本发明涉及水产饲料的制备，尤其涉及的是一种鲤鱼饲料及其制备方法。
背景技术：
：近年来，水利工程建设、水体污染以及过度捕捞使野生鲤鱼、草鱼、鲢鱼、中华沙鳅等野生沙鳅鱼类资源日趋枯竭。人工养殖条件、人工饵料开发、苗种培育技术等方面进行了系统的研究。由于人工驯养的成本大、且养殖效果较差。本发明的目的是提供一种效果稳定可靠、见效快的水产保健饲料添加剂，具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、维持动物体内微生物菌群平衡等作用，能有效降低死亡率的发生率，促进生长，有效解决现有技术容易在畜禽体内残留并产生抗药性、给人类的食品安全带来隐患等缺陷，同时能增强免疫力，增强抗病能力。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是一种无抗生素的水产保健饲料添加剂、特别是针对草鱼和鲤鱼的养殖。本发明的技术方案如下：饲料的制备方法，其方案是将鱼粉、豆粕、次粉经超微粉碎，达到200目；将复合维生素、复合矿物质、诱食剂和羧甲基纤维素钠充分混合、均匀，然后按照少量多次添加的方法与豆粕和米糠等混合均匀，再加入鱼油和植物油混合均匀，最后加入水将饲料原料调匀成面团状，每kg饲料原料加入400g水，再采用湿法制粒机制成直径4mm的颗粒，制干。一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于由如下原料按重量份数制备而成，其中豆粕40份、米糠40份、高筋面粉40份、淫羊藿5份、维生素C2份、甘草5份、饲料酵母5份、术聚糖酶0.1份、甘露聚糖酶0.1份、植酸酶0.1份、牛磺酸1份、葡聚糖1份、壳聚糖1份、粗蛋白6份、赖氨酸5份、羧甲基纤维素钠5份、海藻酸钠5份、粗纤维5份、矿物质组成5份、植物油0.1份。根据权利要求1所述的一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于所述的矿物质中食盐占40％、磷酸二氢钠占20％、磷酸氢钙占40％。一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于按照权利要求1所述原料制成的饲料添加剂漂浮在水面，在水面上漂浮至少4-4.5小时不松散下沉。一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于提高水产动物的采食率达到20％。一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于提高水产动物的重量高达10％。一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，其特征在于提高水产动物的免疫力。实施例1、一种无抗生素的水产保健饲料添加剂的制造方法，依次进行以下步骤：1)配料按重量百分比称取豆粕40g、米糠40份、高筋面粉40g、淫羊藿5g、维生素C2g、甘草5g、饲料酵母5g、木聚糖酶0.1g、甘露聚糖酶0.1g、植酸酶0.1g、牛磺酸1g、葡聚糖1g、壳聚糖1g、粗蛋白6g、赖氨酸5g、羧甲基纤维素钠5g、海藻酸钠5g、粗纤维5g、矿物质组成5g。经常规测试获知：该加鱼饲料配方中碳水化合物合计占了10％，粗脂肪占18％。碳水化合物的10％主要来自高筋面粉和豆粕，粗脂肪的18％主要来自鱼粉和鱼油。2)粉碎将鱼粉、豆粕、酵母、磷酸氢钙、维生素及矿物质等预混料、高筋面粉进行第一次混合，混合时间在120-180秒；然后进行粉碎，使上述粉碎后的物料能通过40-60目的筛网。将上述粉碎后的物料，再进入立式无筛超微粉碎机中进行超微粉碎，使超微粉碎后的物料的细度能达到80目筛网通过率为99.5％，100目的筛网通过率为97％，160目的筛网通过率为90％。3)混合将步骤2)所得的超微粉碎后的物料与卵磷脂油、鱼油、竹叶黄酮、茵陈、罗布麻和柴胡一起送入双轴桨叶式混合机中，在210rpm/min的转速下，混合300秒。