一种免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莫能菌素的方法及其专用单克隆抗体的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莫能菌素的方法及其专用单克隆抗体。本发明提供的莫能菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株MON（简称杂交瘤细胞株MON），保藏号为CGMCC?No.8952。杂交瘤细胞株MON分泌的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。所述单克隆抗体与磁珠偶联得到的免疫磁珠也属于本发明的保护范围。在本发明中，免疫磁珠的作用是富集净化样品中的MON分子，最后通过间接竞争ELISA检测浓缩后的样品，推算出待检MON含量。此法实现了对超出常规免疫检测方法检测限（1ng/mL）的MON样品进行检测，有效提高了检测灵敏度。
【专利说明】一种免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莫能菌素的方法及其专用单克隆抗体
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莫能菌素的方法及其专用单克隆抗体。
【背景技术】
[0002]莫能菌素(monensin,M0N)别名瘤胃素、莫能菌酸、欲可胖,于1967年首先由Haney等人从肉桂链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)的发酵液中分离得到，莫能菌素抗球虫谱广，对各种艾美耳球虫均有较强的抑杀作用，是二十世纪后期使用的主导抗球虫药物。另外莫能菌素还可用作牛和猪的促生长剂，提高饲料利用率与增重速度。由于莫能菌素的毒性较大，对人畜具有潜在危害性，其在动物组织中的残留问题日渐受到重视。我国已批准的动物性食品中莫能菌素最高残留限量为:牛羊可食用组织0.05μ g/mL、鸡火鸡肌肉
1.5 μ g/mL、鸡皮加脂肪 3.0 μ g/mL、鸡肝脏 4.5 μ g/mL。
[0003]目前莫能菌素的检测方法很多。微生物法经济、简单，但是灵敏度有限。因为莫能菌素缺乏紫外、荧光和电化学特征，因此基于HPLC都要对其衍生化引入发色团，尽管灵敏度高，但是前处理过程繁琐。液相色谱串联质谱技术的出现，避免了前处理中衍生化的过程，且灵敏度进一步提高，是各种兽药残留检测的确征方法，其检测限达0.05~0.2 μ g/kg，但仪器化程度高且价格昂贵，同时要求有专业的操作人员，不利于在基层推广及大量样本的筛选。
[0004]免疫磁珠(immunomagnctic beads, IMB)是免疫学与磁性载体技术结合而发展起来的一类新型材料。免疫磁珠是带有活 性基团的磁性微球，与单克隆抗体偶联后，与相应的抗原靶物质特异地结合形成复合物。在没有外加磁场的情况下，免疫磁珠可以发生反应并将特异地吸附在其表面的靶物质稳定的悬浮在溶液中；在有外加磁场的情况下，可以迅速的分离免疫复合物。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莫能菌素的方法及其专用单克隆抗体。
[0006]本发明提供的莫能菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株MON(简称杂交瘤细胞株Μ0Ν)，已于2014年3月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，保藏号为CGMCC N0.8952。
[0007]杂交瘤细胞株MON分泌的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。
[0008]所述单克隆抗体与磁珠偶联得到的免疫磁珠也属于本发明的保护范围。所述磁珠具体可为羧基磁珠。
[0009]本发明还保护杂交瘤细胞株MON或所述单克隆抗体在制备用于检测莫能菌素的试剂盒中的应用。[0010]本发明还保护所述单克隆抗体在检测莫能菌素中的应用。
[0011]本发明还保护所述免疫磁珠在制备用于富集莫能菌素的试剂盒中的应用。
[0012]本发明还保护所述免疫磁珠在富集莫能菌素中的应用。
[0013]本发明还保护式(I )所示化合物；
[0014]
【权利要求】
1.莫能菌素单克隆抗体杂交瘤细胞株MON，其保藏编号为CGMCCN0.8952。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
3.将权利要求2所述单克隆抗体与磁珠偶联得到的免疫磁珠。
4.权利要求1所述杂交瘤细胞株MON或权利要求2所述单克隆抗体在制备用于检测莫能菌素的试剂盒中的应用。
5.权利要求2所述单克隆抗体在检测莫能菌素中的应用。
6.权利要求3所述免疫磁珠在制备用于富集莫能菌素的试剂盒中的应用。
7.权利要求3所述免疫磁珠再富集莫能菌素中的应用。
8.式(I)所示化合物；
9.一种用于检测待测样本中是否含有莫能菌素的试剂盒，包括权利要求3或4所述免疫磁珠和权利要求2所述单克隆抗体。
10.一种检测待测样本中是否含有莫能菌素的方法，依次包括如下步骤: (1)采用所述免疫磁珠富集待测样本中的莫能菌素，得到富集物； (2)采用式(I)所示化合物为包被原，采用所述单克隆抗体为一抗，通过酶联免疫反应检测富集物中是否含有莫能菌素。
【文档编号】C12R1/91GK104031886SQ201410103273
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年3月19日 优先权日:2014年3月19日
【发明者】沈建忠, 李建成, 张筱筱, 郭燕, 刘爽 申请人:中国农业大学