专利名称：用于dmo的有效靶向的叶绿体转运肽及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物生物技术领域。更具体的说，本发明涉及允许有效加工和定位植物中的麦草畏单加氧酶的叶绿体转运肽的鉴定和用途。相关技术描述DMO (麦草畏单加氧酶)在植物中催化除草剂麦草畏(3，6-二氯-邻茴香酸)降解为无毒的3，6_ 二氯水杨酸(3，6-DCSA)，从而赋予除草剂耐受性。DMO的活性需要用于将电子从NADH向麦草畏转移的两种中间蛋白质还原酶和铁氧还蛋白(美国专利7，022，896 ； Herman等人，200 。然而，转基因植物中的麦草畏耐受性已通过单独用DMO转化得到证明， 表明植物内源性的还原酶和铁氧还蛋白可以在电子转移中代替。参与电子转移的植物铁氧还蛋白位于质体中。因此，为了获得DMO的高效性能并因此获得提高的麦草畏耐受性，需要将DMO靶向至叶绿体。在许多情况下，这种靶向可以通过被称作叶绿体转运肽(CTP)或者质体转运肽的 N-末端延伸的存在而实现。如果表达的多肽将要在植物质体(如叶绿体)中区室化，细菌来源的染色体转基因必须具有与编码表达的多肽的序列相融合的编码CTP序列的序列。因此，将外源多肽定位到叶绿体中通常是借助于将编码CTP序列的多核苷酸序列可操作地连接到编码外源多肽的多核苷酸的5’区域上来完成的。CTP在向质体内转移过程中通过加工步骤被去除。但是，加工效率可能受CTP的氨基酸序列和肽氨基端附近的序列影响。Weeks等人(美国专利7，022, 896)描述了玉米cab_m7信号序列(参见，Becker 等人，1992和PCT WO 97/41228 ；GenBank登记号X53398)和豌豆谷胱甘肽还原酶信号序列 (Creissen等人，1992和PCT WO 97/41228)在将DMO靶向至植物质体方面的潜在用途，但是没有给出关于加工或者靶向效率的数据。含有包括豌豆核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶 (Rubisco)小亚基编码序列的27个氨基酸序列的豌豆核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基(RbcS) CTP，也已经用于将DMO靶向至叶绿体(例如，美国临时申请60/811，152)。然而， 已经在蛋白质印迹(Western blot)分析过程中发现，这种豌豆RbcS CTP产生一个正确加工的DMO蛋白质条带( 38 kDa)，但是还产生一个与DMO和RbcS编码区的27个氨基酸相对应的较大的条带( 41kDa)。额外的氨基酸可能不利地影响DMO的活性。此外，由于 DMO的不完全加工，转基因产品中额外的蛋白质造成监管方面的障碍，为了使产品在政府机构注册的目的，还需要在产品表征方面投入额外的努力，由此增加了产品注册的费用。因此，需要鉴定有效地产生正确加工的DMO的CTP，从而提供完全的DMO活性以及易于表征产品的优点。
发明概述本发明的一方面涉及一种重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的核苷酸序列上的编码叶绿体转运肽的核苷酸序列，其中，该核苷酸序列编码包括选自SEQ ID NOs :1-11的序列的叶绿体转运肽。在某些实施方案中，重组DNA分子包括选自SEQ ID NOs 12-22的核苷酸序列。在某些实施方案中，重组DNA分子包括编码选自SEQ IDNOs :24、沈、28、30、32、34、36、38和40的麦草畏单加氧酶的核苷酸序列。包括与在植物细胞中具有功能的启动子可操作地连接的DNA分子的DNA构建体也是本发明的一方面。另一方面，本发明包括用DNA分子转化的植物细胞，所述DNA分子包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的核苷酸序列上的编码叶绿体转运肽的核苷酸序列，其中，叶绿体转运肽序列选自SEQ ID NOs =I-Il0在某些实施方案中，重组DNA分子包括选自SEQ ID NOs 12-22的核苷酸序列。在某些实施方案中，DNA分子包括编码选自SEQ ID NOs =24,26, 观、30、32、34、36、38和40的麦草畏单加氧酶的核苷酸序列，其中，DNA分子可操作地连接到在植物细胞中具有功能的启动子上。在特定的实施方案中，DNA分子包括选自SEQ ID NOs 23、25、27、29、31、33、35、37 和 39 的核苷酸序列。