4)调质将步骤3)所得的混合均匀的物料进入双轴异径差速式变频调质器中，加入占上述物料总重23％的水，在主轴240rpm/min的转速下，控制调质温度为85℃，调制时间为5分钟。5)膨化将调质好的物料进入双轴膨化机中，控制螺杆组件的转速为210rpm/min，物料在膨化腔内的受热温度为喂料区50℃、揉合区60℃、成型区55℃，物料的流速为46.6kg/min。从而使所得的膨化后的体积质量为403.2公斤/立方米的颗粒，膨化度为1.2。6)造粒将上述步骤5)所得的膨化料制成颗粒度为直径6mm的颗粒饲料。7)烘干采用卧式内循环四层网带式烘干箱，将上述步骤6)所得的颗粒饲料在80℃烘干45min，从而成品料的水份差异在0.5％以内。8)喷油、冷却、包装再按照常规工艺在颗粒饲料表面喷油(普通食用油)，冷却至常温，即得缓沉饲料；最后进行包装。将上述实施例1所得的-饲料采用投饵机投喂。投饵于水面后，观察摄食的效果。本发明的无抗生素的水产保健饲料添加剂提高了鱼类养殖的成活率、形成养殖规模化，降低饵料成本。本发明提供了一种无抗生素的水产保健饲料添加剂及其制备方法，具有以下优点：1、本发明的无抗生素的水产保健饲料添加剂具有较好的抗菌、抗病毒、维持动物体内微生物菌群平衡等作用，能有免疫力效降低疾病的发生率，促进生长，减少养殖投入；2、本发明无抗生素的水产保健饲料添加剂是采用中药与酶制剂和矿物质筛选而成，条件温利，保护了中药活性成分免遭破坏，同时可能某些有效成分含量增加及产生新的药效成分，产品能提高药物疗效、扩大适应症、减少服用剂量；3、本发明无抗生素的水产保健饲料添加剂是采用木聚糖酶、海藻糖酶、甘露聚糖酶等，使得中药中的纤维素、木质素等不易吸收的物质能充分降解，使中药有效成分得以最大限度的释放，同时可将纤维素转化成低聚糖，促进了动物胃肠道内有益菌的生长；同时在所产生的各种酶的作用下，饲料中的有效成分更易被动物吸收利用；4、本发明无抗生素的水产保健饲料添加剂是一种利用中药和酶制剂的相互作用研制的新型饲料添加剂，有着无可比拟的优势，它具有无毒副作用、无污染、无残留、不产生耐药性等安全性特点；5、本发明无抗生素的水产保健饲料添加剂见效快、效果稳定可靠，能够满足人们对肉、蛋、奶安全生产的要求；6、本发明无抗生素的水产保健饲料添加剂还可以通过提高其使用剂量，作为兽药应用，对预防和治疗畜禽各种病毒、细菌、寄生虫感染引起的腹泻均有显著的疗效。具体实施方式实施例1、一种无抗生素的水产保健饲料添加剂的制造方法，依次进行以下步骤：1)配料按重量百分比称取豆粕40g、米糠40份、高筋面粉40g、淫羊藿5g、维生素C2g、甘草5g、饲料酵母5g、木聚糖酶0.1g、甘露聚糖酶0.1g、植酸酶0.1g、牛磺酸1g、葡聚糖1g、壳聚糖1g、粗蛋白6g、赖氨酸5g、羧甲基纤维素钠5g、海藻酸钠5g、粗纤维5g、矿物质组成5g。经常规测试获知：该加鱼饲料配方中碳水化合物合计占了10％，粗脂肪占18％。碳水化合物的10％主要来自高筋面粉和豆粕，粗脂肪的18％主要来自鱼粉和鱼油。2)粉碎将鱼粉、豆粕、酵母、磷酸氢钙、维生素及矿物质等预混料、高筋面粉进行第一次混合，混合时间在120180秒；然后进行粉碎，使上述粉碎后的物料能通过40-60目的筛网。将上述粉碎后的物料，再进入立式无筛超微粉碎机中进行超微粉碎，使超微粉碎后的物料的细度能达到80目筛网通过率为99.5％，100目的筛网通过率为97％，160目的筛网通过率为90％。3)混合将步骤2)所得的超微粉碎后的物料与卵磷脂油、鱼油、竹叶黄酮、茵陈、罗布麻和柴胡一起送入双轴桨叶式混合机中，在210rpm/min的转速下，混合300秒。4)调质将步骤3)所得的混合均匀的物料进入双轴异径差速式变频调质器中，加入占上述物料总重23％的水，在主轴240rpm/min的转速下，控制调质温度为85℃，调制时间为5分钟。