抗-gcc抗体分子和其用于测试对gcc标靶治疗的易感性的用途
【专利摘要】本发明揭示结合GCC的抗体和抗体的抗原结合片段。本发明还提供用于鉴别应接受利用本发明提供的所述抗-GCC抗体的GCC标靶治疗的患者的诊断方法。所述抗-GCC抗体分子可作为裸抗体分子和作为免疫偶联物的组份来使用。因此，在另一方面中，本发明的特征在于包含本发明描述的抗-GCC抗体分子和治疗剂或标记的免疫偶联物。本发明的特征还在于使用本发明描述的抗-GCC抗体分子和免疫偶联物用于(例如)检测GCC以及表达GCC的细胞或组织的方法。所述方法尤其可用于GCC介导疾病的诊断、预后、成像或分期。因此，在一些方面中，本发明的特征在于鉴别用GCC标靶治疗、例如抗-GCC抗体治疗、例如包含与治疗剂偶联的抗-GCC抗体的免疫偶联物来治疗的个体的方法。
【专利说明】抗-GCC抗体分子和其用于测试对GCC标祀治疗的易感性的 用途
[0001] 巧关申请案
[0002] 本申请案主张对2012年4月27日申请的美国临时申请案第61/639, 376号的权 益和优先权。美国临时申请案第61/639, 376号的全部内容是W引用方式并入本文中。
【技术领域】
[0003] 本发明涉及结合GCC的抗体分子和使用其选择用GCC标祀治疗来治疗的患者的方 法，所述GCC标祀治疗是（例如）含有偶联到诸如治疗剂等药剂的抗-GCC抗体分子或其片 段的免疫偶联物。
【背景技术】
[0004] 鸟巧酸环化酶C( "GCC")是在维持肠液、电解质平衡和细胞增殖中发挥功能的 跨膜细胞表面受体，例如，参见卡里瑟斯（Carrithers)等人，美国国家科学院院刊（Proc. 化tl.Acad.Sci.USA) 100:3018-3020(2003)。GCC在小肠、大肠和直肠衬里的黏膜细胞处表 达（卡里瑟斯等人，结肠与直肠疾病值isColonRectum) 39:171-181 (1996))。在肠上皮细 胞发生肿瘤转化后，维持GCC表达，且在所有原发性和转移性结肠直肠肿瘤中都有表达（卡 里瑟斯等人，结肠与直肠疾病39:171-181 (1996);比克炬UC)等人，欧洲癌症杂志巧urJ Cancer) 41:1618-1627 (200巧；卡里瑟斯等人，胃肠病学（Gastroenterology) 107:1653-16 61(1994))。
【发明内容】
[0005] 本发明至少部分地基于新颖的抗-GCC抗体的发现。因此，在一个方面中，本发明 的特征在于如本文所掲示的抗-GCC抗体分子。抗-GCC抗体分子可作为裸抗体分子和免疫 偶联物的组份来使用。因此，在另一方面中，本发明的特征在于包含本文所述抗-GCC抗体 分子和治疗剂或标记的免疫偶联物。本发明的特征还在于使用本文所述抗-GCC抗体分子 和免疫偶联物（例如）检测GCC和表达GCC的细胞或组织的方法。所述方法尤其可用于GCC 介导疾病的诊断、预后、成像或分期。因此，在一些方面中，本发明的特征在于鉴别用GCC标 祀治疗来治疗的个体的方法，所述GCC标祀治疗是（例如）抗-GCC抗体治疗，例如，包含与 治疗剂偶联的抗-GCC抗体的免疫偶联物。本发明的特征还在于确定患有癌症的个体是GCC 标祀治疗（例如，本文所述GCC标祀治疗）的潜在候选者的活体外或活体内方法。
[0006] 抗-GCC抗体（例如，本文所述抗-GCC抗体）还可用于（例如）调节GCC蛋白质 的活性或功能；和用于治疗GCC介导疾病，如本文所述。在一些方面中，治疗包括获得了解 和/或评估样品或个体W测定GCC表达水平，并且如果个体表达GCC，那么投与GCC标祀治 疗，例如，本文所述GCC标祀治疗。在其它方面中，所述方法的特征在于通过W下方式产生 个人化治疗报告，例如，GCC标祀治疗报告：从个体获得样品并通过（例如）本文所述检测 方法（例如，使用本文所述抗-GCC抗体）测定GCC表达水平，并且基于所述测定，选择所述 个体的标祀治疗报告。
[0007] 在另一方面中，本发明的特征还在于编码抗-GCC抗体分子氨基酸序列的经分离 和/或重组核酸，W及包含所述核酸的载体和宿主细胞，和产生抗-GCC抗体分子的方法。本 文的特征还在于包含本文所述抗-GCC抗体（例如，免疫偶联物）的反应混合物和试剂盒， W及（例如）包含本文所述抗-GCC抗体W检测GCC表达的活体外分析。
[0008] 本文所提到的所有出版物、专利申请案、专利和其它参考文献都是全文W引用方 式并入本文中。
[0009] 根据说明书和图式W及权利要求书将明了本文所掲示本发明的其它特征、目的和 优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0010] 图1是用于产生本发明的人类GCC化GCC)细胞外结构域巧CD)小鼠化(mFc)融合 蛋白化GCC-ECD-mFc)的蛋白质表达载体的环状图。
[0011] 图2A-2D绘示汇总来自经筛选招募到C26001研究（GCC标祀免疫偶联物的I期临 床试验）中的癌症患者的多种肿瘤类型的GCC表达的经组合/合计（顶端和细胞质）H评 分分布的条形图。图2A绘示所筛选结肠直肠癌患者的经组合合计H评分分布；图2B绘示 所筛选胃癌患者的经组合合计H评分分布；图2C绘示所筛选膜脏癌患者的经组合合计H评 分分布；图2D绘示所筛选食道癌患者的经组合合计H评分分布。
[001引图3A-3C绘示汇总所筛选各个肿瘤特异性微阵列的GCC表达的经组合/合计（顶 端和细胞质）H评分分布的条形图。图3A绘示针对GCC表达进行筛选的各个结肠直肠肿瘤 微阵列上的样品的经组合/合计H评分分布；图3B绘示针对GCC表达进行筛选的胃肿瘤微 阵列上的样品的经组合/合计H评分分布；图3C绘示针对GCC表达进行筛选的各个膜脏肿 瘤微阵列上的样品的经组合/合计H评分分布。
