一种鸡用微生态制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种鸡用微生态制剂及其制备方法，属于微生物制剂制备【技术领域】。本发明的鸡用微生态制剂是将鸡全肠内容物用培养基稀释，然后过滤，得滤液；然后将滤液接种于培养基，于厌氧培养系统、40.5-41.5°C培养35-37h，得肠菌培养液种子液；最后将种子液接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为0.018-0.022MPa、pH为6.8-7.0，于40.5-41.5°C静止培养46-50h。该微生态制剂是一种全天候、多菌属、联合、协调和叠加共同起作用的生物源性复合制剂，无毒副作用，不存在排异反应，无药物残留，无激素残留，不产生细菌的耐药性。其所含有效活菌含量不低于100亿个/ml;其主要益生菌的生物活性有效期在常温下延长至8个月。
【专利说明】-种鸡用微生态制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种鸡用微生态制剂及其制备方法，属于微生物制剂制备【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 微生态制剂又名促生素、利生素、活菌制剂、益生素，是从动物或自然界分离、鉴定 或通过生物工程人工组建的有益微生物，经培养、发酵、干燥、加工等特殊工艺制成的含有 活菌并用于动物的生物制剂或活菌制剂。广义的动物微生态制剂既包括正常微生物成员， 即益生素（菌），还包括一些能促进正常微生物群生长繁殖所需物质的制剂，如低聚糖等益 生元。狭义上，微生态制剂就指益生素。本发明中所述微生态制剂为广义含义的微生态制 剂。
[0003] 根据菌种组成，微生态制剂可分为单一菌制剂和复合菌制剂。常见的单一菌制剂 为乳酸菌制剂、芽孢杆菌制剂、酵母菌制剂、放线菌制剂及光合细菌制剂等几大类。作为本 领域技术人员公知的是，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长 因子、水及能源，但是不同类型微生物对营养物质的需求是不一样的。所以，复合菌制剂的 制备要远远难于单一菌制剂的制备；因此，目前所公开的复合菌制剂较少。其中所含复合菌 种类最多的是日本琉球大学比嘉照夫教授发明的复合微生物制剂，由光合细菌、乳酸菌、酵 母菌和放线菌等10属80多种微生物组成。但是健康人群以及其它动物的肠道中存在的菌 种种类高达1000多种，这些微生物菌群在肠道免疫系统的形成上扮演着重要作用，且每种 微生物对于维持机体消化和维生素代谢以及对于宿主的健康都是功不可没的，如果改变肠 道菌群的组成将会增加食品过敏或者肠道炎性疾病的风险。所以，单一菌制剂和复合菌制 剂存在以下缺陷：1.单一菌种和复合制剂功能不全面，联合、协调和叠加作用不明显；2.有 些单一菌种和复合制剂使用的菌种非原籍菌，存在致病风险。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种含有与固有菌群的杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例 基本保持一致菌群的微生态制剂及其制备方法。
[0005] 本发明实现上述发明目的的技术方案： 一种鸡用微生态制剂的制备方法，其步骤为： (1) 将SPF成年母鸡全肠内容物用9-11倍其重量的培养基稀释，然后过滤，得滤液； (2) 将滤液按9-11%的接种量接种于培养基，于厌氧培养系统、40. 5-41. 5°C静止培养 35-37h，得肠菌培养液种子液； (3) 将种子液按4. 5-5. 5%的接种量接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为 0· 018-0. 022MPa、pH 为 6. 8-7. 0,于 40. 5-41. 5°C静止培养 46-50h。
[0006] 步骤（2)和（3)所用培养基的制备方法：取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白 胨8g、盐酸半胱氨酸0. 6g、大豆蛋白胨6g、维生素B1O. 4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性 淀粉0. 5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸镁IOg ;然后加热至溶解，再搅拌至混合均匀； 然后加水补足1000ml，再调pH值至7. O ;于121°C灭菌30分钟即得IOOOml培养基。
[0007] 上述制备方法，其步骤（1)、（2)和（3)中的数据(用量比例、发酵参数）的改变会 影响所制备的微生态制剂的品质；即含菌群的种类、各菌群的含量、活菌含量、常温保存期 等。所以，必须将上述数据限定在本发明的范围内，此时所制备的生态制剂的有效活菌含量 不低于100亿个/ml，常温保存期可达8个月；与鸡肠道内固有菌群相比，其杆菌球菌比例、 阳性菌阴性菌比例与鸡肠道内固有菌群的基本保持一致，杆菌球菌的比例80:20-85:15之 间；革兰氏阳性菌和阴性菌的比例在75:25-85:15之间；且嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、 乳酸片球菌、酵母菌和含量分别增加8-10%、4-5%、4-5%、8-10%、4-5%。
