一种猴头菌丝体及其培育方法
【专利摘要】本发明公开了一种猴头菌丝体及其培育方法，含有较高含量的氨基酸、维生素，还含有7种环二肽、麦角甾醇及羧甲基纤维素酶活力，7种环二肽分别为：环(缬氨酸-酪氨酸)、环(亮氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-酪氨酸)、环(苯丙氨酸-苯丙氨酸)、环(亮氨酸-亮氨酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(缬氨酸-丙氨酸)。培育方法包括母种菌株培养、原种菌株培养、栽培种菌株培养、一次“定向”生物转化和二次“定向”生物转化过程。培育出的猴头菌丝体具有较好的抗肿瘤疗效。
【专利说明】一种猴头菌丝体及其培育方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物工程领域，特别是指一种含有7种环二肽、麦角留醇及羧甲基 纤维素酶活力的猴头菌丝体及其培育方法。
【背景技术】
[0002] 猴头菌丝体是齿菌科真菌猴头菌Hericium erinaceus (Bull. )Pers.经定向生物 转化而得到的菌丝体，用于治疗胃肠道疾病已经超过2000年的历史了，一系列小分子化合 物如erinacines，被认为具有神经再生，并且可以透过血脑屏障修复受损神经组织，猴头菌 还有抗溃瘍，抗炎，抗微生物，免疫调节，提高肝功能，抗衰老，降低血糖和血脂，提高抗缺氧 能力，增加心脏输出、和改善备注循环等作用，包含猴头菌的医用制剂在中国广泛使用。
[0003] 猴头菌丝体的活性物质主要是菌类多糖。目前国内外对菌类多糖的药理作用研究 综合起来有以下几方面：治疗慢性胃炎胃溃疡，增强机体免疫力，促进神经生长因子表达， 抗癌等。研究表明，此种猴头菌丝体多糖具有多种生物活性和药理作用，能增强巨噬细胞的 吞噬功能，促进溶血素的形成，抗白细胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突变和抗衰老等。 因此，猴头菌丝体多糖备受人们关注，成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域研究 和开发应用热点。
[0004] 近年来，随着分离手段的不断完善和对猴头菌丝体作用机制深入研究的需要，人 们从其子实体和菌丝体中纯化得到多种新化合物，并对单一物质具有的药理活性进行研 究。其主要成分有：多糖、低聚糖、留醇类、猴头菌丝体素、腺苷、酶等。药理作用有：对消化 系统的保护、提高免疫功能及、抗突变、抗肿瘸、降血糖、抗氧化延缓衰老、神经保护作用，猴 头菌丝体还有抗菌、抑制血小板聚集、保护肝脏、改善局部缺血脑损伤等作用。临床研究表 明，猴头菌丝体制剂在临床上已被广泛用于治疗胃肠道消化系统的疾病，在治疗胃癌癌前 病变和作为治疗肿瘤辅助用药方面也有较好的疗效。在治疗神经系统疾病（如Alzheimer s病、认知功能障碍）和糖脂代谢紊乱疾病（如高脂血症、糖尿病）等方面也有潜在的应用 前景。
[0005] 当前，从高等真菌及其培养物中筛选和发现活性成分，应用于抗肿瘤、抗癌，不仅 已经成为国家研究新药的重点发展方向，也是当今世界各国开发生物医药的热点。
[0006] 环二肤（cyclic dipeptides)，又名 2, 5_ 二氧哌嗪（2, 5-dioxopiperazines)或 2,5-二酮哌嗪（2,5-(111?51：(^1口6四2；[1168)，由两个氨基酸通过肽键环合形成，是自然界中 最小的环肽。自然界中存在的环二肽一般由A-氨基酸（常为L-氨基酸）形成相对稳定的 六元环。许多环二肽是动植物中生来就有的，也有一些是通过发酵或者是在食品加工过程 中形成的。随着人们对环二肽的深入研究，发现该类化合物具有多种生物活性，这引起了 许多学者的极大兴趣。
