白僵菌素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种白僵菌素的制备方法。包括下述步骤：1a、制备镰刀菌LF061种子液：将菌株LF061的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，28℃-32℃、转速120rpm-160rpm，培养48-72h获得种子液；1b、镰刀菌LF061种子液经发酵制备白僵菌素：将上述种子液以体积百分比5%-15%的接种量接种于液体发酵培养基，发酵温度28℃-32℃，转速120rpm-160rpm，通气量10L-30L/分，发酵时间96h-144h；所得发酵液分离、精制得白僵菌素。本发明采用液体发酵生产白僵菌素，制备的白僵菌素纯度高，回收率高，适用于工业化生产。
【专利说明】白僵菌素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于工业微生物【技术领域】，具体涉及到一种白僵菌素制备方法。
【背景技术】
[0002]白僵菌素(beauvericin, BEA)是从真菌球抱白僵菌办assiafla)发酵菌丝体中提取分离的一种六元环状缩酯肽化合物，由3个N-甲基苯丙氨酸和3个(D)-a -羟基异戊酸残基交替相连而成，分子式为C45H57N3O9,结构如式(I )所示。白僵菌素为白色粉末状，不易溶于水，溶于甲醇、丙酮等有机溶剂，可被检测的紫外吸收光谱范围是204nm_225nmo
【权利要求】
1.一种白僵菌素的制备方法，其特征在于，包括下述步骤: la、制备镰刀菌LF061种子液: 将菌株LF061的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，28°C -32°C、转速120rpm-160rpm,培养48-72 h获得种子液； 其中所说的种子培养基为YI3D培养基，其含有如下组分:Yeast Extract 10g，Peptone20g,葡萄糖20g,加蒸懼水定容至1000 ml, 121 °C灭菌20 min ; lb、镰刀菌LF061种子液经发酵制备白僵菌素: 将上述种子液以体积百分比5%-15 %的接种量接种于液体发酵培养基，发酵温度28℃ -32 °C，转速120rpm-160 rpm，通气量10L-30L/分，发酵时间96h-144 h ;所得发酵液分离、精制得白僵菌素； 其中所说的液体发酵培养基含有以下组分:葡萄糖5g-10g，可溶性淀粉20g-30g，工业蛋白胨20g-50g，氯化钾0.1-0.2g，磷酸二氢钾3g-5g，硝酸钠lg-l.5g，七水硫酸镁0.05g-0.lg，碳酸钙 lg-2g,加水定容至 1000 ml, 121 °C灭菌 30 min。
2.根据权利要求1所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于，所述发酵液分离、精制步骤为: 2a、将发酵液离心或过滤，获得白僵菌素菌丝体； 2b、用有机溶剂对菌丝体浸提1-2次，每次2-4小时，合并浸提液，减压浓缩，除去有机溶剂，得到白僵菌素粗提物； 2c、将白僵菌素粗提物加入有机溶剂进行溶解，上样至装有聚合物色谱填料的色谱柱； 2d、使用有机溶剂与水的混合液进行梯度洗脱，分管收集洗脱液并进行在线检测，将符合要求的洗脱液合并，经浓缩、干燥，得到高纯度的白僵菌素。
3.根据权利要求1或2所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于:所述有机溶剂为乙醇或甲醇。
4.根据权利要求2所述的白僵菌素的制备方法，其特征在于:所述梯度洗脱是指上样后，先用80%体积百分比的甲醇或乙醇水溶液洗脱2个柱体积去除杂质，然后再用甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱速度为1-2倍柱体积/小时。
【文档编号】C12P21/04GK103898182SQ201310725157
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2013年12月25日 优先权日:2013年12月25日
【发明者】段宝玲, 张立新, 张雪霞, 刘梅, 任风芝, 贺伟, 李宁, 白超弦, 李晓露, 贾啸静, 陈书红, 米贯东, 李丽红, 王秀琴, 董爱华, 王海燕, 段向东 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司, 中国科学院微生物研究所