在某些实施方案中，植物细胞是双子叶植物细胞。在其它实施方案中，植物细胞是单子叶植物细胞。在特定的实施方案中，植物细胞是大豆、棉花、玉米或者油菜籽植物细胞。 本发明也涉及包括这样的细胞的植物组织培养物，涉及包括这样的细胞的转基因种子和转基因植物。在某些实施方案中，转基因种子或者植物是双子叶种子或植物。在其它实施方案中，转基因种子或者植物是单子叶种子或者植物。转基因种子或者植物可以是大豆、棉花、 玉米或者油菜籽种子或者植物。本发明进一步涉及产生耐受麦草畏的植物的方法，包括将重组DNA分子引入植物细胞中，并由其再生植物，所述DNA分子包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的核苷酸序列上的编码叶绿体转运肽的核苷酸序列，其中，编码叶绿体转运肽的序列选自SEQ ID NOs :12-22。在某些实施方案中，重组DNA分子包含编码选自SEQ ID NOs :24,26,28,30, 32、34、36、38和40的麦草畏单加氧酶的核苷酸序列。DNA分子可以可操作地连接到在植物细胞中具有功能的启动子上。该方法可以进一步包括通过将亲本植株与它自身或者第二植株杂交产生耐受麦草畏的植物，其中亲本植株和/或第二植株包括所述DNA构建体，并且耐受麦草畏的植物从所述的亲本植株和/或第二植株遗传了该DNA构建体。一种在植物细胞中表达麦草畏单加氧酶的方法是本发明的进一步的方面，该方法包括将选择的CTP可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的序列上。另一方面，本发明涉及一种在农作物生长环境中控制杂草生长的方法，包括种植这样的植物或其种子，并向农作物生长环境施用有效控制杂草生长的量的麦草畏除草剂。 麦草畏除草剂可以自上方向农作物生长环境施用，由此麦草畏除草剂的量不损伤所述的植物或其种子，却损伤与该植物或其种子基因型相同但是缺乏构建体的植物或者种子。本发明的进一步的方面涉及生产食物、饲料或者工业产品的方法，包括a)获得植物，该植物包括按照5’到3’的方向可操作地连接到编码叶绿体转运肽的核苷酸序列和编码麦草畏单加氧酶的核苷酸序列或其部分上的编码在植物细胞中具有功能的启动子的核苷酸序列；b)从所述植物或其部分制备食物、饲料、纤维或者工业产品。在该方法的某些实施方案中，食物或者饲料是谷物、粗粉、油、淀粉、面粉或者蛋白
4质。在该方法的其它的实施方案中，工业产品是生物燃料、纤维、工业化学品、药物或者营养品 针对出土前(pre emergence)施用麦草畏提供保护的、包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA上的编码叶绿体转运肽的DNA的耐受麦草畏的种子，是本发明的进一步的方面。在某些实施方案中，耐受麦草畏的种子包括编码叶绿体转运肽的核苷酸序列， 例如选自SEQ ID NOs :12-22的核苷酸序列。耐受麦草畏的种子可以进一步包括编码选自 SEQ ID NOs :M、26J8、30、32、34、36、38和40的麦草畏单加氧酶的核苷酸序列。本发明的另一方面涉及提高单子叶植物的直立能力(standability)的方法，包括a)获得并培育通过将亲本植株与它自身或者第二植株杂交产生的植物，其中该亲本植株和/或第二植株包含所述DNA构建体并且耐受麦草畏的植物从所述的亲本植株和/或第二植株遗传了该DNA构建体；b)用麦草畏处理植物。在某些实施方案中，植物是玉米植物。 在其它的实施方式中，可以测量包括支柱根的形状、数量、长度和/或结构、倒伏百分比和产量的与直立能力相关的参数。本发明提供以下实施方案1. 一种重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码选自SEQ ID NOs 1-11的序列。2.如第1项所述的重组DNA分子，其中，所述编码叶绿体转运肽的DNA序列包括选自 SEQID NOs 12-22 的序列。3. 一种重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码选自拟南芥5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶CTP2叶绿体转运肽序列和豌豆核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基叶绿体转运肽序列的序列。4.