[0008] 上述制备方法，优选的，步骤（1)中全肠内容物与培养基的重量比为1:10 ; 步骤（2)中滤液按10%的接种量接种于培养基，41°C静止培养36h ; 步骤（3)中将种子液按5%的接种量接种于发酵罐中，压力为0. 02MPa、pH为6. 8-7. 0， 于41°C静止培养48h。在此制备条件下制备的生态制剂，有效活菌含量不低于110亿/ml， 常温保存期可达9个月，其杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例与鸡肠道内固有菌群的比例 更加一致；杆菌球菌的比例为80:16-18 ;革兰氏阳性菌和阴性菌的比例为75:21-24 ;其嗜 酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片球菌、酵母菌和含量分别增加10%、5%、5%、10%、5%。
[0009] 本发明还提供了一种采用上述方法制备的鸡用微生态制剂。
[0010] 该微生态制剂是一种全天候、多菌属、联合、协调和叠加共同起作用的生物源性复 合制剂，无毒副作用，不存在排异反应，无药物残留，无激素残留，不产生细菌的耐药性。其 所含有效活菌含量不低于100亿个/ml ;其主要益生菌的生物活性有效期在常温下延长至8 个月。
[0011] 与本发明之前的单一菌种制剂、复合菌种制剂相比，其所含有益菌的种类更多，与 固有菌群的杆菌球菌比例、阳性菌阴性菌比例基本保持一致；能有效防治鸡幼禽肠道疾病， 尤其是对雏鸡白痢有突出的预防效果。
[0012] 另外，该微生态制剂所含主要益生菌包括嗜酸乳杆菌、丁酸梭菌、粪球菌、乳酸片 球菌、酵母菌等5种益生菌比例稍优于固有菌群；该制剂在畜禽养殖中具有以下功能：防治 畜禽肠道疾病，预防耐药性病原菌和混合感染；提高饲料转化率并降低饲料成本；提高生 产性能和肉品质；优化生态环境和降低环境污染。
【具体实施方式】
[0013] 黄豆芽加水煮沸Ih后，用8层医用纱布过滤，滤液于121°C灭菌，制得豆芽液。
[0014] 实施例1 取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0. 6g、大豆蛋白胨6g、维 生素B1O. 4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0. 5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸 镁IOg ;然后加热至l〇〇°C使之完全溶解，此时各组分均溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水 补足1000ml，再调pH值至7. 0 ;分装之后于121°C灭菌30分钟，即得培养基。
[0015] 在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容物 (简称肠容物）称重；然后按肠容物：培养基为1 :10的重量比例将肠容物加入到培养基中， 充分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按10%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培养系 统中，于41 °C静止培养36h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液按5%的 接种量接种于1吨的发酵罐(发酵罐中是与步骤2相同的培养基)中，将罐内充氮气，保持压 力为0.0210^，？!1保持在6.8-7.0，411：静止培养4811后，检测后无菌环境分装，制得本发 明的鸡用原生态制剂。常温保质期为9个月；所述常温保质期是自然温度下遮光、密闭保存 的期限。
[0016] 实施例2 取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0. 6g、大豆蛋白胨6g、维 生素B1O. 4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0. 5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸 镁IOg ;然后加热至l〇〇°C使之完全溶解，此时各组分均溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水 补足1000ml，再调pH值至7. 0 ;分装之后于121°C灭菌30分钟，即得培养基。
