专利名称：一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法
技术领域：
本发明属于双歧杆菌制剂技术领域，涉及一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法。
背景技术：
近年来的大量研究发现，双歧杆菌对人体有重要的生理和保健功能，可抑制腐生菌的生长，改善维生素代谢，防止便秘，降低胆固醇，预防和治疗乳糖消化不良，提高人体免疫机能，并具有抗癌、抗衰老作用。随着对双歧杆菌保健功能研究的不断深入，各种利用双歧杆菌活性的药物和食品也相继推出。虽然双歧杆菌作为食品中最受关注、最安全、也是使用最多的一种益生菌，对人越来越多的保健作用被证实。但是双歧杆菌是一种专性厌氧菌，对营养条件要求高，对氧极为敏感，对低PH的抵抗力差，活性保持较困难，因而目前市场上销售的双歧杆菌产品液体或粉体制剂活菌数下降很快，产品的贮存稳定性极差，保健功效损失快。如双歧杆菌液体制剂在几天内活菌数就会下降一个数量级，冻干菌粉在一般贮存温度下也只能保存几个月。另外，双歧杆菌要对人体产生有益作用，首先它必须通过胃环境、十二指肠以大量的存活菌到达肠道病定殖于肠黏膜 上。但由于双歧杆菌耐酸、耐胆盐能力差，双歧杆菌的活菌数在此过程中也会大幅度下降。再者，在双歧杆菌微胶囊的制备过程中也会受到氧气的影响而导致其活菌数大量下降。益生元(Prebiotics)是这样一种物质它是一种膳食补充剂,通过选择性的刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的食品成分(Gibson and Roberfroid, 1995)。成功的益生元应是在通过上消化道时，大部分不被消化而能被肠道菌群所发酵的。最重要的是它只是刺激有益菌群的生长，而不是有潜在致病性或腐败活性的有害细菌。由于双歧杆菌和乳酸菌被认为对人体有很多有益的影响，所以一般的益生元被假设认为能促进此两种菌数量的增加或是其活性的增强。可以促进(生成促进)双歧杆菌的物质被认为为双歧因子。益生元主要包括各种寡糖类物质(Oligosaccharides)或称低聚糖(由2 10个分子单糖组成)。更概括的说法是功能性低聚糖。常见的双歧因子有低聚果糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖、菊糖、低聚半乳糖。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，所制备的双歧杆菌微胶囊能够促进双歧杆菌的增殖，有利于提高微胶囊内双歧杆菌的活菌数。本发明是通过以下技术方案来实现一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤I)将双歧杆菌的菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :5 20的体积比例混合，充分混均后得到双歧杆菌胶液；所述的双歧杆菌的菌悬液是将双歧杆菌以0. I 5. OX IO11Cfumr1的浓度悬浮在质量浓度为O. 85 O. 9%的无菌生理盐水中；所述的含有益生元的海藻酸钠溶液中益生元量的质量浓度为3 9%，海藻酸钠的质量浓度为I 3% ；2)用压力喷嘴将双歧杆菌胶液雾化成液滴后，挤压入含有乳化剂体积分数为
O.2 1.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为I :4 7，充分搅拌，乳化5 20min，然后加入质量浓度为I 5%的氯化钙溶液，静置20min以上；3)待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含有益生元的双歧杆菌微胶囊。
所述的双歧杆菌为两歧双歧杆菌、长双歧杆菌或乳双歧杆菌中的一种。所述的益生元为水苏糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一种或几种。所述含有益生元的海藻酸钠溶液中还含有氯化钠，其质量浓度为O. 85 O. 9%。所述的双歧杆菌为接种于MRS培养基经过增殖培养所获得的。所述的乳化剂为吐温-80。所述的双歧杆菌的菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :8 12的质量比例混合。与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果本发明提供的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，在制备的双歧杆菌微胶囊产品中加入了益生元，益生元能够促进双歧杆菌的增殖，在一定程度上提高了微胶囊内双歧杆菌的活菌数，在未加入益生元之前每克微胶囊的活菌数大概在8. OX IO9Cfug'在加入了益生元后其每克胶囊活菌数明显提高，可达到I. IXlOiciCfug'本发明提供的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，在制备双歧杆菌微胶囊的的过程中将乳化法和挤压法结合，采用压力喷嘴将含有除氧剂的菌胶液雾化成小液滴喷入大豆油中，比传统的注射器挤压法省时省力。本发明提供的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，由于所制备的微胶囊含有双歧杆菌益生元，当食用了这种双歧杆菌微胶囊的产品，当微胶囊到达肠道后，在大量双歧杆菌在肠道释放的同时，益生元也会在肠道发挥其增殖作用，可以使肠道内的双歧杆菌活菌数迅速上升，从而在真正意义上实现益生菌的保健功能。