一种猪肌肉生长促进剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种猪肌肉生长促进剂，其成分是经过化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，双链小RNA分子的正向序列为：5’-UACCCUGUAGAUCCGGAUUUGU-3’；双链小RNA分子的反向序列为：5’-AsCsAAAUCCGGAUCUACAGGsGsUsAs-Chol3’，反向序列进行化学修饰，3’端胆固醇修饰-Chol，5’端两个硫代修饰AsCs，3’端4个硫代修饰GsGsUsAs，反向序列全碱基甲基化修饰。本发明合成了促进猪肌肉生长的双链小RNA分子，其制作的猪肌肉生长促进剂能够明显促进猪的生长，抑制MSTN表达，同时在使用猪肌肉生长促进剂后猪肉质不受影响。
【专利说明】-种猪肌肉生长促进剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种肌肉生长促进剂，具体是一种具有抑制猪体内肌肉生长抑制素 (myostatin，MSTN)表达的化学合成剂，其在猪肌肉生长中起促进作用。
【背景技术】
[0002] 肌肉生成抑制素（myostatin，MSTN),又称生长分化因子8 ( growth differentiation factor 8，GDF8)，是转化生长因子 β ( transforming growthfactor β, TGF-β)超家族成员。大量实验证据表明，MSTN基因是一种对骨骼肌生长具有负调控作用 的重要的细胞因子，它的突变或缺失会导致肌肉细胞的增生和肌纤维的肥大。有研究发现 ： MSTN基因敲除使小鼠肌肉生长旺盛，肌纤维增生或肥大；该基因编码序列发生突变导致其 功能失活，使牛和狗肌肉产量明显增加。由于MSTN对哺乳动物骨骼肌的发育和生长有负调 控作用，所以通过抑制MSTN的生物活性能够提高动物的生长速度，增加肌肉的质量和肌肉 的瘦肉率，具有很好的研究前景。目前开发的MSTN抑制剂主要有MSTN阻断抗体、卵泡抑 素、MSTN前肽等一些蛋白质和多肽以及RNAi的干扰序列等抑制剂，上述抑制剂普遍存在生 产成本高、效果不稳定等缺点。MSTN抑制剂相关研究的突破将对猪、肉鸡、肉牛等畜禽生产 性能的提高具有特别重要的意义。我国猪肉年产量居世界第一，但是，目前对于猪MSTN抑 制剂的开发应用方面还很薄弱，开发MSTN抑制剂是促进猪肉生长的新途径，也是降低生产 成本的新方法之一，因此本发明通过化学合成一对特异抑制猪MSTN表达的核苷酸短链，从 抑制肌肉生成抑制素表达方面来促进猪肉生长，为保持我国商品猪高效健康养殖持续发展 奠定基础。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种促进猪肌肉的生长、肉质优良的猪肌肉生长促进剂。
[0004] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种猪肌肉生长促进剂，其成分是经过化学修饰的化学合成的双链小RNA分子， 双链小RNA分子的正向序列为：5' - UACCCUGUAGAUCCGGAUUUGU -3' ； 双链小 RNA 分子的反向序列为：5' -AsCsAAAUCCGGAUCUACAGGsGsUsAs-Chol3'， 反向序列进行化学修饰，3'端胆固醇修饰-Chol，5'端两个硫代修饰AsCs, 3'端4个 硫代修饰GsGsUsAs，反向序列全碱基甲基化修饰。
[0005] 与现有技术相比，本发明的有益效果是： 本发明是综合运用分子生物学、动物营养学和化学合成原理，在深入研究影响猪肉生 长的肌肉生长抑制素的基础上，研究开发的具有高效、稳定等特点的猪肌肉生长促进剂。本 发明生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显著，是目前比较 理想的猪肌肉生长促进剂，具有广阔的市场前景。本发明的显著优点是人工合成了促进猪 肌肉生长的双链小RNA分子，制作的猪肌肉生长促进剂能够明显促进猪的生长，抑制MSTN 表达，同时在使用猪肌肉生长促进剂后猪肉质不受影响。
【专利附图】
【附图说明】
[0006] 图1为猪肌肉生长促进剂对猪肌肉MSTN表达的影响（n=5)的柱形图。
【具体实施方式】
[0007] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0008] 实施例1 本发明实施例中，一种猪肌肉生长促进剂，其成分是经过化学修饰的化学合成的双链 小RNA分子， 双链小RNA分子的正向序列为：5' -UACCCUGUAGAUCCGGAUUUGU-3' ； 双链小 RNA 分子的反向序列为：5' -AsCsAAAUCCGGAUCUACAGGsGsUsAs-Chol3'， 反向序列进行化学修饰，3'端胆固醇修饰-Chol，5'端两个硫代修饰AsCs，3'端4个硫 代修饰GsGsUsAs，反向序列全碱基甲基化修饰。
[0009] 通过猪肌肉局部注射的方式，发挥猪肌肉生长促进剂在肌肉生长中的促进作用。 以不注射任何试剂为阴性对照组，以注射PBS为阳性对照组，以注射猪肌肉生长促进剂为 试验组，试验组注射剂量为25 μ g/g体重，连续注射7天，每天一次，注射完成后一周测定 猪体生长指标，具体结果如表1 :阳性和阴性对照组猪的增重和肌纤维密度差异不显著，与 两对照组相比，注射猪肌肉生长促进剂的试验组猪增重和肌纤维密度均显著提高。因此注 射猪肌肉生长促进剂能改善猪生长性能。
[0010] 表1猪肌肉生长促进剂对猪生长性能的影响(平均值土标准差）Π =5
【权利要求】
1. 一种猪肌肉生长促进剂，其特征在于，其成分是经过化学修饰的化学合成的双链小 RNA分子， 双链小RNA分子的正向序列为：5' -UACCCUGUAGAUCCGGAUUUGU-3' ； 双链小 RNA 分子的反向序列为：5' -AsCsAAAUCCGGAUCUACAGGsGsUsAs-Chol3'， 反向序列3'端胆固醇修饰-Chol，5'端两个硫代修饰AsCs，3'端4个硫代修饰 GsGsUsAs，反向序列全碱基甲基化修饰。
【文档编号】C12N15/113GK104195140SQ201410457628
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月10日 优先权日:2014年9月10日
【发明者】何镇东, 褚武英 申请人:长沙美日生物科技有限公司