专利名称：对化学性和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物及其保健食品的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种保健食品，具体地说，涉及一种对化学性和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物及其保健食品。
背景技术：
当今社会已进入快速发展的高科技时代，人类的生产环境及生活环境日新月异， 给人类社会带来改变的科技手段，在征服自然的同时，亦直接地威胁着人类的生存。肝脏作为机体的一个代谢中心，又是重要的解毒器官，已知其功能多达千多种。从各种途径进入人体内的化学物质最终都要在肝脏内转化或贮留，特别容易弓丨起肝损伤。饮酒、食品中残留的农药、工业及环境污染、药物毒素是造成化学性肝损伤的重要原因。化学性肝损伤的实验室指标主要为血清转氨酶和胆红素的升高、血清白蛋白降低、球蛋白升高、凝血酶原时间延长、血清碱性磷酸酶和谷氨酰转移酶的升高等情况，最终引起不同程度肝细胞坏死、脂肪变性、肝纤维化、肝硬变和癌变。酒精经胃肠道黏膜迅速吸收进入血液，经肝脏代谢成为毒性很强的乙醛。乙醛进入血液，通过黄嘌呤氧化酶转变成为超氧化物，导致脂质过氧化，破坏细胞膜，导致肝损伤。 酒精还能诱导肝脏P450酶活性增高，在肝脏代谢过程中产生大量活性氧(reactive oxygen species，R0S)，引发脂质过氧化，破坏肝细胞的结构和功能。目前也有很多保肝护肝、治疗肝炎的西药，但这些药物往往在护肝的同时其在体内代谢过程又生成损害肝脏的物质，不适合长期服用，难以满足人民群众身体健康的保健需要；而利用传统的中医药来保护肝脏在我国已有悠久的历史，但传统的中药汤剂存在服用不方便，剂量与质量难以控制等弊端。因此利用现代生物技术，研究发现传统护肝中药及药食两用药材的作用机理，结合现代制剂技术，研发适合长期服用的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品具有现实意义。水飞蓟素作为一种治疗急、慢性肝炎的药物，还可以应用于肝硬化，脂肪肝，中毒性肝损伤，酒精、药物及其他因素引起的肝损伤，保护肝脏。迄今为止，还没有国家食品药品监督管理局批准的由水飞蓟素作主要原料的保健食品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供对化学性和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物及其保健食品。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是一种对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，所述组合物由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素8-15%、灵芝提取物10-20%、甘草提取物15-30%、葛根提取物15_20%、 枸杞子提取物15-20%、姜黄提取物12-25%。
一种保健食品，所述保健食品包含所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物。优选的，对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，其重量百分比为水飞蓟素12 %、灵芝提取物15 %、甘草提取物20 %、葛根提取物18 %、枸杞子提取物 15%、姜黄提取物20%。优选的，对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，其重量百分比为水飞蓟素10 %、灵芝提取物15 %、甘草提取物20 %、葛根提取物15 %、枸杞子提取物 15%、姜黄提取物25%。优选的，对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，其重量百分比为水飞蓟素15 %、灵芝提取物10 %、甘草提取物15 %、葛根提取物20 %、枸杞子提取物 20%、姜黄提取物20%。优选的，上述对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，其重量百分比为水飞蓟素8%、灵芝提取物20%、甘草提取物30%、葛根提取物15%、枸杞子提取物15%、姜黄提取物12%。上述对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品的制备方法，具体制备步骤如下取带孢子的灵芝子实体去杂质，粉碎，加20倍量水浸泡，95°C浸提，每次池，连续3 次。合并三次浸提液，60°C真空浓缩，浓缩至比重约为1. 1。浓缩液加3倍体积的95%乙醇沉淀10 12h，离心除去上清液。沉淀物冰冻、真空干燥，即得灵芝提取物。取甘草清洗、干燥、粉碎后回流提取3次(分别加5、4、4倍量水)，每次2h，合并提取液，浓缩至原体积的1/5，过滤，滤液继续浓缩，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得甘草提取物。