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。实施例I含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤(I)将O. 4g双歧杆菌冻干菌粉(两歧双歧杆菌)接种于18mL MRS液体培养基(购买于青岛高科园海博生物技术有限公司)中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积O. 05%的半胱氨酸盐酸盐，在37°C培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37°C培养条件下培养20 24h，第三次在37°C培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与O. 85 O. 9%无菌生理盐水混合配制成浓度为I. OX IO11CfumL-1菌悬液以备使用。(2)配制浓度2%且含益生元量为3%的海藻酸钠溶液，110°C，灭菌15min。所述的益生元为水苏糖、低聚异麦芽糖、低聚半乳糖中的一种。(3)将菌悬液和含 有益生元的海藻酸钠溶液按照I :10的比例混合并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。(4)用压力喷嘴将上述菌胶混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐温-80)，菌胶液和大豆油的比例为I :4，用磁力搅拌器搅拌800rpm/min,乳化5min,然后快速加入浓度为
I.5%的氯化钙溶液，静置30min。其中压力喷嘴通过类似于喷雾器的方式将菌胶液雾化成液滴，代替了传统的注射器挤压法形成液滴状，省时省力。(5)倾去上层大豆油，通过离心得到湿胶囊(1000r，5min)，用生理盐水洗涤3次。实施例2含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤(I)将O. 4g双歧杆菌冻干菌粉(长双歧杆菌)接种于18mL MRS液体培养基(购买于青岛高科园海博生物技术有限公司)中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积O. 05%的半胱氨酸盐酸盐，在37°C培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37°C培养条件下培养20 24h，第三次在37°C培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与O. 85 O. 9%无菌生理盐水混合配制成浓度为5. OX IO11CfumL-1菌悬液以备使用。(2)配制浓度2%且含益生元量为2%的海藻酸钠溶液，110°C，灭菌15min。所述的益生元为低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的两种。(3)将菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :12的比例混合并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。(4)用压力喷嘴将上述菌胶混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐温-80)，菌胶液和大豆油的比例为I :7，用磁力搅拌器搅拌800rpm/min,乳化IOmin,然后快速加入浓度为2. 5%的氯化钙溶液，静置30min。(5)倾去上层大豆油，通过离心得到湿胶囊(1000r，5min)，用生理盐水洗涤3次。实施例3含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤(I)将O. 4g双歧杆菌冻干菌粉(乳双歧杆菌)接种于18mL MRS液体培养基(购买于青岛高科园海博生物技术有限公司)中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积O. 05%的半胱氨酸盐酸盐，在37°C培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37°C培养条件下培养20 24h，第三次在37°C培养条件下培养18h，然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与O. 85 O. 9%无菌生理盐水混合配制成浓度为5. OX IOltlCfumL-1菌悬液以备使用。(2)配制浓度2%且含益生元量为3%的海藻酸钠溶液，110°C，灭菌15min。所述的益生元为水苏糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的两种。(3)将菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :10的比例混合并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
