磷酸酯、对硝基苯基磷酸酯、 吡啶基-2-甲氧基-4-(2-硝基乙烯基)-苯基磷酸酯。这些显色酶基质，既可以单独使用一种也可以两种以上合并使用。在这些显色酶基质中，从放置于阴暗处(5°C左右)1年也难以发生显色的角度来看，尤其优选L-亮氨酸 β -萘酰胺盐酸盐和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺盐酸盐。作为使显色酶基质显色的显色液，可以举例如对二甲氨基肉桂醛、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙、1-萘酚-2-磺酸盐等。在本发明的检测器中，可以使吸水性载体事先含有上述显色酶基质或显色液。作为使吸水性载体含有上述显色酶基质或显色液的方法，可以例举如将这些物质在适当的溶剂中溶解，使吸水性载体含有该溶液的方法。此时，使用对显色酶基质及显色液的性能不造成影响的溶剂。具体可以使用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙醇、甲醇、丙酮、二乙醚、丁醇、磷酸缓冲液、三马来酸盐缓冲液、纯净水等。另外，如果吸水性载体同时含有显色酶基质和显色液两者，易造成保存稳定性下降，显色酶基质有时会发生显色。另外，可以在检测器的检测主体上层叠能够剥离的保护膜(但是，当在检测主体的一个面上层叠有透明基材或粘结层等时，在检测主体的另一面上层叠保护膜)。如果层叠有保护膜，可以防止污染物等附着在检测主体上。在检测时，可以剥离保护膜进行使用。另外，如果使保护膜具有剥离、粘附功能，则在检测中或检测后，可以保护好检测主体，尤其可以预防污染物等附着于吸水性载体上。本发明的检测器并不限定于上述形式。例如如图4所示，也可以插入吸水性载体 12，使其与板体11相邻接。本发明的检测器可以通过如下述方式制造。例如制作如图1、2所示的检测器1时，将板体11制成所期望的形状，向板体11的两面涂布涂料进行着色使其呈现规定色调。接着，在板体11的大致中央位置实施穿孔处理，设置贯通孔。另外，准备一个相当于板体11上设置的贯通孔大小的吸水性载体12，将吸水性载体12嵌入板体11的贯通孔中使其固定，制作成检测主体10。
接着，在检测主体10的一个面上，通过粘结层层叠透明基材20，所述粘结层由上述透明粘结剂构成，从而制得检测器1。另外，作为透明基材20的材料，可以使用上述热固性树脂或光固性寡聚物，将这些树脂涂布于检测主体10的一个面上，通过加热或光照使树脂固化形成透明基材20。制作如图3所示的检测器1时，首先，以上述相同的方法制作检测主体10。接着，在检测主体10的一个面上涂布粘结剂，形成粘结层30，在该粘结层30上层叠剥离纸40，得到检测器1。另外，也可以另行准备一张在剥离纸上涂布粘结剂形成粘结层的板体，将其与检测主体10贴合，使粘结层位于内侧，形成检测器1。并且，也可以使用市售双面胶带粘贴于检测主体10的一个面上。但是，此时在双面胶带的单面上贴附有剥离纸。制作如图4所示的检测器1时，将板体11制成所期望的形状，向板体11的两面涂布涂料进行着色使其呈现规定色调。接着，通过粘结剂等粘贴吸水性载体12使其与板体11相邻接，从而制作成检测主体10。接着，与上述方法相同，在检测主体10的一个面上，层叠透明基材20，制得检测器 1。另外，使吸水性载体包含显色酶基质或显色液时，将显色酶基质或显色液溶解于适当的溶剂中形成浓度为0. 01 10质量％的溶液，将吸水性载体浸渍于上述溶液中，使吸水性载体含有该溶液。接着通过自然干燥、送风干燥、减压真空干燥、冷冻干燥等进行干燥。对吸水性载体所含溶液的量无特殊限定，但是例如使用浓度为0. 01 10质量％ 的溶液时，每Ig吸水性载体浸入0. 5 3. Og溶液则浸渍充分。如上所述的本发明的检测器，具有由吸水性载体和染色的板体构成的检测主体。 该板体上染有的颜色为显色酶基质显现的颜色，所述显色酶基质根据口腔内细菌所特有的酶活性显色。