如第1项所述的重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的 DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码选自 SEQ ID NOs 2-7 的序列。5.如第1项所述的重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的 DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码选自 SEQ ID NO :2、SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 5 的序列。6.如第1项所述的重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的 DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列包括选自 SEQ ID NOs 13-18 的序列。7.如第1项所述的重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的 DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列包括选自 SEQ ID NOs 13,15 和 16 的序列。8.如第1项所述的重组DNA分子，其中，所述编码麦草畏单加氧酶的DNA序列编码选自 SEQ ID NOs :24、26、28、30、32、34、36、38 和 40 的多月太。9.如第8项所述的重组DNA分子，其中，所述DNA序列选自SEQ ID NOs :23、25、 27、29、31、33、35、37 和 39。
10. 一种DNA构建体，其包括与启动子可操作地连接的如第1项所述的DNA分子。11.如第5项所述的DNA构建体，其中，所述启动子选自FMV35S启动子、At. ANTl 启动子、FMV. 35S-EFla启动子、eIF4A10启动子、AGRtu. nos启动子、水稻胞质磷酸丙糖异构酶(OsTPI)启动子、水稻肌动蛋白15基因(0sActl5)启动子和Y _薏苡醇溶蛋白启动子。12.如第10项所述的构建体，其中，所述启动子在植物细胞中是具有功能的。13.用第10项所述的DNA构建体转化的植物细胞。14.如第13项所述的细胞，其中，所述植物细胞是双子叶植物细胞。15.如第13项所述的细胞，其中，所述植物细胞是单子叶植物细胞。16.如第13项所述的细胞，其中，所述植物细胞是大豆、棉花、玉米或者油菜籽植物细胞。17. 一种植物组织培养物，其包含第13项所述的细胞。18.如第17项所述的植物组织培养物，其包含双子叶植物细胞。19.如第17项所述的植物组织培养物，其包含单子叶植物细胞。20.如第17项所述的植物组织培养物，其包含大豆、棉花、玉米或者油菜籽植物细胞。21.用第10项所述的DNA构建体转化的转基因植物。22.如第21项所述的转基因植物，其中，所述植物是双子叶植物。23.如第21项所述的转基因植物，其中，所述植物是单子叶植物。24.如第21项所述的转基因植物，其中，所述植物是大豆、棉花、玉米或者油菜籽植物。25. 一种产生耐受麦草畏的植物的方法，包括将第10项所述的构建体引入植物细胞中，并由其再生包含第10项所述的构建体的植物。26.如第25项所述的方法，进一步包括通过将亲本植株与它自身或者第二植株杂交产生耐受麦草畏的植物，其中，所述亲本植株和/或第二植株包含DNA构建体，并且耐受麦草畏的植物从所述的亲本植株和/或第二植株遗传了 DNA构建体。27. 一种在植物细胞中表达麦草畏单加氧酶的方法，包括将选择的CTP可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的序列上。28. 一种在农作物生长环境中控制杂草生长的方法，包括第20项所述的植物或其种子，并向农作物生长环境施用有效控制杂草生长的量的麦草畏除草剂。29.如第观项所述的方法，其中，所述麦草畏除草剂自上方向农作物生长环境施用。30.如第观项所述的方法，其中，所述麦草畏除草剂的量不损伤第21项所述的植物或其种子，却损伤与第20项所述的植物的基因型相同但是缺乏第10项所述的构建体的植物。31. 一种生产食物、饲料或者工业产品的方法，包括a)获得第21项所述的植物或其部分；和b)从该植物或者其部分制备食物、饲料、纤维或者工业产品。32.如第31项所述的方法，其中，所述食物或者饲料是谷物、粗粉、油、淀粉、面粉或者蛋白质。