(4)用压力喷嘴将上述菌胶混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐温-80)，菌胶液和大豆油的比例为I :6，用磁力搅拌器搅拌800rpm/min,乳化15min,然后快速加入浓度为2%的氯化钙溶液，静置30min。(5)倾去上层大豆油，通过离心得到湿胶囊(1000r，5min)，用生理盐水洗涤3次。实施例4含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤(I)将O. 4g双歧杆菌冻干菌粉(长双歧杆菌)接种于18mL MRS液体培养基(购买于青岛高科园海博生物技术有限公司)中，在MRS液体培养基中添加占培养基体积O. 05%的半胱氨酸盐酸盐，在37°C培养条件下采用此MRS液体培养基活化三次，每次以5%的接种量转接，其中前两次均在37°C培养条件下培养20 24h，第三次在37°C培养条件下培养18h， 然后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，将菌泥洗两次涤后与O. 85 O. 9%无菌生理盐水混合配制成浓度为I. OX IO11CfumL-1菌悬液以备使用。(2)配制浓度3%且含益生元量为3%的海藻酸钠溶液，110°C，灭菌15min。所述的益生元为低聚异麦芽糖、低聚木糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或几种。(3)将菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :8的比例混合并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。(4)用压力喷嘴将上述菌胶混合液逐滴滴入大豆油中(含O. 4%的吐温-80)，菌胶液和大豆油的比例为I :5，用磁力搅拌器搅拌800rpm/min,乳化IOmin,然后快速加入浓度为2%的氯化钙溶液，静置30min。(5)倾去上层大豆油，通过离心得到湿胶囊(1000r，5min)，用生理盐水洗涤3次。
权利要求
1.一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将双歧杆菌的菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I:5 20的体积比例混合，充分混均后得到双歧杆菌胶液； 所述的双歧杆菌的菌悬液是将双歧杆菌以O. I 5. OX IO11CfumL-1的浓度悬浮在质量浓度为O. 85 O. 9%的无菌生理盐水中； 所述的含有益生元的海藻酸钠溶液中益生元量的质量浓度为3 9%，海藻酸钠的质量浓度为I 3% ； 2)用压力喷嘴将双歧杆菌胶液雾化成液滴后，挤压入含有乳化剂体积分数为O.2 I.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为I :4 7，充分搅拌，乳化5 20min，然后加入质量浓度为I 5%的氯化钙溶液，静置20min以上； 3)待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含有益生元的双歧杆菌微胶囊。
2.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的双歧杆菌为两歧双歧杆菌、长双歧杆菌或乳双歧杆菌中的一种。
3.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的益生元为水苏糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖、低聚果糖、菊糖、低聚半乳糖中的一种或几种。
4.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述含有益生元的海藻酸钠溶液中还含有氯化钠，其质量浓度为O. 85 O. 9%。
5.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的双歧杆菌为接种于MRS培养基经过增殖培养所获得的。
6.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的乳化剂为吐温-80。
7.如权利要求I所述的含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，所述的双歧杆菌的菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照I :8 12的质量比例混合。
全文摘要
本发明公开了一种含益生元的双歧杆菌微胶囊的制备方法，用压力喷嘴将双歧杆菌胶液雾化成液滴后，挤压入含有乳化剂体积分数为0.2～1.0%的大豆油中，双歧杆菌胶液与大豆油的体积比为14～7，充分搅拌，乳化5～20min，然后加入质量浓度为1～5%的氯化钙溶液，静置20min以上；待静置分层后，倾去上层大豆油，离心得到湿胶囊并用生理盐水充分洗涤，得到含有益生元的双歧杆菌微胶囊。本发明在制备的双歧杆菌微胶囊产品中加入了益生元，益生元能够促进双歧杆菌的增殖，在一定程度上提高了微胶囊内双歧杆菌的活菌数，加入了益生元后其每克胶囊活菌数明显提高，可达到1010～1011cfug-1。
文档编号A23L1/09GK102960599SQ20121047049
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者陈合, 王野, 舒国伟 申请人:陕西科技大学