取葛根清洗、干燥、粉碎后分别加5倍量水回流提取2次，每次池，过滤，合并二次滤液，离心分离，将离心后的滤液浓缩，再加入3倍体积的95%乙醇搅勻，静置，离心，离心后的滤液减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得葛根提取物。取枸杞子清洗、干燥、粉碎后分别加5倍量水在回流提取3次，每次池，过滤，合并三次滤液，60°C真空浓缩，浓缩液加3倍体积的95 %乙醇搅勻，静置，离心后的滤液减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得枸杞子提取物。取姜黄清洗、干燥、粉碎后过40目筛，于80%乙醇中加热回流提取3次，3次的乙醇用量均为原药材重量的6倍，提取时间每次池，合并提取液、滤过，滤液60°C减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得姜黄提取物。取水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物分别过筛，按配方量将各原料配料后混合均勻后装胶囊即得。应用上述制备方法制成的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，每日服用3次，每次服用3粒(0. 25g/粒)。水飞蓟素是从水飞蓟果中提取的一种活性素，由二氢色原酮基团的四个同分异构体组成，其中起药理作用的是水飞蓟宾。首先，水飞蓟宾可以整合于肝细胞膜中，竞争性结合肝细胞膜中的特殊受体，起到稳定肝细胞膜，阻断细胞膜通过该类受体介导的对肝有毒性的物质的摄取，可以维持谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等生理性抗氧化物质的活性；其次，水飞蓟宾进入肝细胞后可与雌二醇受体结合并使其激活，活化的雌二醇受体可增强肝细胞核内RNA聚合酶I的活性，使核糖体RNA转录增多，导致胞浆内核糖体数目增加，从而促进功能性蛋白(酶类)和结构性蛋白的生物合成，再以生物反馈的方式促进细胞DNA的合成， 从而有利于肝细胞的修复和再生；另外，还可清除自由基，减轻其介导的肝细胞损伤和肝组织严炎症，阻止其对肝纤维化的触发，通过下调I型胶原蛋白mRNA含量，抑制纤维增生以及下调金属蛋白酶组织抑制因子一 lmRNA，从而抑制金属蛋白酶组织抑制因子一 1的合成，促进胶原蛋白减退，起到间接和直接抗纤维化作用。灵芝作为传统的滋补品，可明显降低四氯化碳、硫代乙酰胺引起的血清谷丙转氨酶的升高，还能显著减轻四氯化碳、硫代乙酰胺引起的小鼠肝脏脂肪的蓄积，抑制乙醇对肝脏的脂质过氧化损伤，促进肝细胞修复作用，加强肝脏的再生能力，增强肝脏解毒功能，还可通过增强机体的免疫系统功能而对肝炎有辅助治疗作用。甘草主要含甘草酸及黄酮类化合物。甘草类黄酮可显著保护乙醇诱导的肝脏丙二醛(MDA)增加及还原型谷胱苷肽(GSH)的耗竭。还可保护乙醇所致的肝细胞超微结构的损伤；甘草酸可预防四氯化碳及二甲基亚硝胺所致小鼠肝纤维化；甘草酸还可抑制“增毒”的细胞色素P450同工酶活性，减少毒物和致癌物的代谢活化，又能显著诱导II相酶活性，加快毒物和致癌物的排泄。葛根自古以来就用于解酒毒，现代药理研究证明葛根有明显的预防酒醉作用；能有效拮抗酒精引起的肝脂质过氧化损害，饮用葛根提取物能有效地拮抗饮乙醇所引起的肝脏丙二醛(MDA)水平提高；葛根总黄酮可明显的诱导P 450的作用；葛根还可对抗乙醇的降低血清载脂蛋白作用和升高胆固醇及甘油三酯作用。枸杞子具有良好的保肝作用。枸杞多糖能明显抑制CC14所致肝损伤小鼠ALT的升高，增加肝糖元含量，并能明显降低肝中丙二醛的含量，使肝小叶损伤区域缩小，肝细胞中脂滴减少，细胞核增大，RNA及核仁增多；枸杞还对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的抑制有
一定作用。姜黄中的主要活性成分姜黄素是脂质过氧化的强抑制剂，即可抑制肝组织中ROS 的产生，又能清除氧化过程中产生的氧自由基，增强肝脏抗氧化能力，减轻氧应激，从而起到保护肝细胞的作用；姜黄素还可以改善脂肪酸代谢，减少脂肪在肝脏的沉积；姜黄素也可通过抑制核因子KB(NF. KB)的激活及其介导的细胞因子的释放，抑制胶原合成和肝星状细胞活化等作用，从而减轻肝脏炎症和纤维化的发展。所述对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，具有了水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物的综合功能，且相互协同作用，大大提升了单一组分的服用效果，经功能试验证明，对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用，其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明，其中，所涉及的实施例不应被视为对本发明的保护范围的限制。实施例1取带孢子的灵芝子实体去杂质，粉碎，加20倍量水浸泡，95°C浸提，每次池，连续3次。合并三次浸提液，60°C真空浓缩，浓缩至比重约为1. 1。浓缩液加3倍体积的95%乙醇沉淀10 12h，离心除去上清液。沉淀物冰冻、真空干燥，即得灵芝提取物。取甘草清洗、干燥、粉碎后回流提取3次(分别加5、4、4倍量水)，每次池，合并提取液，浓缩至原体积的1/5，过滤，滤液继续浓缩，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得甘草提取物。