一种核桃仁多肽的提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种核桃仁多肽的提取方法，包括以下步骤：（1）球磨粉碎：取脱油核桃粉，加入水，并加木瓜蛋白酶，采用球磨机对脱油核桃粉进行湿法粉碎得到超细粉体悬浊液；（2）酶水解：将悬浊液与球罐分离，向溶液中补充水，调整pH至6.0-7.0，继续加入木瓜蛋白酶，在55-65℃条件下，超声波处理20-30min，之后60℃条件下搅拌酶水解10-30min后离心即得。本发明将球磨超微粉碎、超声提取、木瓜蛋白酶酶解三者联合，对脱油核桃粉进行超微粉碎，颗粒细化，细胞破碎，蛋白质等大分子物质暴露溶解释放，超声处理进一步促使核桃蛋白从破碎的细胞中释放溶解，使多肽转化率大幅度提高。
【专利说明】一种核桃仁多肽的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品或保健食品加工【技术领域】，涉及一种核桃仁多肽的提取方法。
【背景技术】
[0002]核桃具有很高的营养价值和药用价值，是开发高级保健食品的良好原料。核桃仁含油脂65%，蛋白质15.4%以上，脱油后核桃主要成分为核桃蛋白，核桃多肽生产主要以脱油核桃柏为原料，利用化学法或酶法降解而成。酶法与传统酸法、碱法加工相比，具有不可比拟优点，如不会有任何有害残留物质，具有高度专一性和高效性，酶制剂用量小，反应条件温和，营养成分损失少，易操作，能耗低等，但酶法提取时间长，易生微生物。
[0003]天然核桃蛋白具有紧密立体结构，其酶切位点包藏于蛋白质内部，从而很难被蛋白酶水解，所以需对核桃蛋白进行预处理，使蛋白变性，以有效提高核桃蛋白水解度。另外，常规酶法分解蛋白质虽达到很高水解率，但费时、且条件苛刻，要达到小分子肽阶段，条件更不易控制，所以核桃蛋白酶解前可考虑一些预处理。目前预处理方法较多，常见的有微波、超声波、热处理、冻融和超高压等。当前国内外有关利用预处理提高植物、动物蛋白水解度相关报道很多；但有关核桃蛋白报道相对较少。蛋白变性方法有很多，其中热处理由于方法简便，设备投资少，成为最普遍预处理方法。但热处理能耗大，时间长，本发明将球磨超微粉碎、超声提取、木瓜蛋白酶酶解三者联合，对脱油核桃粉进行超微粉碎，颗粒细化，细胞破碎，蛋白质等大分子物质暴露溶解释放，超声处理进一步促使核桃蛋白变性从破碎的细胞中释放溶解，可使多肽转化率大幅度提高、酶解提取分离时间大大缩短。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种核桃仁多肽的提取方法，能在比较温和的条件下高效快速获得核桃多肽，使其在生产工艺达到经济高效、环保等优点。
[0005]为了实现上述目的，本发明提出如下技术方案:
一种核桃仁多肽的提取方法，包括以下步骤:
(1)球磨粉碎:取脱油核桃粉，以脱油核桃粉重量计，加入物料重量3-5倍的水，并加木瓜蛋白酶20U/g，采用球磨机在转速为250-400rpm条件下对脱油核桃粉进行湿法粉碎l_3h得到超细粉体悬池液；
(2)酶水解:将悬浊液与球罐分离，以脱油核桃粉重量计，取2-3倍的水冲洗球罐，合并2次悬浊液。向溶液中补充水量至干物浓度为50-100g/l，调整pH至6.0-7.0，继续加入20U/g —脱油核桃粉的木瓜蛋白酶，在55-65°C条件下，按10-1500W/升超声波处理20-30min，之后在60°C条件下搅拌酶水解10_30min后离心得上清液即多肽溶液。
[0006]优选的，所述步骤(I)中球磨机为行星式球磨机。
[0007]优选的，所述步骤(2)中利用质量分数为2%的氢氧化钠和质量分数为1%的盐酸调整 pH 至 6.0-7.0。
[0008]材料为:脱油核桃粉、木瓜蛋白酶(2000U/g)。[0009]本发明采用木瓜蛋白酶(2000U/g)，北京鼎国生物试剂有限公司)
本发明的技术方案，将球磨超微粉碎、超声提取、木瓜蛋白酶酶解三者联合，对脱油核桃粉进行超微粉碎，颗粒细化，细胞破碎，蛋白质等大分子物质暴露溶解释放，超声处理进一步促使核桃蛋白从破碎的细胞中释放溶解，使多肽转化率大幅度提高。采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，计算脱油核桃粉多肽的转化率最高可达87%。
[0010]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0011]下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但不能理解为对本发明的限制。
[0012]实施例1
球磨粉碎:取500克的脱油核桃粉至于玛瑙罐中，加入物料重量1500ml的水，并加木瓜蛋白酶5g，采用行星式球磨机(XQM-20L，南京科析试验仪器研究所)在转速为400rpm条件下对脱油核桃粉进行湿法粉碎3h得到超细粉体悬浊液；
酶水解:将悬浊液与球罐分离，取1500ml的水冲洗球罐，合并2次悬浊液。向溶液中补充水量至干物浓度为100g/l，利用质量分数为2%的氢氧化钠和质量分数为1%的盐酸，调整pH至6.5，继续加入5g的木瓜蛋白酶，在60°C条件下，按1000W/升超声波处理30min，之后在进一步搅拌酶水解30min。酶解液条件为60°C条件，酶解后离心得上清液即多肽溶液，采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，多肽的转化率为87%。所述多肽溶液可以经过滤、真空冷冻的步骤得核桃仁多肽纯品。
[0013]转化率的检测方法:游离氨基酸采用甲醛滴定法；蛋白质采用凯氏定氮法。多肽采用双缩脲法检测。
[0014]多肽转化率计算公式:转化率=(Τ2-Τ1)/(Ρ1_Ρ2)。
[0015] 式中:Τ2为酶解后多肽含量；T1为酶解前多肽含量；P1为酶解前总蛋白含量；P2为酶解前酸溶性蛋白含量。
[0016]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【权利要求】
1.一种核桃仁多肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)球磨粉碎:取脱油核桃粉，加入物料重量3-5倍的水，并加木瓜蛋白酶20U/g，采用球磨机在转速为250-400rpm条件下对脱油核桃粉进行湿法粉碎l_3h得到超细粉体悬池液； (2)酶水解:将悬浊液与球罐分离，取2-3倍的水冲洗球罐，合并2次悬浊液， 向溶液中补充水量至干物浓度为50-100g/l，调整pH至6.0-7.0，继续加入20U/g的木瓜蛋白酶，在55-65°C条件下，按10-1500W/升超声波处理20-30min，之后在60°C条件下搅拌酶水解10-30min后离心得上清液即多肽溶液。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中球磨机为行星式球磨机。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中利用质量分数为2%的氢氧化钠和质量分数为1%的盐酸调整pH至6.0-7.0。
【文档编号】C12P21/06GK103468773SQ201310401761
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月6日 优先权日:2013年9月6日
【发明者】庄义庆, 吴琴燕, 杨敬辉 申请人:江苏丘陵地区镇江农业科学研究所