蚕丝蛋白小分子多肽制备方法

蚕丝蛋白小分子多肽制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用蚕丝蛋白质生产小分子多肽，包括下列步骤：首先把蚕的自身油脂分离出去；蚕丝蛋白质经油脂分离后加工成200目～300目的粉剂；将蚕丝蛋白与木瓜蛋白酶的20%～50%进行酶解，酶解时加入5%～10%的富硒酵酶进行发酵处理，发酵处理时间为24小时；然后将发酵好的蚕丝蛋白小分子多肽进行冷冻干燥处理，蚕丝蛋白小分子多肽含水量不超过13%～15%；最后进行产品包装，包装要求是必须采用充氮包装。采用本发明的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用生物定向酶解技术从蚕蛋白中制取蚕丝蛋白小分子多肽，蚕丝蛋白小分子多肽具有抗衰老、易于消化吸收、对人类机体的生物调节作用以及低抗原性的特点。
【专利说明】蚕丝蛋白小分子多肽制备方法
【技术领域】
[0001]发明涉及蚕蛋白肽，具体涉及一种蚕丝蛋白小分子多肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]蚕蛋白是人体血浆中的一种功能大分子蛋白质，是维持血浆渗透压、增加血容量、提供平衡氨基酸的重要成分，是人体不可或缺的营养物质。蚕蛋白的氨基酸组成比例非常相似，具有全部的20种氨基酸，其生物效价高达94，是优秀的蛋白质。蚕蛋白通过酶解获得的小分子肽，它更有利于人体吸收，并且对机体具有多种生理调节功能，如抗氧化延缓衰老、增强机体免疫力、抵制血管紧张素转换酶产生降低血压作用等。
[0003]蚕蛋白肽来源于蚕蛋白，利用现代生物工程技术经复合酶定向酶解提取并经一系列加工技术提取的具有生物活性的小分子肽，正是本领域技术人员致力于研发的一项课题。
【发明内容】

[0004]本发明的任务是提供一种蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，从蚕蛋白中制取蚕丝蛋白小分子多肽，利用生物定向酶解技术制取蚕丝蛋白小分子多肽，蚕丝蛋白小分子多肽具有抗衰老、易于消化吸收、对人类机体的生物调节作用以及低抗原性的特点。
[0005]本发明的技术解决方案如下:
一种蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用蚕丝蛋白质生产小分子多肽，包括下列步
骤:
首先把蚕的自身油脂分离出去；
蚕丝蛋白质经油脂分离后加工成200目~300目的粉剂；
将蚕丝蛋白与木瓜蛋白酶的20%~50%进行酶解，酶解时加入5%~10%的富硒酵酶进行发酵处理，发酵处理时间为24小时；
然后将发酵好的蚕丝蛋白小分子多肽进行冷冻干燥处理，蚕丝蛋白小分子多肽含水量不超过13%~15% ；
最后进行产品包装，包装要求是必须采用充氮包装。
[0006]所述蚕丝蛋白小分子多肽粉剂呈乳白色或微黄色，无嗅无味，可完全溶解于水并呈无色透明状态。
[0007]所述蚕丝蛋白小分子多肽的含量> 80%。
[0008]所述蚕丝蛋白小分子多肽含有蛋白质30%~45%，类蚕蛋白12%，蛋白及黏蛋白14%，球白蛋8%，可溶解细菌胞壁的溶解酶3.4%。
[0009]所述蚕丝蛋白小分子多肽制成口服粉粒或液剂。
[0010]采用本发明的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用生物定向酶解技术从蚕蛋白中制取蚕丝蛋白小分子多肽，蚕丝蛋白小分子多肽粉剂呈乳白或微黄色，无嗅无味，完全溶解于水并呈无色透明状态。蚕丝蛋白小分子多肽具有抗衰老、易于消化吸收、对人类机体的生物调节作用以及低抗原性的特点。
【专利附图】

【附图说明】
[0011]图1是按本发明的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法制取的蛹虫肽成品检验报告。【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明作详细说明。