【具体实施方式】
[0013] 鸟巧酸环化酶"GCC)(还称为STAR、ST受体、GUC2C和GUCY2C)是在维持肠液、 电解质平衡和细胞增殖中发挥功能的跨膜细胞表面受体（卡里瑟斯等人，美国国家科学 院院刊100:3018-3020(2003);曼恩（Mann)等人，生物化学与生物物理学通讯炬iochem Bio地ysResCommun) 239:463-466 (1997);培培利（Pitar;L)等人，美国国家科学院院刊 100:2695-2699(2003));基因库佑enBank)登录号NM_004963,其各自是全文W引用方式并 入本文中）。该个功能是经由鸟巧蛋白的结合来介导（威甘德（Wiegand)等人，欧洲生物化 学学会联合会快报（阳BSLett. )311:150-154 (1992))。GCC还是热稳定性肠毒素（ST，例 如具有氨基酸序列NTFYCCELCCNPACAGCY，SEQIDN0:1)的受体，所述肠毒素是由大肠杆菌 巧.coli)W及其它传染性生物体产生的肤（拉奧，M.C. (Rao,M.C.)汽己基金座谈会（Ciba Found.Symp.) 112:74-93 (1985);努普F.C.(KnoopF.C.)和欧文斯，M. (Owens,M.)药理和 毒理方法杂志（J.Wiarmacol.Toxicol.Methods) 28:67-72 (1992))。ST对GCC的结合活化 引起肠病（例如，腹泻）的信号级联。
[0014] 人类GCC的核巧酸序列（基因库登录号NM_004963;SEQIDN0:2);
[0015] Igaccagagagaagcgtggggaagagtgggctgagggactccactagaggctgtccatctg
【权利要求】
1. 一种抗-GCC抗体分子，其包含三个重链互补决定区（⑶Rl XDR2和⑶R3)，其分别包 含氨基酸序列SEQ ID NO :21、22和23或分别包含SEQ ID NO :33、34和35 ;和三个轻链互 补决定区（CDRl、CDR2和CDR3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO : 27、28和29或分别包 含 SEQ ID NO :39、40 和 41。
2. -种抗-GCC抗体分子，其与包含以下的抗-GCC抗体竞争结合到相同表位或结合到 所述表位：三个重链互补决定区（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO : 21、22和23 ;和三个轻链互补决定区（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO :27、28 和 29。
3. -种抗-GCC抗体分子，其与包含以下的抗-GCC抗体竞争结合到相同表位或结合到 所述表位：三个重链互补决定区（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO : 33、34和35 ;和三个轻链互补决定区（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分别包含氨基酸序列SEQ ID NO :39、40 和 41。
4. 根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC抗体 分子是单克隆抗体。
5. 根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC抗体 分子是兔或兔源抗体。
6. 根据权利要求5所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗体是兔单克隆抗体。
7. 根据权利要求1所述的抗-GCC抗体分子，其进一步包含包含根据SEQ ID NO: 11或 SEQ ID NO : 15的氨基酸序列的重链可变区和包含根据SEQ ID NO : 13或SEQ ID NO : 17的 氨基酸序列的轻链可变区。
8. 根据权利要求1所述的抗-GCC抗体分子，其中所述重链⑶R1XDR2和⑶R3分别包 含根据SEQ ID NO :21、22和23的氨基酸序列，并且所述轻链CDR分别包含根据SEQ ID NO: 27、28和29的氨基酸序列。
9. 根据权利要求7所述的抗-GCC抗体分子，其中所述重链可变区包含根据SEQ ID NO: 11的氨基酸序列且所述轻链可变区包含根据SEQ ID NO : 13的氨基酸序列。
10. 根据前述权利要求中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子，其中所述抗-GCC抗体 分子偶联到可检测标记。
11. 根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记选自由以下组成的 群组：辣根过氧化物酶HRP ;碱性磷酸酶；半乳糖苷酶；葡萄糖淀粉酶；溶菌酶；糖氧化酶， 例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖6-磷酸脱氢酶；杂环氧化酶，例如尿酸酶和黄 嘌呤氧化酶，其与诸如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶等采用过氧化氢来氧化染料前体 的酶偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋标记；噬菌体标记；和稳定自由基。