取葛根清洗、干燥、粉碎后分别加5倍量水回流提取2次，每次池，过滤，合并二次滤液，离心分离，将离心后的滤液浓缩，再加入3倍体积的95 %乙醇搅勻，静置，离心，离心后的滤液减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得葛根提取物。取枸杞子清洗、干燥、粉碎后分别加5倍量水在回流提取3次，每次池，过滤，合并三次滤液，60°C真空浓缩，浓缩液加3倍体积的95 %乙醇搅勻，静置，离心后的滤液减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得枸杞子提取物。取姜黄清洗、干燥、粉碎后过40目筛，于80%乙醇中加热回流提取3次，3次的乙醇用量均为原药材重量的6倍，提取时间每次池，合并提取液、滤过，滤液60°C减压回收乙醇，浓缩液140 160°C喷雾干燥，即得姜黄提取物。取水飞蓟素Wig、灵芝提取物7. ^g、甘草提取物10kg、葛根提取物^ig、枸杞子提取物7. ^g、姜黄提取物IOkg分别过筛，混合均勻后分装胶囊200000粒。实施例2对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素10%、灵芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物15%、枸杞子提取物15%、姜黄提取物25%。制备方法同实施例1。实施例3对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素15%、灵芝提取物10%、甘草提取物15%、葛根提取物20%、枸杞子提取物20%、姜黄提取物20%。制备方法同实施例1。实施例4对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品，由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素8 %、灵芝提取物20 %、甘草提取物30 %、葛根提取物15 %、枸杞子提取物15 %、姜黄提取物12%。制备方法同实施例1。实施例5安全性评价实施例1按GB15193-1994有关规定进行安全性毒理学评价试验，方法及结果如下急性毒性试验称取样品lOOOmg，加蒸馏水至20ml，充分混勻后配置成均勻混悬液，作为受试样品。昆明种小鼠禁食(不禁水)16小时后，选择雌雄小鼠各10只，体重在 18-22克之间，分放于两鼠笼内，同性别小鼠之间体重之差不超过3g，将受试样品采用一次经口灌胃方式对实验动物染毒，灌胃容量按0.%il/20g体重计。观察给样后一周内动物的一般状态、体重变化、中毒症状和死亡情况等。结果试验期间各组动物活动正常，毛色光泽度好，未见任何中毒症状和死亡；雌性小鼠LD5tl > 10000mg/kg，雄性小鼠LD5tl > IOOOOmg/ kg。结论根据急性毒性半数致死剂量分级，属实际无毒级物质。微核试验称取样品5000、2500、1250mg，分别加蒸馏水至20ml，充分混勻后为受试样品。取昆明种小鼠，体重25-30g，将动物随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别作为样品三个剂量组和蒸馏水阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组，采用30小时两次灌胃法，将配制不同浓度样品按0. 4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃，于第二次灌胃后6小时处死动物，取股骨骨髓加小牛血清涂片，进行Giemsa染色，镜检观察，每鼠计数1000个嗜多染红细胞的微核数，计算微核发生率。结果阴性。精子畸形试验称取样品5000、2500、1250mg，分别加蒸馏水至20ml，充分混勻后为受试样品。选择25只昆明种小鼠，雌雄各半，体重在25-35克之间，分成5组，分别作为样品三个剂量组和蒸馏水阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组，将配制不同浓度样品按 0. 4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃，每日一次，连续5天，于第35天后处死动物，取副睾滤液涂片，2%伊红染色，镜检观察每鼠1000个精子的畸形数，计算精子畸形发生率。结果 阴性。Ames试验称取样品lOOOmg，加无菌蒸馏水至20ml，混勻即得高剂量组受试液，吸取上述受试液5. 0,2. 0，1. 0,0. 2ml分别加无菌蒸馏水至IOml作为以下各剂量组的受试液。 选择TA97、TA98、TA100、TA102测试菌株并进行大鼠肝S9的诱导和制备，按GB15193-94标准平板渗入法进行试验。结果阴性。30天喂养试验选择SD大鼠80只，体重60_80g，雌雄各半，分4组，其中3组为试验组，1组为空白对照组。按人体剂量的10倍、50倍、100倍作为实验组将产品制成饲料颗粒单笼喂养，自由饮食，连续喂养30天后，逐只称重，取鼠血进行血液学、生化学检查，处死，大体解剖观察有无明显病变，取肝、肾、脾、性器官等脏器进行称重，计算脏体比，并对这些脏器进行组织病理学检查。