单增李斯特菌选择性显色培养基及其制备方法
【专利摘要】本发明提供一种单增李斯特菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：心-脑提取物5-20g、琼脂2-6g、蛋白胨2-5g、特异性酶显色底物0.1-1g、二甲基甲酰胺0.05-20g、硫酸镁0.2-0.5g、氯化锂0.2-0.5g、除氧剂0.3-0.6g、3-吗啉代丙烷-1-磺酸0.2-1.0g、杂菌抑制剂6-17g、余量为水；所述特异性酶显色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸盐。本发明采用单增李斯特菌特异性显色底物制成选择性显色培养基，以低成本实现了单增利斯特菌特异性选择和显色功能，解决单增利斯特均分离培养和鉴别困难的问题。
【专利说明】单增李斯特菌选择性显色培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种适用于单增李斯特菌的选择性显色培养基，以及该选择性显色培 养基的制备方法。
【背景技术】
[0002] 李斯特菌是1926年在英国首次从家兔和豚鼠体内分离到的，并于1929年证实了 对人的致病性。该菌有6个种，分别为单核细胞增生性李斯特菌（简称单增李斯特菌，LM)、 英诺克李斯特菌、西尔李斯特菌、威尔斯李斯特菌、绵羊李斯特菌和格氏李斯特茵。其中单 增李斯特菌是人畜致病菌，绵羊李斯特菌是动物致病菌，其余无致病性。单增李斯特菌广泛 存在于土壤、动物和水产品中，其中涉及最多的食物有软质干酪、乳制品、香肠、熏鱼、生菜 食物、熟菜店的食物，以及冷冻的即食食品。因其具有独特的生理特性，能引起人类脑膜炎、 败血症等疾患，尤以妊娠期妇女、新生儿以及免疫功能低下的病人更易感染，致死率达30% 以上。近几年来，因食品污染单增李斯特菌而导致的食物中毒事件日渐增多，已引起不少国 家的广泛关注，并已被列为20世纪90年代四大食品致病菌之一，成为许多国家食品卫生的 必检项目。在我国，目前该菌也被国家质检总局列为进出口食品的必检菌或监控病原菌。
[0003] 建立简便快捷、灵敏度好、特异性高的单增李斯特菌检测技术成为众多研究者的 共同期望。目前除传统的分离培养和鉴定法外，还包括显色培养基快速鉴定法、微生物分析 法、分子生物学法、免疫学法。理想的病原体检测方法至少应该具备以下特征：易操作性、灵 敏性、特异性、快速、便宜、自动化，以及能够检测活的、具有毒力的微生物的存在。但是，到 目前为止还没有一种检测方法能够满足以上列出的所有标准。传统方法费时，工作量大，不 适应当前微生物快速、灵敏检测的需要。分子生物学检测方法与传统方法相比，虽然大大减 少了工作量，但是检测的阳性样品要以传统方法为参照，并且检测易出现假阴性和假阳性 结果。
[0004] 目前单增李斯特菌分离用的选择性培养基，包括显色培养基只能选择性的培养李 斯特菌群而不能选择性培养单增李斯特菌，而单增李斯特菌以外的李斯特菌属无致病性或 只对动物具有致病性，单增李斯特菌的微生物学鉴别需要复杂的生化反应试验，鉴别所需 时间过长，影响临床诊断和治疗。
【发明内容】
[0005] 本发明提供一种单增李斯特菌选择性显色培养基，以及该选择性显色培养基的制 备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。
[0006] 本发明首先涉及一种单增李斯特菌选择性显色培养基，其中每IOOOmL培养基含 有如下重量的组分：
[0007]
【权利要求】
1. 一种单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，其中每IOOOrnL培养基含有如下 重量的组分：
所述特异性酶显色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸盐。
2. 如权利要求1所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述特异性酶 显色底物是5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇-1-磷酸钾。
3. 如权利要求1所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述除氧剂选 自丙酮酸盐、过氧化氢、巯基乙酸盐、半胱氨酸、硫化钠或硫化亚铁。
4. 如权利要求3所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述丙酮酸盐 是其钠盐或钾盐。
5. 如权利要求3所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述、巯基乙酸 盐是其钠盐或钾盐。
6. 如权利要求1所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述杂菌抑制 剂选自萘啶酸、放线菌酮或盐酸吖啶黄。
7. 如权利要求6所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述杂菌抑制 剂是萘啶酸、放线菌酮和盐酸吖啶黄的混合物。
8. 如权利要求7所述的单增李斯特菌选择性显色培养基，其特征在于，所述杂菌抑制 剂中各组分的重量配比如下：萘啶酸〇. 01-0. 05份、放线菌酮0. 015-0. 05份、盐酸吖啶黄 6-15 份。
9. 一种制备如权利要求1-8任一项所述单增李斯特菌选择性显色培养基的方法，其特 征在于，包括如下步骤： 1) 将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液； 2) 将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、硫酸镁、氯化锂、除氧剂、3-吗啉代丙烷-1-磺酸、杂 菌抑制剂按比例混合； 3) 将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液； 4) 120°C灭菌15min后冷却，即得到所述单增李斯特菌选择性显色培养基。
【文档编号】C12Q1/04GK104388522SQ201410682559
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月24日 优先权日:2014年11月24日
【发明者】金京勋 申请人:苏州嘉禧萝生物科技有限公司