12. 根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记是选自以下的荧光 团：荧光黄或其衍生物、玫瑰红或其衍生物、丹磺酰基、伞形酮、荧光素酶、荧光素和2, 3-二 氢酞嗪二酮。
13. 根据权利要求10所述的抗-GCC抗体分子，其中所述可检测标记是选自由以下组成 的群组的放射性试剂：32P、 3H、14C、188Rh、43K、52Fe、 57Co、67Cu、67Ga、68Ga、77Br、 81 RV81MKr、87MSr、 99Tc、mIn、 113M In、123I、125I、127Cs、129Cs、 131I、132I、197Hg、2〇3Pb 和 2tl6Bi 和 213Bi。
14. 一种经分离核酸序列，其编码根据权利要求1、7、8和9中任一权利要求所述的抗体 分子。
15. -种细胞，其包含根据权利要求14所述的经分离核酸序列。
16. -种产生根据权利要求1、7、8或9所述的抗体分子的方法，其包含在容许产生抗体 分子的条件下培养根据权利要求15所述的细胞，由此产生根据权利要求1、7、8或9所述的 抗体分子。
17. -种载体，其包含根据权利要求1、7、8或9所述的抗体分子的轻链和重链中的一者 或二者。
18. -种检测生物样品中的GCC分子的方法，其包含使所述生物样品与根据权利要求1 到13中任一权利要求所述的抗体分子接触和测定所述抗体分子是否结合到所述GCC分子。
19. 根据权利要求18所述的方法，其中所述方法检测方法包含免疫组织化学分析。
20. 根据权利要求18或19所述的方法，其中所述生物样品是源自怀疑患有表达GCC的 癌症的患者的肿瘤生检。
21. 根据权利要求18到20中任一权利要求所述的方法，其进一步包含对所述生物样品 中的GCC表达进行定量的步骤。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中对GCC表达的所述定量包含所述生物样品中的 顶端GCC表达、所述生物样品中的细胞质GCC表达或二者。
23. 根据权利要求21或22所述的方法，其中所述定量步骤包含H-评分方法。
24. 根据权利要求20所述的方法，其中所述表达GCC的癌症选自由以下组成的群组： 结肠直肠癌、胃癌、小肠癌、食道癌、胰脏癌、肺癌、软组织肉瘤、神经外胚层肿瘤和神经内分 泌肿瘤。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述肺癌是鳞状细胞癌或腺癌。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌肉瘤。
26. 根据权利要求24所述的方法，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管肺神经内 分泌肿瘤。
27. -种试剂盒，其包含根据权利要求1到13中任一权利要求所述的抗-GCC抗体分子 和使用说明书。
28. 根据权利要求27所述的试剂盒，其进一步包含GCC标靶治疗剂。
29. 根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述GCC标靶治疗剂包含抗-GCC抗体分子。
30. 根据权利要求29所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是单克隆抗体。
31. 根据权利要求29或30所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是人类 IgGl抗体。
32. 根据权利要求29、30或31所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子包含三 个重链互补决定区（CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :67、68和69的氨基 酸序列；和三个轻链互补决定区（⑶RU⑶R2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71 和72的氨基酸序列。
33. 根据权利要求32所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子包含包含SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO :80的氨基酸序列的轻链可变区。
34. 根据权利要求29到33所述的试剂盒，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子偶联到细 胞毒性剂。
35. 根据权利要求34所述的试剂盒，其中所述细胞毒性剂是奥里斯他汀分子。
36. 根据权利要求35所述的试剂盒，其中所述奥里斯他汀分子是单甲基奥里斯他汀E MMAE或单甲基奥里斯他汀F MMAF。
37. 根据权利要求34到36所述的试剂盒，其中所述细胞毒性剂经由含有马来酰亚胺部 分的连接体偶联到所述抗体。