33.如第31项所述的方法，其中，所述工业产品是生物燃料、纤维、工业化学品、药物或者营养品。34. 一种针对出土前施用麦草畏提供保护的耐受麦草畏的种子，其包含可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA上的编码叶绿体转运肽的DNA。35.如第34项所述的耐受麦草畏的种子，其中，所述DNA编码选自SEQ ID NOs 1-11的叶绿体转运肽。36.如第35项所述的耐受麦草畏的种子，其中，所述编码叶绿体转运肽的DNA包含选自SEQ ID NOs 12-22的序列。37.如第34项所述的耐受麦草畏的种子，其中，所述DNA编码包含选自SEQID NOs 24J6、28、30、32、34、36、38和40的序列的麦草畏单加氧酶。38. 一种提高单子叶植物的直立能力的方法，包括a)培育通过第沈项所述的方法产生的植物或种子；和b)用麦草畏处理该植物或种子。39.如第38项所述的方法，进一步包括c)测量选自支柱根的数量、形状、长度或结构、倒伏百分比和产量的与直立能力相关的参数。附图简述
图1 :CTP-DM0构建体在DMO的正确加工和提供麦草畏耐受性中的应用。发明详述根据本发明，提供了用于在植物细胞中更有效地表达和向叶绿体转运麦草畏单加氧酶(DMO)多肽的组合物和方法。因此本发明的组合物和方法在增强植物和细胞对除草剂麦草畏的耐受性方面有用。尤其通过用叶绿体转运肽(CTP)将DMO靶向至叶绿体，可以实现提高的DMO表达和对麦草畏的耐受性。然而，令人惊奇的是，本发明人已经发现某些CTP与DMO组合不能很好地发挥功能。例如，一些CTP不能导致足够的蛋白质表达。这包括蛋白质的不正确表达，以及改变大小的蛋白质的产生和不完全的体内活性。这会导致不完全的除草剂耐受性并且使注册审批变得复杂。本发明提供CTP，当该CTP与DMO联合使用时，提供意想不到的益处，包括但不限于提高的转运至叶绿体的水平、在表达DMO的转基因植物中增强的除草剂耐受性、正确大小的蛋白质表达的理想水平和适当的翻译后修饰。当与DMO组合后提供意想不到的益处的 CTP的一个例子是转运肽CTP2，包括SEQ ID NO :4或5的核酸，并且包括编码SEQ ID NOs 15和16的序列。在其它实施方案中，使用豌豆(Pisum sativum)核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基CTP编码序列，例如由SEQ ID NO :2所代表的或者编码SEQ ID NO :13。因此， 包括可操作地连接到CTP2和/或豌豆核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基CTP转运肽编码序列上的DMO编码序列的DNA构建体构成本发明的一个方面，由其编码的蛋白质也构成本发明的一个方面。嗜麦芽假单胞菌O^seudomonas maltophilia)菌株DI6的麦草畏单加氧酶 (Herman等人，2005 ；美国专利公开20030115626 ；GenBank登记AY786443，本文引入其编码 DMO的序列作为参考)催化除草剂麦草畏的解毒。DMO是用于将麦草畏解毒成无毒的3， 6-二氯水杨酸(3，6-DCSA)的三组分体系中的一部分，且如上所述需要还原酶和铁氧还蛋白功能来转移电子。由于参与电子转移的内源性植物铁氧还蛋白定位于质体中，为了获得 DMO的有效活性和例如在双子叶植物中的麦草畏耐受性或者例如在单子叶植物中增强的麦草畏耐受性，优选DMO靶向至质体(例如叶绿体)。测 试叶绿体转运肽(CTP)在将DMO靶向至质体和DMO加工中的效率。与这些CTP 有关的DMO的质体定位和加工从没有或部分到完全不等。发现只有一些CTP允许将DMO完全加工成正确的大小。因此，基于它的蛋白质或者核苷酸序列，任意给定的CTP提供完全和有效的DMO加工的能力是难以预料和出人意料的。此外，也已经在拟南芥中发现，在没有合适的CTP的情况下，几乎没有或者没有 DMO的表达与几乎没有或者没有麦草畏耐受性相关。这表明叶绿体靶向对于麦草畏的解毒进而对于耐受性是重要的。允许有效加工DMO的CTP在将DMO靶向至农作物的质体例如叶绿体方面是有用的，因此提供以下优势完全的DMO活性和对麦草畏的较高的耐受性，以及易于表征产品和降低注册费用。包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA上的编码叶绿体转运肽的DNA的嵌合DNA分子可以通过本领域技术人员熟知的分子生物学方法制备(例如，Sambrook等人， 1989)。