乳酸戊糖片球菌及其用途
【专利摘要】本发明涉及一种乳酸戊糖片球菌（Pediococcus?pentosaceus）PP31的新型菌株。本发明提供一种用于治疗过敏性疾病的医药组合物，其至少包含有上述乳酸戊糖片球菌为有效成份及一医药上可接受的载体和/或赋形剂。本发明还提供了一种用以减缓过敏性疾病的食品，其至少包含有上述乳酸戊糖片球菌及一食物成份。本发明所提供的乳酸戊糖片球菌可有效地调控细胞激素的变化，用以治疗或预防过敏性疾病，如气喘及过敏性鼻炎，可作为一医药组合物的有效成份，可以口服、涂抹或是喷雾形式投予给患者；也可配合食品成份而作为一用以减缓过敏性的食品，用以减缓过敏性疾病的症状或是预防过敏性疾病。
【专利说明】乳酸戊糖片球菌及其用途
【技术领域】
[0001]本发明与微生物有关，特别指一种乳酸戊糖片球菌及其用途。
【背景技术】
[0002]根据统计，台湾约有三分之一的人口患有过敏性疾病，致使身体不适，严重者可造成死亡。而所谓过敏反应，指身体对于外来物质所产生的一种免疫反应，如气喘(Asthma)、过敏性鼻炎(Atopicrhinitis)、过敏性结膜炎、异位性皮肤癌、荨麻疫、湿疫(Eczenia)或食物过敏(Food allergy)等。在已公开的医学研究中指出过敏性疾病的发生主要是与环境与遗传因子有相关连性，具体来说，生活周遭所充斥的诸多过敏原，例如:尘螨、蟑螂、动物毛屑、化学药品、花粉、空气污染，另外还包含食物，如鸡蛋、牛奶等，上述过敏原都会被患有过敏性疾病的人体解读为外来的有害物质，活化免疫细胞中的吞噬细胞，进而引发一连串的过敏现象，如发痒、肿胀发热等。而除了环境因子外，遗传因子是过敏发生的另一原因，其中，遗传性过敏性疾病是一种多重基因遗传有关的慢性过敏发炎反应，主要染色体发生异常的位置可能位于第5对染色体5p31-33，其为促成过敏性发炎产生细胞激素基因所在位置，而与过敏体质的形成关系密切;第11对染色体llql3与第14对染色体上T细胞接受器基因也影响免疫球蛋白E (Immunoglobulin E，IgE)的总量及与特异性免疫球蛋白的形成有关。
[0003]过敏为人体免疫功能失调而引起不适症状，而人体的免疫反应是依据不同机制而分为四型:第一型以免疫球蛋白E抗体为媒介，诱使肥大细胞活化；第二型及第三型则以免疫球蛋白G (Immunoglobulin G, IgG)抗体为媒介，随不同的免疫球蛋白G亚型及抗原特性，不同程度地參与补体媒介及吞噬作用机制，而第二型对细胞表面或基质抗原直接反应造成，第三型则是与可溶性抗原形成免疫复合体而造成组织伤害；第四型则以T细胞为媒介，进而可再分为三类，第一类为Thl细胞活化吞噬细胞，造成发炎反应；第二类为Th2细胞活化嗜伊红性白血球(Eosinophils)发炎反应；第三类为毒殺型T细胞直接损坏组织。
[0004]更进一步而言，一般常见的过敏疾病属于第一型过敏反应(Janeway etal.，1994)，如气喘、过敏性鼻炎、食物过敏、湿疹等，主要原因为Thl细胞与Th2细胞之间的免疫反应不平衡，且过敏原的反应系较偏向Th2细胞的免疫反应。而Thl细胞会分泌IL-2、IFN-Y及IL-12等细胞激素，主要功能为帮助IgG2a抗体的产生、活化巨噬细胞、天然杀手细胞与毒杀型T细胞，强化细胞免疫反应。并且，在T细胞分化早期，由调控细胞激素可抑制Th2的免疫反应，如IFN- Y可减少IL-4的表现量，并且抑制B细胞进行抗体同型转换；IFN-α 可增加 IFN-Y 表现量，诱发 Thl 的免疫反应(Sinigaglia et al.，1999 ;林，2006)。简而言之，当免疫反应偏向分泌IL-12或IFNs细胞激素为主时，则免疫反应偏向Thl型，减缓过敏反应发生。
[0005]而为了减缓过敏反应的发生，除了建议患者避免过敏原外，临床上对于治疗过敏疾病的药物大多采用抗组织胺(Antihistamine)或是副肾皮质素(又称类固醇)，用以减缓病患对于过敏原所产生的过敏反应。虽然不论使用抗组织胺或是副肾皮质素虽皆可对于过敏性疾病达到显著的疗效，但，长期使用下或是患者未遵循医嘱下而任意使用，都会对于人体产生不良影响的副作用。而为了避免药物所产生的副作用，临床上也有针对过敏疾病采用减敏治疗，在明确获知过敏原的情形下，将过敏原打入体内，使患者自己培养出对抗过敏原的抗体，虽然该减敏治疗的方法主要对于过敏性鼻炎与过敏性气喘有一定成效，但治疗需耗费大量时间及金钱，并该减敏疗法并非适用每位过敏性疾病患者。