[0013]按本发明的一种蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用蚕丝蛋白质生产小分子多肽，包括下列步骤:
首先把蚕的自身油脂分离出去，因为蚕本身的含油量会影响生产多肽的工艺生产。蚕分离出来的油脂还有很高的价值，可加以充分利用。
[0014]蚕丝蛋白质经油脂分离后加工成200目~300目的粉剂。蚕丝蛋白小分子多肽粉剂呈乳白色或微黄色，无嗅无味，可完全溶解于水并呈无色透明状态。
[0015]再将蚕蛋白与木瓜蛋白酶的20%~50%进行酶解，酶解时加入5%~10%的富硒酵酶进行发酵处理，发酵处理时间为24小时。
[0016]然后将发酵好的蚕丝蛋白小分子多肽进行冷冻干燥处理，蚕丝蛋白小分子多肽含水量不超过13%~15%，蚕丝蛋白小分子多肽的含量> 80%。 [0017]蚕丝蛋白小分子多肽含有蛋白质30%~45%，类蚕蛋白12%，蛋白及黏蛋白14%，球白蛋8%，可溶解细菌胞壁的溶解酶3.4%。
[0018]最后进行产品包装，包装要求是必须采用充氮包装，否则产品会变质。充氮包装的蚕丝蛋白小分子多肽产品在一般情况下保质期可达2~3年。
[0019]按本发明方法制备的蚕丝蛋白小分子多肽可制成口服粉末、颗粒、胶囊或液剂，口服功能肽对人类机体具有生物调节作用。
[0020]图1显示了按本发明的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法制取的蛹虫肽成品检验报告。蛹虫肽即为蚕蛋白肽，其外观为棕色粉末，无肉眼可见杂质，无异味。其中水分含量
2.98g，灰分含量6.8g，蛋白质(干基)73.1g,多肽(干基)72.0g,总糖6.2g，≤相对分子质量肽段所占总肽段的质量分数为92.05%。检验结论为合格。
[0021]按本发明方法制备的蚕丝蛋白小分子多肽具有以下具体的理化特性:
1、蚕丝蛋白小分子多肽的含量:> 80%。
[0022]2、蚕蛋白肽相对分子质量范围:HPLC法，色谱条件为Agilent 1100, TSKge12000Sffxl,300X7.8mm (TOSH 公司);流动相:乙腈:水:三氟水酸=20:80:0.l，220nm，
0.5ml/min。应用GPC软件分析可知，蚕蛋白肽相对分子质量分数范围为:小于1.0XlO6占84%，1.0X IO6~2.0X IO6占13%，大于2.0X IO6占3%左右，主要分布在1.0XlO6以下。
[0023]3、蚕蛋白肽氨基酸组成:以百分含量(％)计，其中Asp 7.48，Ser 6.82，Gly 2.92,Ala 4.72, Tyr 3.26, Val 5.34，Phe 6.72, Leu 8.64,Pro 2.60，Glu 10.94，His 1.80, Thr
3.20，Arg 4.50，Cys 1.16，Met 3.46，Ile 4.27，Lys 5.36。
[0024]4、易于消化吸收:近年来，肽类物质在人类机体的吸收过程已有较新的研究报道，已证实肠黏膜存在吸收低肽的转运体系，肠道吸收不仅是以氨基酸的形式，更多是以寡肽的形式被吸收。饮食中不同长度的肽段(2~3氨基酸甚至10~51氨基酸)均可不同程度地经肠道吸收，并可作为生物活性肽在组织水平上引起机体的生物学效应。
[0025]5、口服多肽对人类机体的生物调节作用:已经证实一些低相对分子质量的肽被肠道吸收后可直接进入血液，产生生物学效应。此外，一些相对分子质量较大的多肽也能以完整的形式经跨细胞膜途径、旁细胞途径、M细胞途径被肠道吸收并在体内产生效应。据研究报道，经肠给予大鼠125ug促甲状腺激素释放激素(TRH，三肽)与静脉给予TRH50ug比较，血液内可产生相同强度的促甲状腺激素(TSH)应答。经肠给予促黄体激素释放(LHRH，10肽)与静脉给予LHRH比较，血液内测定的应答激素FSH是静脉给予的50%。上述实验表明，口服具有生物活性的功能肽对人类机体是可以产生调节作用的。