[0017] 在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容物 (简称肠容物)称重；然后按肠容物：培养基为1 :9的重量比例将肠容物加入到培养基中，充 分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按9%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培养系统 中，于40. 5°C静止培养37h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液按5. 5% 的接种量接种于1吨的发酵罐(发酵罐中是与步骤2相同的培养基)中，将罐内充氮气，保持 压力为0. 022MPa，pH保持在6. 8-7. 0，40. 5°C静止培养50h后，检测后无菌环境分装，制得 本发明的鸡用原生态制剂。常温保质期为8个半月；所述常温保质期是自然温度下遮光、密 闭保存的期限。
[0018] 实施例3 取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0. 6g、大豆蛋白胨6g、维 生素B1O. 4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0. 5g、葡萄糖10g、磷酸氢二钾25g，硫酸 镁IOg ;然后加热至l〇〇°C使之完全溶解，此时各组分均溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水 补足1000ml，再调pH值至7. 0 ;分装之后于121°C灭菌30分钟，即得培养基。
[0019] 在无菌环境中将符合GB/T17999-2008标准的SPF成年母鸡解剖，取其全肠内容 物(简称肠容物）称重；然后按肠容物：培养基为1 :11的重量比例将肠容物加入到培养基 中，充分搅拌之后过滤，得滤液；将滤液按11%的接种量接种于培养基中，然后置于厌氧培 养系统中，于41. 5°C静止培养35h，得鸡原籍肠道菌群种子液，并保存菌种。然后取种子液 按4. 5%的接种量接种于1吨的发酵罐(发酵罐中是与步骤2相同的培养基)中，将罐内充氮 气，保持压力为〇. 〇18MPa，pH保持在6. 8-7. 0，41. 5°C静止培养46h后，检测后无菌环境分 装，制得本发明的鸡用原生态制剂。常温保质期为8个月；所述常温保质期是自然温度下遮 光、密闭保存的期限。
[0020] 效果试验 对实施例1-3所制备的鸡用原生态制剂及用于制备该生态制剂的鸡的肠容物菌群分 别进行检测。
[0021] 检测方法：常规活菌平板计数法和厌氧活菌平板计数法 检测条件：常规微生物检测实验室 检测结果如表1 ; 表1
【权利要求】
1. 一种鸡用微生态制剂的制备方法，其特征在于，其步骤为： (1) 将SPF成年母鸡全肠内容物用9-11倍其重量的培养基稀释，然后过滤，得滤液； (2) 将滤液按9-11%的接种量接种于培养基，于厌氧培养系统、40. 5-41. 5°C静止培养 35-37h，得肠菌培养液种子液； (3) 将种子液按4. 5-5. 5%的接种量接种于发酵罐中，向罐内充氮气，保持压力为 0· 018-0. 022MPa、pH 为 6. 8-7. 0,于 40. 5-41. 5°C静止培养 46-50h。
2. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于， 步骤（1)中全肠内容物与培养基的重量比为1:10。
3. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于， 步骤（2)中滤液按10%的接种量接种于培养基，41°C静止培养36h。
4. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于， 步骤（3)中将种子液按5%的接种量接种于发酵罐中，压力为0. 02MPa、pH为6. 8-7. 0， 于41°C静止培养48h。
5. 根据权利要求1-4中任意一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)和（3)所用培 养基的制备方法：取豆芽液300ml，然后向其加入鱼粉蛋白胨8g、盐酸半胱氨酸0.6g、大豆 蛋白胨6g、维生素B 1O. 4g、牛肉膏20g、酵母浸粉2g、可溶性淀粉0. 5g、葡萄糖10g、磷酸氢 二钾25g，硫酸镁IOg ;然后加热至溶解，再搅拌至混合均匀；然后加水补足1000ml，再调pH 值至7. 0 ;于121°C灭菌30分钟即得1000ml培养基。
6. -种采用权利要求1-5中任意一项所述方法制备的鸡用微生态制剂。
7. 根据权利要求6所述的鸡用微生态制剂，其特征在于，含有效活菌含量不低于100亿 个/ml。
【文档编号】C12R1/01GK104212745SQ201410457020
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】张从敬, 黄迪海, 秦卓明, 王世荣, 刘霞, 张再辉, 徐秀荣, 盛晓丹 申请人:山东省健牧生物药业有限公司