5)膨化将调质好的物料进入双轴膨化机中，控制螺杆组件的转速为210rpm/min，物料在膨化腔内的受热温度为喂料区50℃、揉合区60℃、成型区55℃，物料的流速为46.6kg/min。从而使所得的膨化后的体积质量为403.2公斤/立方米的颗粒，膨化度为1.2。6)造粒将上述步骤5)所得的膨化料制成颗粒度为直径6mm的颗粒饲料。7)烘干采用卧式内循环四层网带式烘干箱，将上述步骤6)所得的颗粒饲料在80℃烘干45min，从而成品料的水份差异在0.5％以内。8)喷油、冷却、包装再按照常规工艺在颗粒饲料表面喷油(普通食用油)，冷却至常温，即得缓沉饲料；最后进行包装。将上述实施例1所得的-饲料采用投饵机投喂。投饵于水面后，观察摄食的效果。实验1、养殖效果2009年6月1日起在北京门头沟养殖示范基地进行了为期5个月的养殖实验，以行业通用配方和行业通用膨化制备工艺与本发明配方和本发明膨化制备工艺，准备四组对比饲料分10个平行实验池对比，每组饲料分两个池养殖实验。具体如下：行业通用配方+行业通用制备工艺组，设为试验A组(即市售普通配方饲料)；行业通用配方+本发明机器及制备工艺组，设为试验B组；本发明配方+行业通用制备工艺组，设为试验C组；本发明配方+本发明机器及制备工艺组，设为试验D组；养殖对比组。结合实际生产情况将工艺制备参数和配方参数进行适应性调整以能生产符合要求的饲料为准。行业通用配方：鱼粉60％、虾(蟹)类加工副产物2％、豆粕5％、啤酒酵母3％、磷酸二氢钙1.5％、维生素及矿物质预混料3.5％、面粉20％、卵磷脂油1％、鱼油3％、竹叶黄酮0.15％，茵陈0.45％，罗布麻0.2％，柴胡0.2％。经常规测试，该饲料配方中碳水化合物含量19.7％，粗脂肪含量为9.8％。A组颗粒99％悬浮于水面，8小时以上不下沉，松松散溶解。B组颗粒70％悬浮于水面4时以上，30％颗粒在1小时左右快速下沉。C组颗粒90％在30秒快速下沉，10％颗粒在5分钟内快速下沉。均不符合缓沉饲料的要求。D组颗粒90％在4小时无沉降，不松散；5小时有40％快速下沉，不松散；8小时100％颗粒快速下沉不松散。本发明的最佳投饵率为：八两以下小于1.4％，八两以上为1.1％，平均小于1.2％。结果发明：在同日起捕的前提下，使用本发明的饲料(实施例1)后，A组采食率50％、B组采食率42％、C组采食率10％、D组采食率80％，D组采食率最高，经过饲养初始体重为200克左右的鲤鱼在11月15日起捕重量可达820克，饲料系数1∶1，经解剖，肝脏组织正常健康，具体数据如下表1所示。表1经解剖，肝脏组织正常健康。具体数据如下表2所示。表2结果如表3所示；表明饲喂不同饲料生鱼的增重率及摄食率依次为：D＞C＞B，其中D组生鱼的增重率和摄食率显著高于D组(P＜0.05)，饲料系数D组显著低于B组(P＜0.05)。表3实验组增重率摄食率饲料系数B202.81±2.36a0.26±0.01a0.96±0.01bC213.29±9.49ab0.29±0.01ab0.90±0.02abD240.17±17.60b0.31±0.01b0.86±0.01a结果如表4所示；表明饲喂不同饲料生鱼的增重率依次为：D＞C＞B＞A，存活率依次为D＞A＞C＞B；其中D组生鱼的增重率和存活率显著高于其他组(P＜0.05)。表4DCBA初重(g)0.620.620.620.62存活率(％)95797585增重率(％)1183.77±12.27b1072.43±11.09982±10.23867±5.36饲料系数1.11.61.71.7实施例2、按照实施例1的制造方法和配方制造一种无抗生素的水产保健饲料添加剂，依次进行以下试验：(一)材料与方法1、材料试验用鱼360尾试验鱼购于兴海农场。白色葡萄球菌由华南农业大学兽医学院提供，溶壁微球菌(Micrococuslysodeikticus)由中国药用微生物菌种保藏中心提供(CPCC100045)，嗜水气单胞菌株(Aeromonashydrophila)购于sigma公司。