[0026]6、低抗原性:已经证实，除补充营养外，由于蚕丝蛋白小分子多肽是小分子物质，在体内产生生物学效应时，并不会引起身体的过敏反应，这对于婴幼儿、老年人、病后恢复期及胃肠道功能障碍患者更具有显著的应用价值。
[0027]按本发明方法制备的蚕丝蛋白小分子多肽产品可应用于多肽抗衰老或延缓衰老，通过口服小分子多肽蛋白，可通过小肠的转运通道直接为细胞、组织器官所利用。蚕丝蛋白小分子多肽还具有对人类机体的抗氧化作用、增强免疫功能及内分泌调节作用。
[0028]蚕丝蛋白小分子多肽具有体外抗氧化作用:蚕蛋白的蛋白酶水解物中存在具有抗氧化性的活性肽，这类活性肽能抵制机体内自由基的大量积累，对提高自由基清除机制起到一定功效，从而 能在一定程度上消除机体内多种生理功能障碍，延缓机体的衰老，减少各种老年性疾病的发生。实验证明:蚕丝蛋白小分子多肽的抗氧化能力随其浓度的增加而增强，在试验浓度(1~100mg/ml)范围内对自由基均有清除作用，并且随着浓度增加，其清除自由基的作用增强。当浓度超过50mg/ml时，清除率增加缓慢。不同工艺得到的蚕丝蛋白小分子多肽，其抗氧化能力也不相同。由碱性酶水解得到的蚕丝蛋白小分子多肽抗氧化活力比由蛋白酶水解得到的蚕丝蛋白小分子多肽抗氧化活力强。
[0029]蚕蛋白肽对衰老模型小鼠的抗氧化作用:采用颈背部皮下注射D-半乳糖的方法制备衰老模型，然后灌喂不同剂量的蚕蛋白肽45d，测定血液中的血红蛋白值、MDA值和SOD活性、肝组织的SOD活性。结果表明:蚕蛋白肽三个剂量组均能提高小鼠的血红蛋白的含量；蚕蛋白肽20倍及30倍组具有降低血中MDA含量的作用；蚕蛋白肽20倍组血中SOD的活性显著高于模型空白组(P < 0.05)；20倍及30倍组蚕蛋白肽均能提高小鼠肝组织的SOD活性。由此提示蚕蛋白肽对小鼠衰老模型具有抗氧化、延衰老作用。
[0030]蚕丝蛋白小分子多肽对小鼠机体具有免疫增强作用:蚕丝蛋白小分子多肽含有30%~45%的蛋白质，12%的类蚕蛋白(转铁蛋白)，14%的蛋白及黏蛋白，8%的球白蛋，3.4%的可溶解细菌胞壁的溶解酶，以及其它一些蛋白质。
[0031]蚕蛋白质特定蛋白酶水解的产物(蚕蛋白肽或蛋白肽)具有多种理化特性及功能，如凝胶性、乳化性、起泡性、热凝结性等，这些特性使它在许多食物中成为理想的添加剂。蚕蛋白肽具有增强核酸在小肠吸收及促进机体脾淋巴细胞增殖的作用。通过系列过滤、层析、纯化等方法，蚕蛋白中的免疫球蛋白能够被强化和分离，并具有提高机体抵抗疾病的能力。
[0032]通过对细胞和体液免疫功能的研究结果表明，蚕蛋白肽三个剂量与对照组比较，未见对动物体重及体重增长有明显的影响。三个剂量组的胸腺/体重比例与对照组比较，差异均有统计学意义。免疫功能检测结果证实，迟发型变态反应试验耳肿程度与对照组比较，10倍、20倍、30倍剂量组差异非常显著；小鼠半数深血值测定，10倍、20倍、30倍剂量组的HC50值与对照组比较差异有统计学意义；小鼠巨噬率和蚕噬指数均极显著高于对照组，10倍剂量组的吞噬率显著高于对照组；NK细胞活性测定表明，与对照组比较，30倍剂量组显著升高，呈阳性结果。以上结果提示蚕蛋白肽具有显著提高小鼠细胞及体液免疫功能的作用。
[0033]由蚕蛋白酶解产生的蚕蛋白肽除具有补充蛋白质营养和必需氨基酸的作用外，对人体还具备多种调节功能，如调节免疫、促进食物中各种营养特质在肠道的吸收、抗氧化、抵制血管紧张素转换酶活性降低血压等多种生理调节功能。最近研究表明，蚕蛋白肽可使抗原免疫小鼠的血清免疫球蛋白水平显著升高。国外Schanbacher报道，蚕蛋白肽在体外试验中能增强小鼠腹腔世噬细胞对羊红细胞的吞噬作用，静脉注射可使小鼠增强抗肺炎克氏杆菌感染的能力。研究人员用蚕蛋白肽注射93例白血病患者，发现蚕蛋白肽能显著增强白血病患者的抗感染能力，降低其病死率。目前发现蚕蛋白肽可以完整的多肽形式被肠道吸收，这些小分子多肽能够刺激机体自身淋巴细胞的增殖、促进细胞因子的释放、增强机体巨噬细胞的巨噬能力，且在极低剂量下的激活巨噬细胞蚕噬功能的作用，其作用机制是通过诱发大鼠淋巴细胞大量增生，增强淋巴细胞向炎症部位移动，并诱导淋巴细胞分泌淋巴因子，从而促进机体免疫功能增强。