[0007] 麦角留醇又称麦角固醇，是脂溶性维生素 D2的前体，当受到紫外线照射时可转化 为维生素 D2。麦角留醇是真菌细胞膜的重要结构组成成分，在真菌生活中起重要作用。一 些不同类型的化合物通过作用于真菌麦角留醇生物合成途径中不同环节的酶，干扰真菌 麦角留醇生物合成，发挥抗真菌作用。经药效实验表明，麦角留醇在无毒剂量下，与化疗药 物阿霉素联用，可以促进化疗药物在细胞内的积累而逆转肿瘤细胞的耐药性。有多篇文献 报道，麦角留醇具有抗肿瘤效果。
[0008] 现有技术未有文献报导猴头菌、猴头菌丝体、猴头菇等含有环二肽，也未有文献报 导猴头菌、猴头菌丝体、猴头菇等同时含有环二肽、麦角留醇、纤维素酶。因此，一种同时含 有环二肽、麦角留醇、纤维素酶的猴头菌丝体的培育能够充分挖掘和利用猴头菌丝体的药 用价值。而且，传统的固体发酵由于容易污染杂菌的难题，传统的固体发酵很难大规模、工 业化、质量稳定地生产，这些都是需要解决的技术问题。
【发明内容】
[0009] 有鉴于此，本发明的目的在于提出一种猴头菌丝体及其培育方法，该猴头菌丝体 同时含有7种环二肽、麦角留醇、纤维素酶，能够弥补此领域的空白。
[0010] 基于上述目的本发明提供的一种猴头菌丝体，含有7种环二肽，分别为：环（缬氨 酸-酪氨酸）、环（亮氨酸-酪氨酸）、环（苯丙氨酸-酪氨酸）、环（苯丙氨酸-苯丙氨 酸）、环（亮氨酸-亮氨酸）、环（亮氨酸-丙氨酸）、环（缬氨酸-丙氨酸），具体结构见表 1 ：
[0011] 表1 7种环二肽名称及其结构式
[0012]
【权利要求】
1. 一种猴头菌丝体，含有氨基酸和维生素，其特征在于，还含有7种环二肽、麦角甾醇 及羧甲基纤维素酶，7种环二肽分别为：环（缬氨酸-酪氨酸）、环（亮氨酸-酪氨酸）、环 (苯丙氨酸-酪氨酸）、环（苯丙氨酸-苯丙氨酸）、环（亮氨酸-亮氨酸）、环（亮氨酸-丙 氨酸）、环（缬氨酸-丙氨酸）。
2. 根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述7种环二肽的每种含量为 0· 01%?0· 5%。
3. 根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述麦角留醇的含量为0. 05%? 0· 5%。
4. 根据权利要求1所述的猴头菌丝体，其特征在于，所述羧甲基纤维素酶活力为150? 300U/ 克。
5. -种权利要求1所述的猴头菌丝体的培育方法，其特征在于，包含如下步骤： ⑴母种菌株培养：将猴头菌株接种到母种培养基中，20°C -28°C恒温培养8天-12天； 所述母种培养基的成分为马铃薯75 % -85 %、卡拉胶5-10 %、葡萄糖4% -8%、酵母浸膏 1% -4%、蛋白胨1% -4%、磷酸二氢钾0-1%、磷酸氢二钾0-1%、硫酸镁0-1%、维生素& 0-1 %、维生素 B2 0-1% ; (2) 原种菌株培养：将步骤（1)培养得到的菌株接种到原种培养基中20°C -28°C培 养25天-35天；所述原种培养基的成分为棉籽壳65% -75%、麦麸皮15% -25%、玉米粉 5% -15% ； (3) 栽培种菌株培养：将步骤（2)得到的菌株接种到栽培种培养基中20°C -28°C培 养35天-45天；所述栽培种培养基成份为棉籽壳65% -75%、麦麸皮15% -25%、玉米粉 5% -15% ； (4) 一次"定向"生物转化：将步骤（3)得到的菌株接种到定向生物转化培养基中 20°C -28°C培养45天-55天；所述定向生物转化培养基成份为麦麸皮65% -75%、玉米粉 15% -25%、谷糠 5% -15% ; (5) 二次"定向"生物转化：将步骤⑷培养后的所述定向生物转化培养基转入塑料袋 中在培养室培养5-15天，培养温度为20-28°C，取出，低于70°C烘干。
6. 根据权利要求5所述的猴头菌丝体的培育方法，其特征在于，所述定向生物转化培 养基成份为麦麸皮70%、玉米粉20%、谷糠10%。
【文档编号】C12N1/14GK104195052SQ201410393488
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月12日 优先权日:2014年8月12日
【发明者】何述金, 常耀台 申请人:湖南新汇制药股份有限公司