本发明提供了可操作地连接到已知的编码DM0(包括表1中列出的那些)的DNA分子上的CTP，用于提高植物中DMO的表达。来自在细胞核中编码的任何基因并且其产物可将多肽靶向至叶绿体的叶绿体转运肽，可以进行DMO有效表达的检测。可以分离或者合成叶绿体转运肽序列。为了在双子叶植物、单子叶植物或者这两者中表达，可以优化编码CTP的核苷酸序列。通过将每一个可操作地连接到DMO编码序列上，测试下面的转运肽JsRbcS-衍生的CIPs (SEQ ID NO 1和 2 豌豆核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基CTP ;Coruzzi等人，1984) ；AtRbcS CTP (SEQ ID NO 3 拟南芥核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基IA CTP ；CTPl ；美国专利5，728，925)； AtShkG CTP (SEQ ID NO 4 拟南芥5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPQ ；CTP2 ；Klee 等人，1987) ；AtShkGZm CTP (SEQ ID NO :5 :CTP2合成的；为单子叶植物表达进行密码子优化；W004009761 的 SEQ ID NO 14) ；PhShkG CTP (SEQ ID NO 6 矮牵牛(Petunia hybrida) EPSPS ;CTP4 ；为单子叶植物表达进行密码子优化；Gasser等人，1988) ；Taffaxy CTP (SEQ ID NO 7 小麦(Triticum aestivum)结合颗粒的淀粉合酶CTP合成的，为玉米表达进行密码子优化Clark 等人，1991) =Osffaxy CTP (SEQ ID NO :8 水稻(Oryza sativa)淀粉合酶 CTP ； Okagaki，1992) ；NtRbcS CTP (SEQ ID NO :9 烟草(Nicotiana tabacum)核酮糖 1，5-二磷酸羧化酶小亚基叶绿体转运肽；Mazur，等人，1985) ；ZmAS CTP (SEQ ID NO 10 玉米(Zea mays)邻氨基苯甲酸合酶α 2亚单位基因CTP ；Gardiner等人，2004)；和RgAS CTP (SEQ ID NO 11 芸香(Ruta graveolens)邻氨基苯甲酸合酶 CTP ；Bohlmann，等人，1995)。编码 SEQ ID NO I-SEQ ID NO 11 的核苷酸序列分别在 SEQ ID NO :12_SEQ ID NO :22 中给出。可能有用的其它转运肽包括玉米cab-m7信号序列(Becker等人，1992 ；PCT WO 97/41228)和豌豆(Pisum sativum)谷胱甘肽还原酶信号序列(Creissen等人，1995 ；PCT WO 97/41228)。具有来自于基因编码区的额外氨基酸的CTP(所述氨基酸是该基因编码区的一部分或与它融合)，例如AtRbcS CTP (其包含转运肽，成熟核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶蛋白的M个氨基酸，然后是转运肽的最后6个氨基酸的重复)，可以被用来产生DM0。ZmAS CTP7也包含来自于基因编码区的额外18个氨基酸。其它CTP也可以用来产生DM0，它们具有来自于基因编码区的额外的氨基酸(例如27个氨基酸)(所述氨基酸是该基因编码区的一部分)，例如I3SRbcS CTP，紧接着是通过克隆方法引入的氨基酸(例如3个氨基酸)。具有较少的编码全长CTP的氨基酸(例如21个氨基酸)的CTPdf^BRgAs CTP，也可以被用来产生DM0。优选地，使用编码全长CTP的核苷酸序列。可以包括一个或者多个核苷酸添加或者缺失，以便于CTP的克隆。这些添加或者缺失可以在其它表达元件和编码区的前面或者后面，导致一个或者多个编码氨基酸的修饰，例如在限制性酶识别位点处或者位于其附近。在一个实施方案中，本发明涉及编码叶绿体转运肽的核酸序列，该叶绿体转运肽与SEQ ID NOs :1-11中的任意一个或者多个多肽序列至少具有70%的同一性，包括与这些序列有至少大约75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或者更高的序列同一性，包括100%的同一性。