新型醛缩酶和取代α-酮酸的制备方法
【专利摘要】本发明涉及新型醛缩酶和取代α-酮酸的制备方法。通过使用来自假单胞菌属、欧文氏菌属、黄杆菌属、黄单胞菌属的新型醛缩酶，可以由吲哚丙酮酸和丙酮酸(和/或草酰乙酸)合成4-(吲哚-3-基甲基)-4-羟基-2-氧代戊二酸，该4-(吲哚-3-基甲基)-4-羟基-2-氧代戊二酸可用作合成monatin的中间体。
【专利说明】新型醛缩酶和取代α-酮酸的制备方法
[0001]本申请为分案申请，原申请的申请日为2003年8月26日，申请号为03819899. I (PCT/JP2003/010750)，发明名称为“新型醛缩酶和取代α -酮酸的制备方法”。
【技术领域】
[0002]本发明涉及醛缩酶和取代α-酮酸的制备方法，更详细地说，涉及优选用于合成4-(吲哚-3-基甲基）-4-羟基-2-氧代戊二酸（以下成为IH0G)的醛缩酶，而所述IHOG可用作合成monatin的中间体,还涉及取代α -酮酸的制备方法。
【背景技术】
[0003]具有下式（5)所示结构的monatin是从南非灌木的根中分离萃取出来的天然甜味氨基酸。它具有相当于蔗糖的数十倍至数千倍的强烈甜味，有望作为甜味剂使用。但是，monatin的有用性刚刚才被发现，尚未建立工业规模合成monatin的方法。
[0004]
【权利要求】
1.下述（e)的DNA： (e)核苷酸序列由SEQ ID No. 15的核苷酸序列或者同一序列中碱基编号398-1141的核苷酸序列表示的DNA。
2.下述（g)的DNA： (g)编码氨基酸序列由SEQ ID No. 16的氨基酸序列表示的蛋白的DNA。
3.重组DNA，其由权利要求1或2的DNA与载体DNA连接得到。
4.用权利要求3所述的重组DNA转化而成的细胞。
5.制备具有醛缩酶活性的蛋白的方法，其包括将权利要求4中所述细胞在培养基中进行培养，在培养基和/或细胞中累积具有醛缩酶活性的蛋白。
6.下述（k)的蛋白： (k)氨基酸序列由SEQ ID No. 16的氨基酸序列表示的蛋白。
7.一种制备下述通式（3)所示取代α-酮酸的方法，该方法包括使下述通式（I)所示取代α -酮酸与下述通式（2)所示取代α -酮酸反应，
8.权利要求7所述的取代α-酮酸的制备方法，其中R2为氢。
9.权利要求7所述的取代α-酮酸的制备方法，其中R1为苄基或3-吲哚基甲基，和R2为氢或羧基。
10.一种由草酰乙酸或丙酮酸与吲哚-3-丙酮酸制备下式（4)所示取代α-酮酸的方法，
11.一种制备下述通式（3’）所示的取代α-酮酸的方法，该方法包括使下述通式（1)所示化合物与下述通式（2’ )所示取代α-酮酸反应，
【文档编号】C12P7/42GK103525847SQ201310231146
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2003年8月26日 优先权日:2002年8月26日
【发明者】杉山雅一, 渡部乙比古 申请人:味之素株式会社