[0006]由上可知，过敏性疾病影响着大多数人的健康，病症发作时会对于生活造成一定程度的影响，因此，研究者都致力于开发用以减缓过敏症状或是改善过敏症状的药物或是方法，力求具有成本低、效果佳、不具有副作用等功效。
【发明内容】
[0007]本发明的主要目的是提供一乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,可用于减缓或改善过敏症状。
[0008]本发明的另一目的是提供一种包含上述乳酸戊糖片球菌的用以治疗过敏性疾病的医药组合物。
[0009]本发明的再一目的是提供一种包含上述乳酸戊糖片球菌的用以减缓过敏性疾病的食品。
[0010]为实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0011]一种戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为北 京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏编号CGMCC7050，保藏日期为2012年12月28日。
[0012]一种用于治疗过敏性疾病的医药组合物，该医药组合物至少包含有一所述的乳酸戊糖片球菌PP31为有效成份及一医药上可接受的载体和/或赋形剂。
[0013]优选的是，所述一种用于治疗过敏性疾病的医药组合物，该过敏性疾病选自于气喘及过敏性鼻炎。
[0014]一种用以减缓过敏性疾病的食品，该食品至少包含有一所述的乳酸戊糖片球菌PP31及一食物成份。
[0015]优选的是，所述一种用以减缓过敏性疾病的食品，该过敏性疾病选自于气喘及过敏性鼻炎。
[0016]本发明的有益效果为:
[0017]本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可有效地调控细胞激素的变化，用以有效预防或治疗过敏性疾病，如气喘及过敏性鼻炎，因此，乳酸戊糖片球菌PP31可应用作为一医药组合物的有效成份，可以口服、涂抹或是喷雾形式投予给患者；也可配合食品成份而作为一用以减缓过敏性的食品，用以减缓过敏性疾病的症状或是预防过敏性疾病。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为实施例二中检测各组IL-12细胞激素产量的结果示意图；
[0019]图2为实施例二中检测各组IFN- Y细胞激素产量的结果示意图；
[0020]图3为实施例二中检测各组IL-4细胞激素产量的结果示意图；
[0021]图4为实施例三中测量各组小鼠致敏后不同时间下的呼吸道阻力参数值的结果示意图。
【具体实施方式】
[0022]本发明提供的乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏编号CGMCC7050，保藏H期为2012年12月28日。
[0023]本发明所提供的该乳酸戊糖片球菌PP31，可作为一用于治疗过敏性疾病的有效成份，结合医药上可接受的载体和/或赋形剂，而形成一医药组合物，型态可为锭剂、丸状、粉末、胶囊等；另外该乳酸戊糖片球菌PP31可与一食品成份形成一用以减缓过敏性疾病的食品，例如:饮品、乳制品、营养补充品等。
[0024]以下，将通过若干实施例及图示更进一步说明本发明。
[0025]实施例一:分离并培养人体周边血液单核球
[0026]取有过敏症状的人体静脉血液5mL，以Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离出人体周边血液单核球(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。将该人体周边血液单核球培养在含有10%胎牛血清以及1%二合一抗生素的培养基中(RPM1-1640medium)，并以血球计数器在显微镜下计算活细胞数目，以供后续实施例使用。
[0027]实施例二:乳酸戊糖片球菌PP31刺激人体周边血液单核球的免疫测定
[0028]在本实施例中是将实施例一中的人体周边血液单核球分为两组，分别以不同培养环境予以培养24小时后， 再以酵素连结免疫分析法检测各组细胞的Thl途径的IL-12、IFN-Y及Th2途径的IL-4细胞激素产量，其中，第一组为未添加任何乳酸菌，作为空白组；第二组为添加本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31。