在特定的实施方案中，所述核酸序列编码与SEQ ID NOs :1-11中的一个相同的叶绿体转运肽。在另一个实施方案中，编码CTP的核酸序列与SEQ ID NOs :12-22中的任意一个或者多个核酸序列具有至少70%的序列同一性，包括与这些序列中的一个或者多个至少有大约75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99%或者更大的序列同一性，包括100%的同一性。这些序列和本文所述的任意其它序列的多肽或者多核苷酸比较和同一性的确定可以如本领域公知的那样进行，例如，使用MEGAlign(DNAMar，Inc.，1228S. Park St.，Madison, WI)，采用缺省参数。这样的软件通过确定相似性或者同一性的程度，匹配相似的序列。通过使用前序列可以将DMO靶向至其它细胞器例如线粒体，以利用存在于该细胞器中的铁氧还蛋白氧化还原系统。或者，通过双靶向肽可以将DMO靶向至叶绿体和线粒体两者，以利用两个铁氧还蛋白氧化还原系统，使工作更加有效。这样的元件是本领域的技术人员已知的。例如，线粒体前序列在Silva Filho等人，(1996)中有描述。编码双靶向肽序列的核酸序列可以从编码下述已知能被靶向至叶绿体和线粒体两者的蛋白质的核苷酸序列中被鉴定出来&ι-ΜΡ (Moberg等人，2003)、谷胱甘肽还原酶(Rudhe等人，2002 ；Creissen 等人，1995)和组氨酰-tRNA合成酶(Akashi等人，1998)。例如，如表1所示，在编码SEQ ID NOs M、26、观、30、32、34、36、38、40多肽的序列中，发现可以用于这方面的DMO编码序列的例子。表1.使用的DMO和DMO变体。
权利要求
1.一种重组DNA分子，其包括可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码SEQ ID NO 6的多肽序列。
2.如权利要求1所述的重组DNA分子，其中，所述编码叶绿体转运肽的DNA序列包括 SEQ ID NO 17的核苷酸序列。
3.如权利要求1所述的重组DNA分子，其中，所述编码麦草畏单加氧酶的DNA序列编码选自 SEQ ID NO :24、26、28、30、32、34、36、38 和 40 的多月太。
4.如权利要求3所述的重组DNA分子，其中，所述DNA序列选自SEQID NO :23、25、27、 29、31、33、35、37 和 39。
5.如权利要求1所述的重组DNA分子，进一步包含启动子。
6.一种转基因植物细胞，其包括包含可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列的重组DNA分子，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码SEQ ID NO 6的序列。
7.—种产生耐受麦草畏的植物的方法，包括将包含可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的DNA序列的重组DNA分子引入植物细胞中，其中， 编码叶绿体转运肽的DNA序列编码SEQ ID NO 6的序列；并由该植物细胞再生包含该重组 DNA分子的植物。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述植物是双子叶植物。
9.如权利要求7所述的方法，其中，所述植物是单子叶植物。
10.一种控制田地中的杂草的方法，包括培育包含重组DNA分子的转基因植物，该重组DNA分子包含可操作地连接到编码麦草畏单加氧酶的DNA序列上的编码叶绿体转运肽的 DNA序列，其中，编码叶绿体转运肽的DNA序列编码SEQ ID NO 6的序列；并向所述田地中施用有效控制杂草生长而不损伤所述转基因植物的量的麦草畏除草剂。
全文摘要
本发明提供了用于有效加工和定位转基因植物中的麦草畏单加氧酶(DMO)的某些叶绿体转运肽的鉴定和用途。本发明也提供了产生耐受麦草畏的植物的方法、控制杂草生长的方法和产生食物、饲料和其它产品的方法，以及当出土前或出土后施用麦草畏时提供麦草畏耐受性的种子。
文档编号C12N5/10GK102337275SQ20111027598
公开日2012年2月1日 申请日期2007年6月6日 优先权日2007年2月26日
发明者M·玛尔文, P·C·C·冯, S·弗拉辛斯基 申请人:孟山都技术公司