38. 根据权利要求37所述的试剂盒，其中所述马来酰亚胺连接体选自由以下组成的群 组：马来酰亚胺基己酰基（me)、马来酰亚胺基己酰基-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-对-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和马来酰亚胺基己酰基-L-缬氨酸-L-瓜氨酸-对-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
39. 根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述GCC标靶治疗剂是特征在于式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶联物：
其中Ab是抗-GCC抗体分子，所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决定区（⑶Rl、 ⑶R2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三个轻链互补决 定区（CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整数。
40. 根据权利要求39所述的试剂盒，其中m是3到5。
41. 根据权利要求39所述的试剂盒，其中m是约4。
42. -种治疗患有特征在于一或多个表达GCC的细胞的疾病的患者的方法，其包含： a. 通过例如根据权利要求18到26中任一权利要求所述的方法检测从所述患者获得的 生物样品中的GCC蛋白质表达；和 b. 如果所述生物样品表达GCC，那么将GCC标靶治疗剂、例如本文所述的GCC标靶治疗 剂投与所述患者。
43. 根据权利要求42所述的方法，其中所述检测步骤包含以下步骤： i) 使所述生物样品与本文所述的抗-GCC抗体分子、例如根据权利要求1到13中任一 权利要求所述的抗-GCC抗体分子、例如包含以下的抗-GCC抗体分子接触：三个重链互补决 定区（CDR1、CDR2 和 CDR3)，其分别包含根据 SEQ ID N0:21、22 和 23 或 SEQ ID N0:33、34 和35的氨基酸序列；和三个轻链互补决定区（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :27、28和29或SEQ ID NO :39、40和41的氨基酸序列；和 ii) 检测所述抗-GCC抗体分子与GCC蛋白质之间的复合物的形成。
44. 根据权利要求43所述的方法，其中所述检测步骤是经由免疫组织化学来执行。
45. 根据权利要求43所述的方法，其中所述GCC标靶治疗剂包含抗-GCC抗体分子。
46. 根据权利要求45所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是单克隆抗体。
47. 根据权利要求45或46所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是人类IgGl 抗体。
48. 根据权利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决定区 (CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三个轻链 互补决定区（CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列。
49. 根据权利要求48所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子进一步包含包含根据SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重链可变区和包含根据SEQ ID NO :80的氨基酸序列的轻链可变 区。
50. 根据权利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子偶联到细胞毒性剂。
51. 根据权利要求50所述的方法，其中所述细胞毒性剂是奥里斯他汀分子。
52. 根据权利要求51所述的方法，其中所述奥里斯他汀分子是单甲基奥里斯他汀E MMAE或单甲基奥里斯他汀F MMAF。
53. 根据权利要求50到53所述的方法，其中所述细胞毒性剂是经由含有马来酰亚胺部 分的连接体偶联。
54. 根据权利要求53所述的方法，其中所述马来酰亚胺连接体选自由以下组成的群 组：马来酰亚胺基己酰基（me)、马来酰亚胺基己酰基-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-对-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和马来酰亚胺基己酰基-L-缬氨酸-L-瓜氨酸-对-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
55. 根据权利要求42所述的方法，其中所述GCC标靶治疗是特征在于式（1-4)、（1-5) 或（1-6)中任一者的免疫偶联物：
其中Ab是抗-GCC抗体分子，所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决定区（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三个轻链互补决 定区（CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整数。