显色程度表示口腔内细菌的数量，因此检测时无需另行准备比色卡进行对比， 并且不受检测者的主观影响，可以简单判断口腔内细菌的数量。例如，使用染成品红浓度为 0. 35 0. 43颜色的板体，可以瞬间判断口腔内细菌的数量是否在肺炎发生率较大的基准值以上。下面，说明本发明的检测口腔内细菌的检测方法(以下，简称为“检测方法”)。本发明的检测方法是一种使用上述本发明的检测器判定口腔内细菌数量的方法。 具体地，将待测试样、显色酶基质及显色液滴入检测器的吸水性载体上(但不含有显色酶基质或显色液)，使显色酶基质显色，与板体的颜色相比较判断口腔内细菌的数量。作为待测试样，只要是可能含有作为检测对象的细菌的试样即可，无特殊限定，但可以例举如来源于口腔内的生物试样(唾液、齿垢等)、或口腔内的擦拭液(咽、牙齿、牙缝、 牙龈、舌上、舌下或擦拭这些地方的混合擦拭液、擦拭口腔内整体的擦拭液等)等。待测试样可以采用例如用消毒棉签等用力擦拭口腔内部整体4 5圈左右取得的待测试样。可以将取得的待测试样以直接涂布的方式滴入检测器的吸水性载体中。另外， 也可以将取得待测试样的消毒棉签等浸入例如0. 5mL灭菌磷酸缓冲液或灭菌生理盐水中， 洗出口腔内的擦拭物，以吸管等吸取0. 02 0. 2mL该液体滴入吸水性载体中。另外，也可以通过直接舔舐吸水性载体的方式取得待测试样。例如使用如图4所示的检测器1时，吸水性载体12未被板体11包围，因此易进入口腔内，容易舔舐吸水性载体12。以上述适当的溶剂将显色酶基质稀释到浓度为0. 01 10质量％左右进行使用。 将显色酶基质的稀释液滴入吸水性载体的滴入量优选20 200 μ L0滴入显色酶基质的时机既可以是滴加待测试样之前，也可以是滴加待测试样之后。但是，当直接舔舐吸水性载体取得待测试样时，在采取试样后滴入显色酶基质。将待测试样及显色酶基质滴入吸水性载体后，优选放置5 30分钟使其进行酶反应。此时，如果将其放置于温度保持在30 40°C的保温库中，更有利于酶反应的进行。另外，使用如图3所示的检测器1时，也可以剥离剥离纸40使其露出粘结层30，将检测器1粘贴于腕、手、胸、腋下、足等身体的某一部位，通过体温进行温热。通常以上述适当的溶剂将显色液稀释到浓度为0. 01 10质量％左右进行使用。 将显色液的稀释液滴入吸水性载体的滴入量优选20 100 μ L0对滴入显色液的时机无特殊限定，可以在滴入待测试样及显色酶基质之前滴入， 也可以在滴入待测试样及显色酶基质之后滴入。另外，也可以在滴入待测试样和显色酶基质之间滴入。但当滴入待测试样及显色酶基质之后滴入显色液时，优选滴入待测试样及显色酶基质后放置5 30分钟使其进行酶反应后，滴入显色液。一旦滴入显色液，显色酶基质因待测试样中的口腔内细菌所特有的酶活性发生显色，因此可以将显色程度与板体的颜色进行比较，来判断口腔内细菌的数量。另外，若显色液挥发可能会导致显色酶基质的显色变弱，因此最好在显色后2 10分钟内进行判定。尤其是使用如图1、2所示的检测器1时，能够从透明基材20 —侧以目视确认均一的显色状态，因此即使待测试样中含有食物残渣也能容易地进行判定。另外，使用具有染色成品红浓度为0.35 0.43颜色的板体的检测器进行检测时， 能够瞬间判定口腔内细菌的数量是否在肺炎发生率较高的基准值以上。即，显色酶基质的显色程度与板体颜色相比较淡时，可以判定待测试样的口腔内细菌的数量不足1XIO6个/ mL ；当显色程度与板体颜色相同或较浓时，可以判定口腔内细菌的数量为IX IO6个/mL以上。本发明的检测方法并不限定于上述方式，例如使用吸水性载体含有显色酶基质或显色液的检测器时，可以通过下述方法进行检测。S卩，向检测器的吸水性载体中滴入待测试样，以及显色酶基质与显色液两者中不被所述吸水性载体所含有的一个，使显色酶基质显色，与板体颜色相比较判定口腔内细菌的数量。