结果显示实验动物生长情况良好，血液学检查，生化学检查， 主要脏体比及组织学检查结果与对照组相比，均无明显差异。实施例6对化学性肝损伤的辅助保护作用用本发明制剂且按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)进行了对化学性肝损伤有辅助保护作用的动物功能学试验。受试样品本发明实施例1制剂，水飞蓟素制剂(水飞蓟素含量同实施例1制剂所含水飞蓟素含量)，中药复合制剂(由灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，各组分含量同实施例1制剂)。剂量设计为本发明制剂人体推荐剂量的10倍，即实施例1制剂组0. 375g/kg，水飞蓟素制剂组0. 045g/kg，中药复合制剂组0.33g/kg，另设肝损伤模型组和正常对照组(给予蒸馏水)。样品处理取实施例1制剂0. 375g，水飞蓟素制剂0. 045g,中药复合制剂0. 33g分别加蒸馏水至20ml，使成均勻混悬液，即为供试液。实验动物昆明种小鼠，18_22g，雄性，由复旦大学医学院实验动物部提供的清洁级小白鼠。饲养室温度20-24°C，相对湿度40-70 %。
给样方式灌胃，灌胃容积为0. 4ml/20go实验方法与结果选择健康小鼠50只，随机分为5组，每组10只。各样品组给以样品，对照组和模型组饮用蒸馏水，连续30天。第30天各样品组及模型组用CCL4染毒，剂量Mmg/kg，腹腔注射(i.p)。第31天，5组动物摘眼球取血，离心，取血清。测定如下生化指标血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、白/球蛋白比例(A/G)；并取肝脏进行病理组织学检查。实验结果用Spss软件统计。样品对动物体重的影响如表1所示。表 权利要求
1.一种对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，其特征在于，所述组合物由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素8-15%、灵芝提取物10-20%、甘草提取物15-30%、葛根提取物15-20%、枸杞子提取物15-20%、姜黄提取物12-25%。
2.如权利要求1所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，其特征在于，其重量百分比为水飞蓟素12%、灵芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物 18%、枸杞子提取物15%、姜黄提取物20%。
3.如权利要求1所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，其特征在于，其重量百分比为水飞蓟素10%、灵芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物 15%、枸杞子提取物15%、姜黄提取物25%。
4.如权利要求1所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，其特征在于，其重量百分比为水飞蓟素15%、灵芝提取物10%、甘草提取物15%、葛根提取物 20 %、枸杞子提取物20 %、姜黄提取物20 %。
5.如权利要求1所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物，其特征在于，其重量百分比为水飞蓟素8%、灵芝提取物20%、甘草提取物30%、葛根提取物 15%、枸杞子提取物15%、姜黄提取物12%。
6.一种保健食品，所述保健食品包含如权利要求1-5中任一项所述的对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物。
7.—种如权利要求6所述的保健食品的制备方法，其特征在于，取水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物分别过筛，按配方量将各原料配料后混合均勻。
全文摘要
本发明提供一种对化学性和酒精性肝损伤有辅助保护作用的组合物及其保健食品，所述组合物或保健食品由水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物组成，其重量百分比为水飞蓟素8-15％、灵芝提取物10-20％、甘草提取物15-30％、葛根提取物15-20％、枸杞子提取物15-20％、姜黄提取物12-25％。所述保健食品具有了水飞蓟素、灵芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黄提取物的综合功能，且相互协同作用，大大提升了单一组分的服用效果，经功能试验证明，对化学性肝损伤和酒精性肝损伤有辅助保护作用，其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。
文档编号A23L1/29GK102160637SQ20111000313
公开日2011年8月24日 申请日期2011年1月7日 优先权日2011年1月7日
发明者孔翎, 张连龙, 王继武 申请人:上海健特生命科技有限公司, 上海黄金搭档生物科技有限公司