一步酶法制备7-氨基头孢霉烷酸并获得a-氨基己二酸的方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备7-ACA并同时获得α-氨基己二酸的方法，所述方法，经过以下步骤：步骤1，头孢菌素C发酵液的处理；步骤2，头孢菌素C在头孢菌素C酰基转移酶的作用下进行酶解反应得到7-ACA；步骤3，对酶解后得到的7-ACA裂解液进行处理；步骤4，分离出7-ACA；步骤5，从分离出7-ACA的裂解液中分离α-氨基己二酸。
【专利说明】一步酶法制备7-氨基头孢霉烷酸并获得a-氨基己二酸的方法
【技术领域】:
[0001]本发明涉及一种酶裂解法的应用，具体而言是涉及一种获制备7-氨基头孢霉烷酸并获得α-氨基己二酸的一步酶法应用。
【背景技术】:
[0002]7-氨基头抱霉焼酸(7—aminocephalosporanic acid，7-ACA),
[0003]
【权利要求】
1.一种制备7-ACA并同时获得α-氨基己二酸的方法，所述方法，经过以下步骤: 步骤1，头孢菌素C发酵液的处理； 步骤2，头孢菌素C在头孢菌素C酰基转移酶的作用下进行酶解反应得到7-ACA ； 步骤3，对酶解后得到的7-ACA裂解液进行处理； 步骤4，分离出7-ACA ； 步骤5，从分离出7-ACA的裂解液中分离α -氨基己二酸。
2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤I中所述头孢菌素C发酵液的处理是用碱调PH到碱性，并浓缩到适当浓度及纯度。
3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤2中酶解反应过程要控制反应PH、酶用量等参数。
4.如权利要求1所述的方法，其中，步骤3所述对酶解后得到的7-ACA裂解液进行处理是对7-ACA裂解液采用浓缩，脱炭、过滤，使其达到结晶前的良好状态。
5.如权利要求1所述的方法，其中，步骤4所述分离出7-ACA采用析晶并分离的方法。
6.如权利要求1所述的方法，其中，步骤5所述从分离出7-ACA的裂解液中分离α-氨基己二酸是用等电点法将α-氨基己二酸从裂解液中结晶出来。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述的等电点法将α-氨基己二酸从裂解液中结晶出来的方法，经过以下三个步骤: 步骤I，对一步酶法分离出7-ACA后的裂解液进行处理； 步骤2，分离出α-氨基己二酸； 步骤3，精制α-氨基己二酸； 其中，步骤I所述对裂解液进行处理，包括加碱并浓缩的步骤；步骤2所述分离α -氨基己二酸的方法选自树脂吸附法或者等电点法；步骤3所述精制α-氨基己二酸是重结晶法。
8.如权利要求6所述的方法，其中，所述的等电点法将α-氨基己二酸从裂解液中结晶出来的方法，经过以下三个步骤: 步骤1，裂解液加入氢氧化钠溶液，调整PH值为6.0,随后将裂解液浓缩到原来体积的30% ； 步骤2，把浓缩液用酸调节PH值到3.0，析出α-氨基己二酸； 步骤3，将过滤得到的α -氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重结晶一次，结晶用丙酮洗涤，干燥即得精品α-氨基己二酸； 其中，步骤I所述加入氢氧化钠溶液为2mol/L的氢氧化钠溶液2mol/L浓度的氢氧化钠溶液，其配制方法如下:每500毫升水中溶解的氢氧化钠质量为40g，其中将裂解液浓缩采用的方法如下:把裂解液通过纳滤装置进行浓缩；其中，步骤2所述用酸调节PH值是用盐酸溶液调节，所述盐酸溶液浓度为:2mol/L左右，其配制方法如下:36-38%浓盐酸和水的配比1:5体积进行混合；其中，步骤3所述的重结晶，是用无水乙醇和水1:1等量混合成为50%的乙醇溶液进行重结晶。
9.如权利要求1所述的方法，经过以下步骤: 步骤1，取头孢菌素C发酵滤液，调pH到9-10 ； 步骤2，头孢菌素C酰基转移酶(NRB103)和头孢菌素C在室温下反应，直到用高效液相仪鉴测7-氨基头孢霉烷酸完全生成，控制反应pH在9-10 ； 步骤3，向上一步得到的7-氨基头孢霉烷酸反应液中加入Na2S2O4,调pH6-7，加吐温80和二氯甲烷，分相，在水相中加入活性炭和EDTA，过滤得7-氨基头孢霉烷酸液体； 步骤4，7_氨基头孢霉烷酸液体调pH值使成为酸性，析出结晶后，滤出结晶，用丙酮洗漆，干燥； 步骤5，通过等电点法将α-氨基己二酸从裂解液中结晶出来，方法如下:裂解液加入氢氧化钠溶液，调整PH值为6.0，随后将裂解液浓缩到原来体积的30%，把浓缩液用酸调节PH值到3.0，析出α-氨基己二酸，将过滤得到的α-氨基己二酸粗品加入水和乙醇的混合溶媒中重结晶一次，结晶用丙酮洗涤，干燥即得精品α-氨基己二酸。10、如权利要求1所述的方法，经过以下步骤: 取头孢菌素C(CPC)发酵滤液10升(750mM，相当于纯CPC311克)，过I μ m膜滤，用氨水调 PH IlJ 10 ； 向反应器中加入(NRB-103)酶1800克，水洗二次，加入CPC液后，快速搅拌下，用氨水控制PH为8-10，反应30分钟，7-ACA转化率98% ； 向得到的15升7-ACA液中加入100克Na2S2O4,用氨水调PH为7，加吐温80，10毫升，加入二氯甲烷2000毫升，搅拌10分钟， 分相，在水相中加入活性炭20克，加入EDTAlO克，搅拌15分钟，过滤除炭得7-ACA处理液； 向7-ACA处理液中滴加3摩尔的 盐酸，使PH为5，结晶完全后，滤出结晶，收集过滤母液，之后300毫升丙酮洗漆结晶,真空干燥至干,重量收率63.7%,纯度99.5% ； 取经过一步酶法制备7-ACA的废液15升，用氢氧化钠调节PH值到6，经过纳滤浓缩到5升，滴加3摩尔的盐酸，使PH为3.0，使α-氨基己二酸结晶，过滤100毫升丙酮洗涤，真空干燥，烘干，干燥后α -氨基己二酸结晶加入水200毫升加入乙醇200毫升搅拌过滤得到纯度99%淡黄色α -氨基己二酸大约100克。
【文档编号】C12P13/04GK103555807SQ201310533202
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】朱彦民, 王喜军, 刘治林 申请人:哈药集团制药总厂