[0034]经实验观察，蚕蛋白肽具有促进核酸在小肠的吸收及在胸腺等免疫器官的分布，以及蚕蛋白肽含有均衡分布的各种氨基酸成分，由此提示蚕蛋白肽对免疫功能的增强作用可能与提供免疫细胞增殖、分化所需的营养物质有关。此外，国外Lillard等报道，蚕蛋白肽具有显著增强CD3诱导的CD4T淋巴细胞的增殖反应以及细胞因子的释放和共刺激因子的表达。提示蚕蛋白肽也可能通过促进与免疫有关的生物活性物质的产生，达到提高免疫力的作用。实验结果表明蚕蛋白肽对于增强体质、预防疾病以及促进病后的康复是有利的。
[0035]结果表明，小鼠口服蚕蛋白肽以及核酸组与单纯服用核酸组进行比较，蚕蛋白肽具有显著促进核苷酸的吸收作用，表现在同一检测时间内，核苷酸在肝脏及胸腺内增高。肝脏是机体新陈代谢的最重要器官，核酸原料在此富集，表明有利于机体细胞修复及延缓衰老作用。胸腺是免疫系统的中枢器官，核酸在胸腺的富集，表明有利于机体免疫细胞在此成熟、分化等过程，保证免疫细胞在此处的更新及其所需的各种基本物质和原料的供应。
[0036]综上所述，采用本发明的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，利用生物定向酶解技术从蚕蛋白中制取蚕丝蛋白小分子多肽，蚕丝蛋白小分子多肽具有抗衰老、易于消化吸收、对人类机体的生物调节作用以及低抗原性的特点。
[0037]当然，本【技术领域】内的一般技术人员应当认识到，上述实施例仅是用来说明本发明，而并非用作对本发明的限定，只要在本发明的实质精神范围内，对上述实施例的变化、变型等都将落在本发明权利要求的范围内。
【权利要求】
1.一种蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，其特征在于，利用蚕丝蛋白质生产小分子多肽，包括下列步骤: 首先把蚕的自身油脂分离出去； 蚕丝蛋白质经油脂分离后加工成200目~300目的粉剂； 将蚕丝蛋白与木瓜蛋白酶的20%~50%进行酶解，酶解时加入5%~10%的富硒酵酶进行发酵处理，发酵处理时间为24小时； 然后将发酵好的蚕丝蛋白小分子多肽进行冷冻干燥处理，蚕丝蛋白小分子多肽含水量不超过13%~15% ； 最后进行产品包装，包装要求是必须采用充氮包装。
2.根据权利要求1所述的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，其特征在于:所述蚕丝蛋白小分子多肽粉剂呈乳白色或微黄色，无嗅无味，可完全溶解于水并呈无色透明状态。
3.根据权利要求1所述的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，其特征在于:所述蚕丝蛋白小分子 多肽的含量> 80%。
4.根据权利要求1所述的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，其特征在于:所述蚕丝蛋白小分子多肽含有蛋白质30%~45%，类蚕蛋白12%，蛋白及黏蛋白14%，球白蛋8%，可溶解细菌胞壁的溶解酶3.4%。
5.根据权利要求1所述的蚕丝蛋白小分子多肽制备方法，其特征在于:所述蚕丝蛋白小分子多肽制成口服粉粒或液剂。
【文档编号】C12P21/06GK103923965SQ201410194925
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年5月11日 优先权日:2014年5月11日
【发明者】徐华 申请人:徐华