56. 根据权利要求55所述的方法，其中m是约3到约5。
57. 根据权利要求56所述的方法，其中m是约4。
58. 根据权利要求42到57中任一权利要求所述的方法，其中所述特征在于一或多个表 达GCC的细胞的疾病选自由以下组成的群组：癌症、炎症性肠综合症、克隆氏病或帕金森氏 病。
59. 根据权利要求58所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：结肠直肠癌、 胃癌、小肠癌、食道癌、胰脏癌、肺癌、软组织肉瘤、神经外胚层肿瘤和神经内分泌肿瘤。
60. 根据权利要求59所述的方法，其中所述肺癌是鳞状细胞癌或腺癌。
61. 根据权利要求59所述的方法，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌肉瘤。
62. 根据权利要求59所述的方法，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管肺神经内 分泌肿瘤。
63. 根据权利要求42到62所述的方法，其中所述生物样品是细胞或组织生检。
64. 根据权利要求63所述的方法，其中所述细胞或组织生检是肿瘤生检。
65. -种测定癌细胞对GCC标靶治疗剂的敏感性和/或评估个体是否是GCC标靶治疗 的潜在候选者的方法，所述方法包含以下步骤： i) 提供来自患有癌症的患者的癌细胞样品； ii) 使所述样品与本文所述的抗-GCC抗体分子、例如根据权利要求1到13中任一权利 要求所述的抗-GCC抗体、例如包含以下的抗-GCC抗体接触：三个重链互补决定区（⑶R1、 CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的氨基 酸序列；和三个轻链互补决定区（CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID N0:27、28 和29或SEQ ID NO :39、40和41的氨基酸序列；和 iiii)检测所述抗-GCC抗体分子与GCC蛋白质之间的复合物的形成，由此测定所述癌 症对所述GCC标靶治疗剂、例如本文所述的GC标靶治疗剂的敏感性，和/或测定个体是否 是用GCC标靶治疗、例如本文所述的GCC标靶治疗来治疗的候选者。
66. 根据权利要求65所述的方法，其中所述检测步骤是经由免疫组织化学来执行。
67. 根据权利要求65或66所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：结肠 直肠癌、胃癌、小肠癌、食道癌、胰脏癌、肺癌、软组织肉瘤、神经外胚层肿瘤和神经内分泌肿 瘤。
68. 根据权利要求67所述的方法，其中所述肺癌是鳞状细胞癌或腺癌。
69. 根据权利要求67所述的方法，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌肉瘤。
70. 根据权利要求67所述的方法，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管肺神经内 分泌肿瘤。
71. 根据权利要求65到70中任一权利要求所述的方法，其进一步包含向所述患者投与 所述GCC标靶治疗剂、例如本文所述的GCC标靶治疗剂的步骤。
72. 根据权利要求71所述的方法，其中所述GCC标靶治疗剂包含抗-GCC抗体分子。
73. 根据权利要求72所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是单克隆抗体。
74. 根据权利要求72或73所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子是人类IgGl 抗体。
75. 根据权利要求72、73或74中任一权利要求所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗 体分子包含三个重链互补决定区（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO:67、68 和69的氨基酸序列；和三个轻链互补决定区（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71和72的氣基酸序列。
76. 根据权利要求75所述的方法，其中所述治疗性抗-GCC抗体分子进一步包含包含根 据SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重链可变区和包含根据SEQ ID NO :80的氨基酸序列的轻 链可变区。
77. 根据权利要求72到76中任一权利要求所述的方法，其中所述抗-GCC抗体分子偶 联到细胞毒性剂。
78. 根据权利要求77所述的方法，其中所述细胞毒性剂是奥里斯他汀分子。
79. 根据权利要求78所述的方法，其中所述奥里斯他汀分子是单甲基奥里斯他汀 EMMAE或单甲基奥里斯他汀F MMAF。
80. 根据权利要求77、78或79中任一权利要求所述的方法，其中所述细胞毒性剂是经 由含有马来酰亚胺部分的连接体偶联。
81. 根据权利要求80所述的方法，其中所述马来酰亚胺连接体选自由以下组成的群 组：马来酰亚胺基己酰基（me)、马来酰亚胺基己酰基-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-对-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和马来酰亚胺基己酰基-L-缬氨酸-L-瓜氨酸-对-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