具体地，当吸水性载体中含有显色酶基质时，首先，将以消毒棉签等取得的待测试样直接涂布于吸水性载体上，或将取得了待测试样的消毒棉签等浸入灭菌磷酸缓冲液或灭菌生理盐水中，洗出口腔内的擦拭物，将该液体滴入吸水性载体中；使待测试样与显色酶基质接触，放置5 30分钟促进酶反应。此时优选将其放置于温度保持在30 40°C的保温库中。接着，向吸水性载体中滴入稀释到浓度为0. 01 10质量％左右的显色液，使显色酶基质显色，将显色的程度与板体的颜色相比较来判断口腔内细菌的数量。另外，也可以在滴入待测试样前将显色液滴入吸水性载体中。另一方面，当吸水性载体含有显色液时，首先，与上述方法相同将待测试样直接涂布于吸水性载体上，或将洗出口腔内擦拭物的液体滴入吸水性载体中。接着，将稀释到浓度为0.01 10质量％左右的显色酶基质滴入吸水性载体中，使待测试样与显色酶基质相接触，放置5 30分钟促进酶反应。随着酶反应的进行显色酶基质发生显色，因此当显色程度不再发生变化时与板体颜色进行比较判定口腔内细菌的数量。另外，也可以在滴入待测试样前将显色酶基质滴入吸水性载体中。如上所述的本发明的检测方法，使用上述本发明的检测器，因此不需要与比色卡等进行对比，并且不受测定者的主观影响，能简单地判断口腔内细菌的数量。例如，使用具有染成品红浓度为0. 35 0. 43颜色的板体的检测器进行检测时，能够瞬间判断口腔内细菌的数量是否在肺炎发生率较高的基准值以上。附图标记说明1 检测口腔内细菌的检测器；10 检测主体；11 板体；12 吸水性载体；20 透明基材；30 粘结层；40 剥离纸。
权利要求
1.一种检测口腔内细菌的检测器，其具有检测主体，所述检测主体由板体及插入到该板体内的吸水性载体构成；所述吸水性载体储存因口腔内细菌特有的酶活性而显色的显色酶基质以及口腔内细菌特有的酶；所述板体染有规定颜色，所述规定颜色为所述显色酶基质根据口腔内细菌数量所显现的颜色。
2.如权利要求1所述的检测口腔内细菌的检测器，其特征在于，在所述检测主体的一个面上层叠有透明基材。
3.如权利要求1所述的检测口腔内细菌的检测器，其特征在于，在所述检测主体的一个面上依次层叠有粘结层和剥离纸。
4.如权利要求1 3任一项所述的检测口腔内细菌的检测器，其特征在于，所述显色酶基质为L-亮氨酸-β -萘酰胺盐酸盐和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺盐酸盐。
5.如权利要求1 4任一项所述的检测口腔内细菌的检测器，其特征在于，所述板体染成以麦克佩斯浓度计测定的品红浓度为0. 35 0. 43的颜色。
6.如权利要求1 5任一项所述的检测口腔内细菌的检测器，其特征在于，所述吸水性载体含有所述显色酶基质或使该显色酶基质显色的显色液。
7.一种口腔内细菌的检测方法，其特征在于，将待测试样、显色酶基质及使该显色酶基质显色的显色液滴至如权利要求1 5任一项所述的检测口腔内细菌的检测器的吸水性载体上，使显色酶基质显色，与板体颜色相比较，测定口腔内细菌的数量。
8.一种口腔内细菌的检测方法，其特征在于，将待测试样，以及显色酶基质与使该显色酶基质显色的显色液两者中不被所述吸水性载体所含有的一个滴至权利要求6所述的检测口腔内细菌的检测器的吸水性载体上，使显色酶基质显色，与板体颜色相比较，测定口腔内细菌的数量。
全文摘要
本发明涉及一种检测口腔内细菌的检测器(1)，其具有检测主体(10)，所述检测主体(10)由板体(11)及插入到该板体(11)内的吸水性载体(12)构成；所述吸水性载体(12)储存因口腔内细菌特有的酶活性而显色的显色酶基质以及口腔内细菌所特有的酶；所述板体(11)染有规定颜色，所述规定颜色为所述显色酶基质根据口腔内细菌数量显现的颜色。本发明还涉及口腔内细菌的检测方法，其通过使用检测口腔内细菌的检测器(1)，测定口腔内细菌的数量。
文档编号C12M1/34GK102300979SQ201080006166
公开日2011年12月28日 申请日期2010年2月1日 优先权日2009年2月2日
发明者椛泽启吾, 黑田英行 申请人:藤仓化成株式会社