[0029]具体是，将实例一中制备完成的人体周边血液单核球计数并调整浓度后，取三个96孔盘，分为三组，各盘的每孔系分别加入200 μ L的人体周边血液单核球(浓度为I X IO6CelΙ/mL)后，再依据第二组的条件，将浓度106CFU/mL、体积40 μ L的乳酸菌体分别加入第二组的培养盘的孔洞中，并混合均匀。而后将该二组的培养盘在37°C、5% 二氧化碳环境下培养24小时后，取各组上清液放入_80°C冰箱，以酵孝連结免疫分析法检测，结果如图1至图3所示，其中，图1为检测各组IL-12细胞激素产量的结果示意图；图2为检测各组IFN-Y细胞激素产量的结果示意图；图3为检测各组IL-4细胞激素产量的结果示意图。
[0030]由图1至图3结果可知第二组的IFN-Y及IL-12表现量分别高于第一组。第二组的IL-4表现低于第一组。由以上结果显示添加本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可增加IFN- Y、IL-12表现量，降低IL-4表现量，诱发Thl及降低Th2的免疫反应，有效减缓过敏反应的发生。
[0031]实施例三:呼吸道阻力测定
[0032]本实施例是取若干BALB/c小鼠，分为三组，先分别以不同条件饲养连续九周，其中，第一组小鼠为正常小鼠，用以作为空白对照组；第二组小鼠为以卵蛋白(OVA)诱导的气喘模式小鼠；第三组小鼠为以卵蛋白(OVA)诱导的气喘模式小鼠，并另喂食本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31。
[0033]为了要制备第二组及第三组的气喘模式小鼠，在饲养开始第28天及第48天时分别以卵蛋白(OVA)和佐剂氢氧化铝混合给予该二组小鼠进行腹腔注射，诱发小鼠产生过敏反应。并于饲养开始第59天至第61天以浓度2mg/mL的卵蛋白滴注在各该组小鼠鼻腔内，使卵蛋白流入各该小鼠呼吸道，完成小鼠气喘模式的诱导。
[0034]将该三组小鼠分别以呼吸道阻抗仪(BUXCO MAX II)进行呼吸道阻力测定，用以测量各该组小鼠致敏后不同时间下的呼吸道阻力参数值，结果如图4所示。
[0035]由图4可知，第一组小鼠为正常小鼠，其呼吸道阻力参数值维持一平稳状态；而第二组小鼠为气喘模式小鼠，其呼吸道阻力参数值在致敏一小时后达到高点，而后在各该时间点为缓慢地降低；第三组为喂食乳酸戊糖片球菌PP31的气喘模式小鼠，虽呼吸道阻力参数值在鼻腔点滴卵蛋白后一小时达到高点，但是而后快速降低，趋至平缓。因此，由本实施例的结果显示本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31确有减缓因卵蛋白所引起的呼吸道高过敏性的功效。
[0036]通过上述实施例可知，本发明所提供的乳酸戊糖片球菌PP31可有效地调控细胞激素的变化，用以有效预防或治疗过敏性疾病，如气喘及过敏性鼻炎，因此，乳酸戊糖片球菌PP31可应用作为一医药组合物的有效成份，可以口服、涂抹或是喷雾形式投予给患者；也可配合食品成份而作为一用以减缓过敏性的食品，用以减缓过敏性疾病的症状或是预防过敏性疾病。
[0037]以上仅是通过各该实施例详细说明本发明，熟知该【技术领域】者于不脱离本发明精神下，而对于说明书中的实施例所做的任何简单修改或是变化，均应在本案申请专利保护范围之内。
【权利要求】
1.一种乳酸戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus) PP31,保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏编号CGMCC7050，保藏日期为2012年12月28日。
2.一种用于治疗过敏性疾病的医药组合物，其特征在于，该医药组合物至少包含有一如权利要求1所述的乳酸戊糖片球菌PP31为有效成份及一医药上可接受的载体和/或赋形剂。
3.根据权利要求2所述的用于治疗过敏性疾病的医药组合物，其特征在于，该过敏性疾病选自于气喘及过敏性鼻炎。
4.一种用以减缓过敏性疾病的食品，其特征在于，该食品至少包含有一如权利要求1所述的乳酸戊糖片球菌PP31及一食物成份。
5.根据权利要求4所述的用以减缓过敏性疾病的食品，其特征在于，该过敏性疾病选自于气喘及过敏性鼻 炎。
【文档编号】C12R1/01GK103966117SQ201310042703
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年2月4日 优先权日:2013年2月4日
【发明者】蔡政志, 吕淑芬, 谢长奇, 陈睿成, 陈钰馨 申请人:弘光科技大学