菌经活化、接种草鱼证实其毒力后用于攻毒试验。试验饲料选取本发明中实施例1中C、D组配制的饲料，空白饲料为未添加本发明预混料的基础饲料，饲料为广州海维饲料有限公司生产的草鱼成鱼颗粒料。设置E组为甘草5g、淫羊藿5g、牛磺酸1g、葡聚糖1g、壳聚糖1g，2、方法试验分组及饲养管理选取健康、大小均匀的草鱼(100±10.04g)，设3个处理(对照组、C组、D组)，每个处理设置3个重复。每组60尾草鱼，分养于循环水族箱中，用基础饲料投饲驯化到鱼主动抢食为止，驯化时间为15d，正式养殖时间为45d，每天投喂3次，时间分别为9：00，13：00，18：00，投饲率为鱼体重的3％～5％，每周调整一次投饲率，试验期间水温为(20±4)℃，水PH值6.8～7.4，溶氧＞5.5mg/L，氨氮≤0.2mg/L。测定指标与方法1)生长性能指标测定试验开始及结束时分别对水族箱中的鱼进行称重并记录其初重(g)及末重(g)，计算增重率、饵料系数。增重率＝(末重-初重)(g)/初重(g)×100％饵料系数＝总投饲量(g)/(末重-初重)(g)试验结束时剖检鱼，并分离出各脏器，测定脏体比、肝体比。脏体比＝内脏总重(g)/体重(g)；肝体比＝肝脏重量(g)/体重(g)。3)免疫细胞活性测定饲喂15d后开始进行各项免疫指标的测定。从草鱼尾静脉处抽血，加入事先放有1％无菌肝素的离心管中，上下颠倒几次，待静脉血与肝素混合均匀后备用。(1)淋巴细胞转化率取0.5mL抗凝血，无菌操作加入含有PHA(植物血凝素)营养液的小瓶内混合，37℃恒温培养，3～4d后去上清液，加入37℃预温的0.87％的NH4CL溶液3mL，溶解红细胞，离心、制片，根据淋巴细胞转化的形态特征采用形态学观察200个淋巴细胞，计算淋巴细胞转化率。淋巴细胞转化率＝100％×(过渡型细胞+母细胞)/淋巴细胞总数(2)红白细胞数红细胞：取20μL全血用生理盐水稀释200倍后，在Neubauer计数板上计数。白细胞：取20μL抗凝血加入盛有380μL白细胞稀释液(97mL蒸馏水加入冰醋酸3mL和3滴1％亚甲兰)的试管中，溶解全部红细胞后，取白细胞悬液，低倍镜下计数。(3)白细胞吞噬指数和吞噬率白色葡萄球菌活化后用福尔马林灭活制成1.2×108个/mL的菌悬液，往0.1mL抗凝血中加入0.05mL上述菌悬液，充分混匀，25℃恒温水浴孵育60min，每隔10min摇动1次，1000rpm离心5min，用吸管吸取白细胞层涂片，每个样品涂3张，快干时滴甲醇固定约8min，蒸馏水冲洗后，用Wright氏染色液染色15min，自来水冲洗后再用蒸馏水冲洗，晾干后用镜观察。白细胞吞噬指数(PI)＝100个多核型白细胞中含菌总数/100。吞噬率(PP)＝(100个吞噬细胞中参与吞噬的细胞数/100)×100。(4)巨噬细胞活性参照白细胞吞噬指数方法用Wright氏染色，Giemsa复染，镜检，光镜下计数200个巨噬细胞。吞噬指数＝200个巨噬细胞中所吞噬的菌体总数/200。4)血液、体液免疫成分及活性检测从每个水族箱随机取5尾鱼，于尾静脉取血，将所抽取的全血4℃放置2h后，在4℃、3500rpm条件下离心30min，取上清液置于-20℃，备用。(1)血清溶菌酶活性以溶壁微球菌冻干粉为底物，用0.1mol/LpH6.4的磷酸钾缓冲溶液配成底物悬液，取200μL该悬液与20μL待测血清于96孔酶标板中混匀，于570nm处测其A0值，然后将酶标板取出，置于37℃水浴中温浴10min后立即冰浴终止反应，再测其A值。溶菌酶活力：XLSZ＝(A0-A)/A(2)超氧化物歧化酶活力用总SOD法测定。SOD活力(U/mL)＝[(A0-A)/A]/50％×反应体系稀释倍数×样本体积(3)碱性磷酸酶活力试剂盒法测，由南京建成生物技术研究所生产。