82. 根据权利要求65到71所述的方法，其中所述GCC标靶治疗剂是特征在于式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶联物：
其中Ab是抗-GCC抗体分子，所述抗-GCC抗体分子包含三个重链互补决定区（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分别包含根据SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三个轻链互补决 定区（CDRUCDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整数。
83. 根据权利要求82所述的方法，其中m是约3到约5。
84. 根据权利要求83所述的方法，其中m是约4。
85. -种反应混合物，其包含生物样品和本文所述的抗-GCC抗体分子、例如根据权利 要求1到13中任一权利要求所述的抗-GCC抗体、例如包含以下的抗-GCC抗体分子：三个 重链互补决定区（CDR1、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO : 33、34和35的氨基酸序列；和三个轻链互补决定区（CDRl、CDR2和CDR3)，其分别包含 根据SEQ ID NO : 27、28和29或SEQ ID NO : 39、40和41的氨基酸序列。
86. 根据权利要求85所述的反应混合物，其中所述生物样品包含一或多个细胞。
87. 根据权利要求85所述的反应混合物，其中所述生物样品包含组织样品。
88. 根据权利要求87所述的反应混合物，其中所述组织样品是经石蜡包埋的组织样 品。
89. 根据权利要求85所述的反应混合物，其中所述生物样品是原发性或转移性肿瘤生 检样品。
90. 根据权利要求85所述的反应混合物，其中所述生物样品安装在载玻片上。
91. 根据权利要求89所述的反应混合物，其中所述肿瘤是结肠直肠肿瘤、胃肿瘤、小肠 肿瘤、食道肿瘤、胰脏肿瘤、肺肿瘤、软组织肉瘤、神经外胚层肿瘤或神经内分泌肿瘤。
92. 根据权利要求91所述的反应混合物，其中所述肺肿瘤是鳞状细胞癌或腺癌。
93. 根据权利要求91所述的反应混合物，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌 肉瘤。
94. 根据权利要求91所述的反应混合物，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管肺 神经内分泌肿瘤。
95. 根据权利要求85所述的反应混合物，其中怀疑所述生物样品含有GCC蛋白质。
96. 根据权利要求85到95中任一权利要求所述的反应混合物，其进一步包含适于检测 所述抗-GCC抗体与GCC蛋白质之间的复合物的形成的试剂。
97. -种产生个人化癌症治疗报告的方法，所述方法包含以下步骤： 使从怀疑患有表达GCC的癌症的癌症患者获得的包含一或多个癌细胞的生物样品与 本文所述的抗-GCC抗体分子、例如根据权利要求1到13中任一权利要求所述的抗-GCC 抗体分子、例如包含以下的抗-GCC抗体分子接触：三个重链互补决定区（⑶R1、⑶R2和 CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的氨基酸序列； 和三个轻链互补决定区（CDRl、CDR2和CDR3)，其分别包含根据SEQ ID NO : 27、28和29或 SEQ ID NO :39、40和41的氣基酸序列； 通过例如根据权利要求18到26中任一权利要求所述的方法检测所述生物样品中所述 抗-GCC分子与GCC蛋白质之间的复合物的形成； 对所述生物样品中的GCC表达进行定量； 将所述GCC表达水平与包含GCC标靶治疗、例如本文所述的GCC标靶治疗的数据库比 较；和 基于所述GCC表达水平选择GCC标靶治疗和任选地给药方案。
98. 根据权利要求97所述的方法，其中所述表达GCC的癌症是结肠直肠癌、胃癌、小肠 癌、食道癌、胰脏癌、肺癌、软组织肉瘤、神经外胚层肿瘤或神经内分泌肿瘤。
99. 根据权利要求98所述的方法，其中所述肺肿瘤是鳞状细胞癌或腺癌。
100. 根据权利要求98所述的方法，其中所述软组织肉瘤是平滑肌肉瘤或横纹肌肉瘤。
101. 根据权利要求98所述的反应混合物，其中所述神经内分泌肿瘤是胃肠或支气管 肺神经内分泌肿瘤。
102. 根据权利要求97到101中任一权利要求所述的方法，其中所述检测步骤是经由免 疫组织化学来执行。
103. 根据权利要求97到102中任一权利要求所述的方法，其中对GCC表达的所述定量 包含所述生物样品中的顶端GCC表达、所述生物样品中的细胞质GCC表达或_者。
104. 根据权利要求97到103所述的方法，其中所述定量步骤包含H-评分方法。
【文档编号】C12N15/10GK104395470SQ201380033309
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年4月27日 优先权日:2012年4月27日
【发明者】海伦·艾利森·弗兰克, 艾丽斯·A·麦克唐纳, 特雷莎·L·奥基夫 申请人:米伦纽姆医药公司