类受体蛋白激酶合成基因erecta第27个外显子单碱基突变的快速检测体系及检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种类受体蛋白激酶合成基因ERECTA第27个外显子单碱基突变的快速检测体系及检测方法。其主要的特征在于该体系以水为溶剂，体系如为：ddH2O，11.7μl；10xBuffer，1.5μl；dNTP，0.2μl；erecta-MF，0.2μl；erecta-WF，0.2μl；erecta-R，0.2μl；TaqDNA聚合酶，0.2μl；模板DNA，0.2μl。所述的erecta-MF为第一对特异正向引物：5’-GACATTTGAAGGGATCTTTT-3’，所述的erecta-WF为第二对特异正向引物：5’-GACATTTGAAGGGATCTTTC-3’，所述的erecta-R为反向引物：5’-AAGCTCTTCTGGAATTGGG-3’。该检测体系及方法低成本、简便、快捷的分子生物学检测手段，为利用分子标记进行拟南芥的标记提供了有效的技术手段。
【专利说明】类受体蛋白激酶合成基因ERECTA第27个外显子单碱基突变的快速检测体系及检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种类受体蛋白激酶合成基因及第27个外显子单碱基突变的快速检测体系及检测方法。
【背景技术】
[0002]ERECTA编码的蛋白是属于富含亮氨酸重复蛋白类受体激酶家族，在花药发育早期的细胞分化作用中是冗余的，也影响着花药的发育，其突变体表现为雄性不育。在拟南芥突变体erecia中，位于第27个外显子的3067bp的位置C-T突变，导致其435位的丝氨酸变为苯丙氨酸。
[0003]目前针对及?汉7以基因第27个外显子单碱基突变的研究除了直接测序外，已建立了两种检测方法:
(一 )PCR-SSCP法:该方法是PCR技术与SSCP技术的结合，其过程是:I )PCR扩增目的DNA ；2)将特异的PCR扩增产物变性，在快速复性，使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子；3)将适量的单链DNA分子进行非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳；4)最后通过放射性自显影、银染或溴化乙钉显色分析结果。若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变，就可以判定该链构象发生改变，进而推断该DNA片段中有碱基突变。
[0004]该方法快速、灵敏、简便，不需要特殊分仪器，适合临床实验的需要。但它也有不足之处，例如只能作为一种突变检测方法，要最后确定突变的位置和类型，还需要进一步测序；电泳条件要求较严格；有假阳性出现。
[0005](二)聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法:该技术基本原理是用PCR扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布不同，产生不同长度的DNA片段条带。此技术提高了产物的含量和相对特异性，而且方法简单，时间短。PCR-RFLP法标记在二倍体植物研究中可发挥巨大的作用，是PCR标记的有力补充。但是在多倍体植物中的应用有一定的局限性。另外，PCR-RFLP法标记需要使用内切酶，增加了实验成本，限制了该技术的广泛应用。
[0006]所以，建立一种经济、快速、准确的检测拟南芥基因ERECTA第27个外显子单碱基突变的分子技术方法是非常必要的。
【发明内容】
[0007]本发明目的之一是提供一种类受体蛋白激酶合成基因/^^烈第27个外显子单碱基突变的快速检测体系。
[0008]目的之二是提供一种快速检测方法。 [0009]本发明通过以下技术方案实现，本发明的具体步骤:
一种快速检测类受体蛋白激酶合成基因及第27个外显子单碱基突变的体系，其主要的特征在于该体系以水为溶剂，体系如下:
【权利要求】
1.一种类受体蛋白激酶合成基因及第27个外显子单碱基突变的快速检测体系，其主要的特征在于该体系以水为溶剂，其组成及各组成的浓度如下:
【文档编号】C12Q1/68GK103993077SQ201410187519
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年5月6日 优先权日:2014年5月6日
【发明者】张卫, 司英语, 郑亚杰, 郑帮, 孙恒吉, 陈燕 申请人:上海大学