碱性磷酸酶(金氏单位/100mL)＝(测定管OD值/标准管OD值)×标准管含酚的量(0.005mg)×2000(4)血清补体活性在盛有0.5mL致敏羊红细胞(SRBC)的试管中，加入0.5mL鱼血清(空白对照组加入0.85％的NaCL溶液，全溶对照组加入0.04％氨溶液)，使血清的终浓度为3％，置于培养箱中38℃孵育60min，2000rpm离心10min，取上清液，用紫外可见光光度计在541nm下测光密度值(A)。(5)血清和粘液中IgM水平测定用酶联免疫吸附法测定。5)攻毒试验试验在饲喂25d后进行，在各水族箱中取15尾鱼进行攻毒试验。嗜水气单胞菌的攻毒浓度为6×105个/mL，在背鳍下方肌肉丰满处，用针沿鳞片方向向前刺入肌肉，深度1～2cm。攻毒后将鱼饲喂在另外同样条件的水族箱内，随时观察记录结果。成活率＝(攻毒试验结束存活鱼数/攻毒试验开始鱼总数)×100％相对成活率(RPS)＝[1-(免疫组死亡率/对照组死亡率)]×100％二、结果1、生长性能指标测定项目对照组C组D组初均重(g)104±0.3103±0.5103±0.8末均重(g)448±2.3478±3.1486±2.1增重率(％)206.12±2.07a238.88±5.89b239.45±7.01ab脏体比0.092±0.002a0.094±0.002a0.094±0.004a肝体比0.176±0.002a0.021±0.015b0.019±0.019b饲料系数1.235±0.048a1.145±0.081b0.919±0.027b同一行的平均值具有不同上标字母者表示差异显著(P＜0.05)。由上表可得知，本发明实施例与对照组在增重率、肝体比、饵料系数上存在着显著差异，而实施例之间不存在显著差异，说明本发明药物可以加快草鱼生长速度，提高饲料消化吸收率，降低养殖成本。2、免疫细胞活性测定项目对照组C组D组淋巴细胞转化率(％)7.57±0.25a75.04±0.23b78.59±0.43b红细胞数(*108个/ml)2.92±0.248a3.25±0.045a3.57±0.027a白细胞数(*108个/ml)6.78±0.215a7.82±0.03b8.45±0.17b白细胞吞噬指数1.204±0.082a1.523±0.077b1.981±0.023b白细胞吞噬率(％)46±0.4a62±3b68±4b巨噬细胞活性0.015±0.018a0.025±0.017b0.029±0.012b同一行的平均值具有不同上标字母者表示差异显著(P＜0.05)。由上表可得知，与对照组相比，本发明实施例在淋巴细胞转化率、白细胞数、白细胞吞噬力、巨噬细胞活性方面具有更好的效果，证实了本发明在激活免疫体系，增强免疫细胞吞噬能力方面具有显著效果，有助于增强机体的免疫力。3、血液、体液免疫成分及活性检测同一行的平均值具有不同上标字母者表示差异显著(P＜0.05)。与对照组相比，发明实施例在血清溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、碱性磷酸酶活力、血清补体活性等几个重要的血清免疫指标上具有显著优势，能够更多激发免疫相关各种酶类的活性，提高抗体水平，增强机体抵抗力。同时E组的配方在能够增强免疫力方面不如C组或D组。4、攻毒试验经嗜水气单胞菌攻毒后，各组对草鱼的免疫保护率见下表。结果表明，本发明饲料能够显著提高草鱼对嗜水气单胞菌攻毒的免疫保护率，经卡方检验，各试验组与对照组差异极显著，但各试验组间差异不显著。项目对照组C组D组草鱼尾数(尾)606060死亡数(尾)20155死亡率(％)33.3258.3保护率(％)66.77591.7通过养殖试验证明：本发明的配合饲料能满足草鱼的全部营养需求，草鱼生长迅速，饲料转化率高，饲料系数0.9-1.1，与普通饲料相比，它能明显减少草鱼发病率，提高草鱼生长性能。在草鱼全周期使用该免疫增强型饲料，能使草鱼成活率提高50-80％，饲料利用率提高10-25％。当前第1页1 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